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- 百奥莱博
- 北京
- WE0228-EUG
- 2025年07月09日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
长期
- 英文名：
NGS Fast DNA Library Prep Set for Ion Torrent
- 库存：
321
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售")，产品线涵盖WE0228型二代测序DNA快速建库试剂盒(Ion Torrent平台)销*(代"售")在内的分子生物学试剂产品，还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。
名称：WE0228型二代测序DNA快速建库试剂盒(Ion Torrent平台)销*(代"售")
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
编号：WE0228
规格：24次|96次
本试剂盒提供了构建DNA文库需要的酶预混体系及反应缓冲液，包含除接头以外的所有成分，制备的文库可用于Ion torrent PGM、Ion Proton二代测序平台的测序。和常规建库方法相比，该试剂盒将多个步骤进行了合并，省略了多个纯化步骤，因此显著降低了起始模板DNA的最少需求量，缩短了文库构建时间。另外，试剂盒采用高保真DNA聚合酶进行文库富集，无偏好的PCR扩增，扩大了序列的覆盖区域，可高效的制备用于Ion torrent二代测序平台的DNA文库。
试剂盒组成：
| 组份 | 24次 | 96次 |
| 10×End Repair Buffer | 200μl | 800μl |
| End Repair Enzyme Mix | 48μl | 192μl |
| Ligation and Nick Repair Buffer | 400μl | 2×800μl |
| T4 DNA Ligase | 48μl | 192μl |
| Bst DNA Polymerase | 48μl | 192μl |
| 2×HiFidelity PCR Mix | 600μl | 2×1.2ml |
| 10×Primer Mix(5μM each) | 150μl | 600μl |
自备仪器、试剂和耗材：
1、磁力架：建议使用Life公司磁力架。
2、DNA纯化回收试剂盒：建议使用百奥莱博磁珠法DNA纯化回收试剂盒(WE0205)。
3、样本接头引物试剂盒。
4、无水乙醇，EB(10 mM Tris-HCl, pH 8.0)，去离子水(pH 在7.0-8.0之间)。
5、反应管：建议使用低吸附的PCR管与1.5ml离心管；枪头：建议使用高质量过滤枪头防止试剂盒、文库样本污染。
实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、避免试剂盒中Buffer的反复冻融，建议首次使用时将Buffer进行分装保存。酶在使用完应尽快放回-20℃保存，
2、PCR产物因操作不当极易产生污染，导致实验结果不准确，建议将PCR反应体系配制区与PCR产物纯化区隔离，并使用专门的移液器，定期对各实验区域进行清洁。
DNA建库流程示意图：
起始材料：5ng-1μg打断的双链DNA，溶于EB(10 mM Tris-HCl pH 8.0)或去离子水中，DNA纯度要求：OD260/OD 280=1.8-2.0。
DNA末端修复反应：
1、向200μl PCR管中加入以下成分，用枪头将上述溶液轻轻混匀，瞬时离心使所有组分收集到管底。
| 试剂 | 体积 |
| 10×End Repair Buffer | 6μl |
| End Repair Enzyme Mix | 2μl |
| fragmented DNA | X(10ng～1μg) |
| RNase-Free Water | Up to 60μl |
2、将管子置入PCR仪中，热盖打开，反应程序如下：
20 min @ 25℃
10 min @ 70℃
Hold on 4℃
Adaptor 连接：
建议使用百奥莱博adaptor进行连接，也可选择使用Life、Kapa公司的adaptor，具体连接方法可参考各公司的产品使用说明书。以下为使用百奥莱博adaptor进行连接的操作步骤：
