北京现货大提柱式细菌RNA提取试剂盒批发

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产供应北京现货大提柱式细菌RNA提取试剂盒批发，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：北京现货大提柱式细菌RNA提取试剂盒批发
编号：BTN80905
产地：国产|进口
规格：5次
英文名：Bacterial RNA Column large-scale extraction kit
本试剂盒是在本公司柱式细菌RNA提取试剂盒(BTN80103)基础上开发的大提升级产品，用于快速从各种常见的革氏阴性和革氏阳性细菌中大量提取总RNA。跟柱式细菌RNA提取试剂盒相比，它具有下列特点:
1. 单次样品处理量大，最多可以处理 30mL细菌培养物。
2. 操作简单快速，一次提取只需要 20分钟左右。
3. 所得 RNA 纯度高，OD260/OD280一般在2.0左右。一般不含基因DNA污染。
4.适用于各种革氏阴性和革氏阳性细菌。

试剂盒组成：

 

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	50ml
大提离心吸附柱	5套
通用洗柱液	100ml
通用预洗脱液	5ml
RNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
下面的操作步骤是针对在 50mL塑料离心管中进行的大量提取的。

1.在 50mL塑料离心管中离心收集10-30mL新鲜细菌。注意:由于细菌RNA 半衰期十分短，所以，必须使用最新鲜的、处于对数生长期的细菌。
2. 吸尽液体培养基，加入10mL溶液A，用枪充分吹打细菌沉淀，确保细菌全部裂解，没有块状物。
3. 加入0.2倍体积的自备*仿(10mL溶液A需2mL*仿)，振荡器上充分振荡混均 30秒。
4. 5000-7000 rmp室温离心 3～5分钟。
5. 将上清液(约5-6mL的无色透明水相，有时水相比重大时，水相在下层，有机相即蓝相在上层，吸取时应吸取透明水相)转移到一个干净的50mL塑料离心管中。注意：离心后下层有机相和中间层含有 DNA和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和DNA污染。为保险起见，可以留下少许上清液不取。同时吸取上清时最好缓慢进行，否则容易吸出交界面的不可见的丝状 DNA。
6. 加入等体积的溶液B，充分颠倒混匀。加入溶液B后，溶液为乳白色。
7. 将溶液转移到离心吸附柱中，5000-7000rpm室温离心 1分钟，弃穿透液。
8. 加 10mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，室温离心 1分钟，弃收集管中的穿透液。一次洗涤一般足够去除杂质。
9. 加 10mL 通用洗柱液，室温离心 1分钟，弃穿透液。此步可以省略。
10.室温 5000-7000rpm离心 2分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响 RNA的使用。
11. 加入1mL 通用预洗脱液，5000-7000rpm离心 1分钟。
12. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 收集管中，加入1mL RNA 洗脱液。
13.室温 5000-7000rpm离心 2分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
14. 重复 14-15 步一次，我司的大提离心吸附柱吸附能力较强，一般第二次洗脱还能洗脱较多的RNA。
15. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做 Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行 RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。
16. RNA产量产率测定：将5-10μL RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在 OD260的光吸收。通过光吸收可以得出 RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出 RNA的产量(浓度×体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
17. RNA 纯度测定：无污染的总 RNA的OD260/OD280一般在 1.8-2.1 之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响 RT-PCR等反应。

疑难解答：
Q：上样孔里的红色荧光物一定是DNA污染吗？
A：不是。用 TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳 RNA时容易产生此现象，初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA 通过碱基互补或通过硼*(代"酸")络合(如果使用 TBE作电泳液的话)形成的复合物，加RNase处理后，这些红色荧光物(RNA)一般会消失。为避免此现象，建议最好使用甲醛变性胶电泳和RNA 专用上样液(如百奥莱博的RNAload)。