1、向上述反应液中直接加入以下试剂, 用枪头将上述试剂混匀，短暂离心，使溶液收集到管底。
| 试剂 | 体积 |
| Ligation and Nick Repair Buffer | 10μl |
| T4 DNA Ligase | 2μl |
| Bst DNA Polymerase | 2μl |
| Adaptor A | 7μl |
| Adaptor P1 | 7μl |
| RNase-Free Water | 12μl |
| Total volume | 40μl |
注意：建议Adaptor的加入量与DNA片段的摩尔比为10:1-20:1，具体Adaptor的使用浓度请参照下表。如果DNA量为10-100ng, adaptor建议使用浓度为1μM(小于260 bp)或 0.5μM(300-400 bp)。
| 插入DNA 量/反应 | 不同大小DNA 建议Adaptor 使用浓度 | |||
| 130 bp | 260 bp | 320 bp | 410 bp | |
| 1μg | 10μM | 10μM | 5μM | 5μM |
| 500ng | 5μM | 5μM | 2.5μM | 2.5μM |
| 100ng | 1μM | 1μM | 0.5μM | 0.5μM |
2、反应步骤：
15 min @ 25℃
5 min @ 65℃
Hold on 4℃
Adaptor连接DNA片段的选择性回收：
构建不同大小的DNA文库时，需进行DNA片段的选择性回收。若起始样本量低于50ng，不建议进行DNA片段选择性回收。可参考另一种方案，直接进行DNA片段的纯化。建议使用百奥莱博磁珠法DNA纯化回收试剂盒(WE0205)进行DNA片段选择性回收。若使用除百奥莱博以外厂家的磁珠，需自行摸索最佳磁珠用量。以下操作步骤采用百奥莱博磁珠法DNA纯化回收试剂盒，可选择回收DNA片段长度范围为310-370bp(读长为200bp)，反应起始体积为100μl。
1、涡旋振荡MCPure 20秒，使其彻底混匀为均一溶液；
2、将100μl adaptor连接反应缓冲液转移至一新的1.5ml离心管中；
3、加入60μl混合均匀的MCPure，涡旋震荡5秒钟后室温静置5分钟；
4、短暂离心，将离心管置于磁力架上，使磁珠和上清溶液分离，直至溶液澄清(约需5分钟)，小心地将上清溶液转移至新的1.5ml离心管中,并弃去磁珠；
注意：不要弃除上清。
5、向上清中加入20μl混合均匀的MCPure，涡旋震荡5秒钟后室温放置5分钟；
6、短暂离心，将离心管放于磁力架上，使磁珠和上清溶液分离，直至溶液澄清(约需5分钟)，小心移取上清并弃除，期间避免接触结合目标DNA的磁珠；
注意：不要弃除磁珠。
7、继续保持离心管固定于磁力架上，向离心管中加入250μl新配置的80%乙醇，室温放置30秒，待悬起的磁珠完全吸附后，小心弃除上清；
8、重复步骤7；为彻底移除残留液体，可将离心管短暂离心后，再次移除残留液体。
9、保持离心管固定于磁力架上，室温静置5分钟，使磁珠在空气中干燥；
10、将离心管从磁力架上取下，加入25μl 10 mMTris-HCl(pH 8.0)或去离子水(自备)，涡旋振荡使磁珠完全重悬于洗脱液中，室温静置5分钟；
11、短暂离心，将离心管放于磁力架上直至溶液澄清(约需5分钟)，将25μl洗脱液转移至一个新的PCR管中；
另一种方案：Adaptor连接DNA片段的全部回收：
1、涡旋振荡MCPure20秒，使其彻底混匀为均一溶液。
2、将adaptor连接反应液转移至一新的1.5ml离心管中。
3、加入1倍样品体积的MCPure，涡旋震荡5秒钟后，室温静置5分钟。
4、短暂离心，将离心管放于磁力架上，使磁珠和上清溶液分离，直至溶液澄清(约需5分钟)，小心吸取上清并弃除，期间避免接触已结合目标DNA的磁珠。
注意：不要弃除磁珠。
5、继续保持离心管固定于磁力架上，向离心管中加入250μl新鲜配置的80%乙醇，室温放置30秒，待悬起的磁珠完全吸附后，小心弃除上清。
6、重复步骤5。为彻底移除残留液体，可将离心管短暂离心后，再次移除残留液体。
7、保持离心管固定于磁力架上，室温静置5分钟，使磁珠在空气中干燥。
8、将离心管从磁力架上取下，加入25μl EB(自备)或去离子水，涡旋振荡使磁珠完全重悬于洗脱液中，室温静置5分钟。
9、短暂离心，将离心管放于磁力架上直至溶液澄清(约需5分钟)，将25μl洗脱液转移至一个新的PCR管中。
PCR富集：
1、在PCR管中加入以下试剂并混匀：
| 试剂 | 体积 |
| 连接adaptor后的DNA片段 | 20μl |
| 2×HiFidelity PCR Mix | 25μl |
| 10×Primer Mix(5μM each) | 5μl |
| 总体积 | 50μl |
2、PCR反应条件：
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 98℃ | 30s | |
| 变性 | 98℃ | 10s | 4～12个循环 |
| 退火 | 65℃ | 30 s | |
| 延伸 | 72℃ | 30 s | |
| 终延伸 | 72℃ | 5min |
注：样本量为1ug时，4-6个cycles，样本量100ng时6-8个cycles，样本量为10ng时10-12个cycles。PCR循环数可根据实验进行优化。
PCR产物的纯化：
1、涡旋振荡MCPure20秒，使其彻底混匀为均一溶液；
2、将PCR反应液转移至一新的1.5ml离心管中；
3、加入1倍样品体积的MCPure，涡旋震荡5秒钟后室温静置5分钟；
4、短暂离心，将离心管放于磁力架上，使磁珠和上清溶液分离，直至溶液澄清(约需5分钟)。小心移取上清并弃除，期间避免接触结合目标DNA的磁珠；
注意：不要弃除磁珠
5、继续保持离心管固定于磁力架上，向离心管中加入250μl新鲜配置的80%乙醇，室温放置30秒，待悬起的磁珠完全吸附后，小心弃除上清。
6、重复步骤5；为彻底移除残留液体，可将离心管短暂离心后，再次移除残留液体。
7、保持离心管固定于磁力架上，室温静置5分钟，使磁珠在空气中干燥。
8、将离心管从磁力架上取下，加入25μl EB(自备)或去离子水，涡旋振荡使磁珠完全重悬于洗脱液中，室温静置5分钟，短暂离心，将离心管放于磁力架上直至溶液澄清(约需5分钟)，将25μl洗脱液转移至一个新的PCR管中，DNA文库在-20℃保存。
储存条件：-20℃
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2,4,6-三甲基*甲酰二*氧磷 Phenylfluorone 75980-60-8
9041-08-1 肝素* Heparin
ARB12918 小鼠白细胞介素2(IL-2)ELISA代测服务 Mouse interleukin 2,IL-2 ELISA KIT
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9048-71-9 葡聚糖凝胶G-50 Sephadex G-50medium
DNA Marker（250-10000bp） 100次
BTN81213 Tricine-SDS-PAGE上样液 Tricine-SDS-PAGE Loading Buffer
邻硝基*(代"*")-α-D-吡喃葡萄糖苷 TTHA
ARB12315 大鼠吡*(代"啶")交联物(PY)elisa检测操作说明书 Rat pyridinium crosslink/pyrilinks,py ELISA KIT
ARB13104 小鼠骨形成蛋白(BMPs)定量分析 Mouse bone morphogenetic proteins,bmps ELISA KIT
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ARB12534 大鼠透明质酸结合蛋白(HABP)ELISA检测服务 Rat hya]uronate binding protein,habp ELISA KIT
固紫B Benzylideneacetone 14726-28-4
WE0228型二代测序DNA快速建库试剂盒(Ion Torrent平台)销*(代"售")关键词：WE0228,NGS Fast DNA Library Prep Set for Ion Torrent,二代测序DNA快速建库试剂盒(Ion Torrent平台)
·一步法快速WB试剂盒(兔源一抗)
编号：WE0298
英文名称：One Step Western Kit HRP(Rabbit)
规格：50次