想要了解更多关于北京现货大提柱式细菌RNA提取试剂盒批发的价格、品牌、厂家、说明书、促销信息，请和我们联系。此外我公司还销*(代"售")下面的产品：
DP432 植物总RNA提取试剂盒
BTN100844 PCR优化试剂盒 PCR Optimization Kit
乙二*(代"胺")四乙酸二*盐 D(+)-Arabitol 25102-12-9
Tris-Triton-NaCl缓冲液(pH9.0)   500ml
3326-32-7 异硫*酸荧光素 FITC
2′-*脱氧尿苷 Poly C 784-71-4
ARB14003 猪髓磷脂碱性蛋白(MBP)含量分析 Porcine myelin basic protein,mbp ELISA KIT
藻类膜蛋白提取试剂盒   50T|100T
PY01-040  烟酸  25克  
F040104 鸡卵清蛋白偶联三聚*胺 OVA-MEL
548-62-9 Crystal violet 结晶紫
PY01-003  酪蛋白胨  250克  
F040307 小鼠IgG1抗原 Mouse IgG1
ARB11670 人维生素D3(VD3)尿液中含量检测 Human vitamin d3,vd3 ELISA KIT
ARB11522 人胶原吡*(代"啶")交联(PYD)Elisa分析 Human pyridinoline crosslinks,pyd ELISA KIT
ARB14070 甘薯羽状斑驳病毒(SPFMV)Elisa方法检测 
无水磷酸肌酸二*盐 Tetrapropylammonium bromide 922-32-7
ARB13842 猪二胺氧化酶(DAO)Elisa定量检测 Porcine diamine oxidase,dao ELISA KIT
羟高铁血红素 Boc-L-glutamine 15489-90-4
58-96-8 Uridine 尿苷
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·PCR级海藻糖溶液
编号：BTN130506
英文名称：Trehalose Solution，PCR Grade
规格：1.5mL
本产品为浓度为5M的海藻糖的水溶液，可以直接添加到PCR反应体系或逆转录反应中提高酶的热稳定性和活性。

产品特点：
1.在反应体系中加入海藻糖，可以增加热敏感的酶在高温下的稳定性和活性。
2. 海藻糖能增加鼠白血病病毒逆转录酶(Reverse Transcripatase)的热稳定和热激活特性，使其在60℃仍具有全部活性，足以在mRNA二级结构诱导终止反应之前合成全长的cDNA，反应效率大大提高。
3. 有助于提高干燥保存的酶的活性。

储存条件：低温运输，4℃保存，保存期一年

使用方法：按照1/3体积，将本产品加入到PCR体系中即可。


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·DMSO，PCR级
编号：BTN80205
英文名称：DMSO，PCR Grade
规格：1.5mL
大量实验显示5-10%的DMSO能够促进PCR反应，尤其是高GC模板的PCR反应，本产品就是专门用于PCR或RT-PCR的高纯度DMSO。

储存条件：常温运输及保存，有效期一年。

·一站式miRNA尿素-PAGE电泳套装
编号：BTN70606
英文名称：One-Stop miRNA Urea-PAGE Pack
规格：30次
尿素-聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳(Urea PAGE)是目前分离200nt以下的小片段RNA，尤其是20nt左右的microRNA(miRNA)分子的主要方法，但是单独配制各种溶液十分繁琐，为此我们公司开发了本产品。

产品特点：
1.一站式，含有电泳所需要的所有试剂，即开即用，十分方便，免去了实验人员称取有毒物品。
2. 灵活，可以根据需要配制各种浓度的Urea-PAGE，以便对长度各异的RNA进行电泳。
3.电泳后可直接用于UV观察、银染、胶回收、Northern杂交和放射自显影等。
4. 使用新型缓冲液，可以防止甘油的干扰。

产品组成：

成分	规格
尿素	210g
丙*(代"烯")酰胺	60g
甲叉双丙*(代"烯")酰胺	3g
TBE电泳液，10×	250ml
TEMED	1.5ml
过硫*(代"酸")铵(干粉)	1g
miRNAload	10ml
miRNA Marker	30次
固相RNase清除剂	100ml
说明书	1份

储存条件：常温运输、4℃保存(miRNAload、miRNA Marker需要-20℃保存)。保存期为一年。

使用方法：

一、准备工作
1. 用固相RNase清除剂清洁工作的台面和器皿(详见该产品的使用手册)。
2. 配制1 X电泳缓冲液：将适量的10X电泳缓冲液用RNase-free水稀释10倍，得到1X电泳缓冲液待用。
3. 配制10%过硫*(代"酸")铵溶液：精确称取约100mg过硫*(代"酸")铵到一干净的1.5mL离心管中，按每1mg过硫*(代"酸")铵加10μl RNase-free水的比例加入RNase-free水，摇晃致溶，立即使用。注意：放置时间不要超过一周。