本试剂盒是百奥莱博最新研发的Western Blot检测试剂盒，能够在1小时左右得到高质量的Western Blot结果，且操作简便、检测灵敏度高、背景低、不需再加入二抗、系统稳定性强。常规的Western Blot间接法检测过程(封闭、一抗结合和二抗结合)需要较长的时间，实验流程复杂且需要多步条件优化。胶上的蛋白转移到载体膜上后，使用试剂盒中的封闭液孵育5 min，再用抗体反应液处理后的一抗孵育载体膜，经洗涤三次(每次5 min)后，即可进行发光或显色检测。本试剂盒针对目的蛋白一抗为兔来源的实验系统使用。
| 组份 | 50次 |
| Blocking Buffer |
500ml |
| Antibody Pretreat Solution(HRP/Rabbit) | 5×1ml |
| Dilution Buffer | 500ml |
| Wash Buffer(10×) | 500ml |
注意事项：
1、客户需自己准备兔来源的一抗。
2、使用Blocking Buffer封闭液、Antibody Pretreat Solution(HRP/Rabbit)抗体反应液(兔)、Wash Buffer(10×)漂洗液之前请充分混匀。
3、漂洗液如在2～8℃保存时出现沉淀，请恢复到室温，把沉淀溶解后正常使用，1×漂洗液可在室温保存一个月。
4、建议转膜完成后用丽春红等试剂染色，并把膜上多余部分剪去以增加试剂的使用效率。
5、一抗和抗体反应液HRP(兔)需要通过预实验来确定最佳的稀释用量。
6、抗体反应液HRP(兔)、抗体稀释液和抗体用量可根据膜的大小按比例放大或减少。
7、加入一抗的抗体稀释液可以回收重复使用一次。特异性及亲和力低的抗体不建议重复使用。回收后抗体如在1-2天内使用放置在2～8℃，长期保存请在-20℃冻存，避免多次反复冻融。
8、如果存在较高背景的情况，请调整抗体的用量，并增加洗膜次数。
9、试剂盒内所有试剂请于2～8℃保存，避免冻融。
操作步骤：
本产品适用于转膜完成后的封闭及抗体孵育步骤，以5cm×8cm 膜为例：
1、漂洗液准备：取10ml Wash Buffer(10×)用蒸馏水稀释至100ml，即为1×Wash Buffer，待用。每次洗膜用8-10ml。
2、封闭：转膜完成后，将膜浸没到10ml Blocking Buffer中，室温封闭5分钟。
3、漂洗：倒掉封闭液，加入8-10ml 1×Wash Buffer，于摇床上用较大速度漂洗1分钟。
4、洗膜的同时可准备抗体孵育液：取Antibody Pretreat Solution(HRP/Rabbit)100μl到离心管中，加入兔源一抗3-10μg，枪头吸打至充分混匀，室温孵育5分钟。加入至10ml Dilution Buffer中，充分混匀。
注意：
1)一抗的用量也可根据抗体的稀释度来进行调整。以抗体的最终稀释度1:1000为例，取100μl抗体反应液HRP(兔)到EP管中，加入10μl一抗，加入到10ml 抗体稀释液中，充分混匀，室温孵育5分钟。
2)如果膜面积较小，可按比例减少抗体、反应液及稀释液的用量。
5、完成步骤3后，倒掉漂洗液，将一抗、Antibody Pretreat Solution(HRP/Rabbit)及Dilution Buffer混合而成的抗体孵育液加到膜上(确保孵育液完全浸没膜表面)，在摇床上以60 rpm左右的速度室温孵育40分钟。
6、弃去(回收)抗体孵育液，用配制的1×Wash Buffer漂洗3-5次，每次3分钟。
7、进行后续检测。建议采用ECL或者DAB法进行检测。
应用实例：
实例一 抗原为293T细胞全裂解液
A：普通WB对照：beta-actin兔多抗 3.3ug 室温孵育40min，洗膜后二抗羊抗兔-HRP(WE0394)1：10000稀释，室温40min，ECL(WE0308)曝光
实例二 抗原为293T细胞全裂解液
C：普通WB对照：PAK1，Epitomics兔单抗1：1000 室温孵育40min，洗膜后二抗羊抗兔-HRP(WE0394)1：10000稀释，室温40min，ECL(WE0308)曝光
D：一步法WB： Epitomics兔单抗1：1000 室温孵育40min，ECL(WE0308)曝光。
常见问题及解决方法：
| 问题 | 可能原因 | 解决方案 |
| 信号太弱或者 看不到条带 |
蛋白上样量太少 | 进行SDS-PAGE电泳时加大上样量。 |
| 蛋白转膜效率太低 | 优化转膜时间或者电流，确保转膜时膜与胶之间没有气泡。 | |