二、配制凝胶
1. 估计所需要的凝胶溶液的体积，一般配制一块13cm×15cm×0.8mm的胶需要15mL凝胶溶液，配制一块36cm×45cm×0.8 mm的胶需要120mL凝胶溶液。
2. 根据所需要的凝胶溶液的体积，在一的干净的三角瓶中按下表加入各成分(此处以配制100mL浓度为15%的凝胶为例):

成分	终浓度	用量
尿素	7M	42g
40% Acrylamide/Bis溶液	15%	37.5mL
10×电泳缓冲液	1×	10ml
补RNase-free水到100mL

注：Acrylamide/Bis的终浓度需要根据待分离RNA长度选择(见下表)。
 

需分离的RNA长度范围	Acrylamide/Bis工作浓度
6-100nt	20%
25-150nt	15%
40-200nt	12%
60-400nt	8%
80-500nt	5%
1000-2000nt	3.5%

3. 搅拌并加热到40-50℃左右，直到尿素完全溶解。
4. 冷却到室温后，将三角瓶接上真空系统抽真空处理10-15分钟以充分去除溶液中的氧气(氧气会降低聚合反应效率)。但如果实验条件有限，此步也可以省略。
5. 边摇晃溶液变加入50μl TEMED和500μl 10%过硫*(代"酸")铵。注意：即使选择其他工作浓度的Acrylamide/Bis，TEMED和10%过硫*(代"酸")铵的用量也不需要随之改变。但如果配置的凝胶溶液的体积变化，TEMED和10%过硫*(代"酸")铵的用量也要按比例改变。
6. 再充分摇晃约30秒后迅速灌胶，然后插入样品梳。
7.室温放置30-60分钟使胶凝固。
8. 将凝胶板放置在电泳装置上后，在上下层分别加入适当量的1×电泳缓冲液。如果不马上使用，需要有湿纸将上样孔端盖住以防凝胶过度干燥。
9. 拔出梳子后用加样枪吸取电泳缓冲液，充分将每个加样空中未聚合的Acrylamide/Bis、尿素和气泡吹打出来。

三、电泳
1.在上样前，预电泳 20-30分钟以使多余的过硫*(代"酸")铵跑出加样空，同时还可以使凝胶的温度升高(到 50℃左右)，有利于RNA电泳时维持在变性状态。预电泳电流见下面第 5 条。
2. 将miRNA样品与等体积的miRNAload 混合，70℃保温 2-3分钟后迅速放置在冰上冷却，快速离心半分钟，放冰上待用。
3. 关电泳仪后开始上样。注意：每次上样后如果不更换枪头，则需要充分吹打洗净枪头以防样品的交叉污染。
4. 同时上样 miRNA Marker。
5. 重开电泳仪，对 13cm×15 cm的胶，以20-30mA的电流电泳，直到红色染料移动到凝胶边缘为止；对 36cm×45cm的胶，则以50-60mA的电流电泳，直到红色染料移动到凝胶边缘为止。

四、后续处理
1.染色观察：将凝胶一面的玻璃板揭开，直接用仍然附着在另一玻璃板上的凝胶进行各种染色，包括银染(固定、漂洗、显影和定影等步骤)、EB(每100mL 1×TBE中加 20μL 10mg/mL的EB溶液)、我们公司低毒核酸染料 DNAgreen(每100mL 1×TBE中加10μL DNAgreen 原液)。UV下观察并拍照。
2. miRNA回收：按上法用EB等染料染色后，UV下确定所需要的miRNA条带的位置，切胶后进行胶回收处理。
3. Northern杂交：按上法用EB等染料染色后，UV下确定所需要的miRNA条带的位置，切胶后电转移到带正电的尼龙膜上，然后进行杂交处理。
4. 放射自显影：如果miRNA样品电泳前经过同位素标记，则将凝胶一面的玻璃板揭开，用滤纸将附着在另一玻璃板上的凝胶吸附过来，然后包上保鲜膜，真空抽干，然后使胶跟X光片向对置进行放射自显影。

北京百莱博科技有限公司专业生产供应销*(代"售")生物试剂、化学试剂、抗原抗体、血清血浆、Elisa试剂盒，更多试剂产品需求，欢迎来电咨询选购北京现货大提柱式细菌RNA提取试剂盒批发。