| 一抗亲和力较低 | 增加膜在溶液中的孵育时间或者增加抗 体浓度可以增加信号 |
|
| 一抗亲和力较低 | 对于低亲和力抗体来说，减少洗膜时间可以增加信号。由每次10 分钟，减少到每次5分钟可以增加信号。 | |
| 背景偏高 | 一抗使用过量 | 减少一抗的使用量。 |
| 一抗有非特异性结合或者 与封闭试剂有交叉反应 |
使用和二抗来源一致的血清或者无IgG的BSA。 | |
| 洗膜时间太短 | 增加洗涤的步骤可以进一步的降低背景。 | |
| 曝光显影时间过长 | 减少曝光时间。如果信号和背景都高，可以等待一段时间 ，等背景信号减弱后，再进行曝光。 |
|
| 容器或者试剂被污染 | 每次洗涤的时候使用清洁的容器。带手套，使用清洁的镊子处理膜。 |
储存条件：2～8℃保存，避免冷冻
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·丽春红染色试剂
编号：WE0305
英文名称：Ponceau Stain Reagent
规格：100ml
丽春红为常用蛋白质染色剂。试剂本身带负电荷，既可与带正电荷的*基酸残基相结合，也可与蛋白质非极性区结合，从而在印迹膜上形成清晰的红色条带；同时这种结合具有可逆性，染色后可用蒸馏水、PBS缓冲液或其它适当溶液进行漂洗脱色，对后续实验不产生影响。本产品可用于检测Western Blot实验中PVDF或NC膜上蛋白，以检测蛋白的转膜效率；具有灵敏度高，使用方便等优点。
注意事项：
1、丽春红染色试剂不适用于尼龙膜上的蛋白的检测。
2、使用本品时，请穿着实验服并佩戴手套进行操作。
3、本产品仅用于科研，不能用于人体实验或人体治疗。
操作步骤：
1、蛋白转移完毕后，将PVDF或NC膜完全浸没在Ponceau Stain Reagent(丽春红染色液)中，摇动染色3-5分钟。
2、使用纯水、PBS缓冲液或其它适当溶液对印迹膜进行漂洗2-3次，每次3-5分钟，去除未与蛋白结合的染料，直至膜上出现清晰条带。
3、检测结束后，再次使用纯水，PBS缓冲液或其它适当溶液对印迹膜进行漂洗2-3次，每次3-5分钟，去除与蛋白结合的丽春红染料。
4、按照正常步骤，进行后续的Western Blot检测。
储存条件：室温
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文献和实验相关实验
全新药物心肌毒性筛选平台 罗氏RTCA Cardio Instrument
心脏毒性是药物开发和化合物筛选最需要考虑的因素之一。自1981年以来，已经有至少10几种畅销药物，因在销售过程中发现具有心脏毒性而被撤回，给制药公司带来了巨大经济损失及严重市场影响。同时在药物研发过程中，心脏毒性也成为药物研发失败的主要因素之一。 在这种情况下，心脏毒性的检测已成为药物研发中必不可少的一个环节。但包括膜片钳技术在内的其他技术相对费神费力，操作复杂，不能对心肌细胞实时持续在位检测；hERG钾通道检测会遗漏某些药物非离子通道引发的心脏毒性；动物实验成本较高
。临床诊断的品种如HBV/HCV及禽流感诊断试剂盒性能优良、供应充足，基本实现国产化。在猪流感病毒RNA核酸序列明确的情况下，利用现有的试剂研发平台，人感染猪流感实时荧光定量PCR诊断试剂盒很快就会面世。实时荧光定量PCR技术在猪流感诊断中的作用已有法规确立在人感染猪流感病毒出现以前，针对猪与猪传染的传统猪流感疫情，近年来我国科技人员经过不懈努力，探索快速检测与诊断方法].人感染猪流感疫情发生后，美国疾病预防控制中心（CDC）于2009年4月28日发布了针对人感染猪流感病毒治疗和预防临时指南
高通量、低成本SNP、突变或甲基化检测方法—HRM 技术应用
，因此被认为是继微卫星之后的新一代遗传学标记。 HRM 检测SNP 技术是依据在一定的温度范围内将PCR 扩增的产物进行变性，期间实时检测体系内荧光信号。荧光值随着温度变化，可绘制溶解曲线。每一段DNA 都有其独特的序列，因而也就有了独特的熔解曲线形状，如同DNA 指纹图谱一样，具有很高的特异性、稳定性和重复性。根据曲线准确区分野生型纯合子、杂合子和突变性纯合子（下图）。 检测SNP 的方法有很多种。成本较低、通量较大的方法大都局限于已知、特定位点，如Taqman 探针法。既要对已知位点分析
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