超快DNA-RNA两用转膜试剂盒现货促销

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百奥莱博专业生产销*(代"售")超快DNA-RNA两用转膜试剂盒现货促销，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：超快DNA-RNA两用转膜试剂盒现货促销
产地：国产|进口
英文名：Rapid Nucleic Acid Blotting Kit
品牌：百奥莱博
规格：5次
编号：BTN121110
本试剂盒是基于毛细管转膜法的Southern和Northern印迹膜制备试剂，专门用于从电泳得到的凝胶中制备用于Southern杂交和Northern杂交的印迹膜。其操作流程如下：


产品特点：
1.即开即用，提供制备5张13×20cm大小的Southern杂交和Northern杂交印迹膜所需要的印迹膜和溶液，不需要用户单独准备。
2.快速：转膜过程只需要1小时，整个过程只需要2.5小时(对DNA)或1.5小时(对RNA)。
3.跟硝酸纤维素膜、带电尼龙膜、中性尼龙膜和PVDF膜兼容。包括Nytron、Gene Screen Plus、Zetabind、Biotrans、Hybond-N、Immobilon等。
4.A型提供硝酸纤维素膜，适用于400bp以上的靶分子，背景低。B型提供带电尼龙膜，适用于40bp以上的靶分子，结合力强。如需中性尼龙膜或PVDF膜，需另购。
5.使用优化的下向转膜法，不但效率比上行转膜法高30%左右，而且条带弥散度低、分辨率高。
可用琼脂糖胶(包括脉冲电泳胶，DNA电泳、RNA甲醛胶电泳和RNA戊二醛电泳)和DNA PAGE胶。

试剂盒组成：

 

成分	规格
溶液A	660g
溶液B	100ml
溶液C	250ml
硝酸纤维素膜13×20cm	5张(仅A型提供)
带电尼龙膜13×20cm	5张(仅B型提供)
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存，有效期一年。

使用方法：

一：Southern印迹膜的制备
1.按常规方法进行电泳(包括脉冲电泳)，本试剂盒不提供电泳所需试剂。如果进行常规的Southern杂交，建议使用0.7%琼脂糖进行电泳，分离酶切的基因组DNA。电泳时最好加电泳分子量对照、酶切对照(先将标记的全长lambda DNA或探针质粒与样品DNA的混合，再酶切)、阴性样品(不含检测片段的DNA样品)、杂交分子量对照(标记的1.lambda/Hind III)等。电泳后和荧光标尺并排拍照。
2.变性：首次使用时需配制变性液2.5L(在3L的干净玻璃烧杯中加入约2L自备的去离子水，搅拌缓慢中加入220g成分A和100mL溶液B，溶解后定容到2.5L后即可用)，将凝胶转移到一个至少10倍于胶体积的变性液中，脱色摇床上室温下摇晃处理60分钟(如果使用带正电尼龙膜，此步处理可以缩短到30分钟)。未用完的变性液可放瓶中室温保存。
3.转膜：如果使用带正点的尼龙膜，则直接用上步配制的变性液转膜，如果使用中性尼龙膜和硝酸纤维素膜，则需配置转膜液(在3L的干净玻璃烧杯中加入约2L自备的去离子水，缓慢搅拌中加入440 g成分A和2mL溶液B，溶解后定容到2.5L后即可用)。将凝胶转移到至少10倍于凝胶体积的转膜液中，脱色摇床上室温下摇晃处理15分钟。
4.测量凝胶的大小，然后借助尺子准确切出一张印迹膜，每边比凝胶大1mm，并切去一角，将印迹膜漂浮于去离子水上20分钟确保全部湿润，再按下图设置下行转膜体系(比上行转膜体系效率高30%)。图中membrane即印迹膜，transfer buffer即转膜液，吸水滤纸厚度为2-3cm，一般按每cm2印迹膜需要1mL转膜液的比例准备转膜液。对大的凝胶，可以同时使用两张滤纸分别跟两个容器的转膜液连接以便使转膜匀浆。

5.转膜1小时。结束后用铅笔标记核酸结合面以免搞错。注意：不要过夜转膜，否则信号将降低50%。
6.将印迹膜在中和液中处理10分钟，中和液的用量至少为0.5mL/cm2印迹膜。
7.可将凝胶放入EB(0.5μg/mL)溶液中染色30分钟后UV下观察残留核酸的量，反推转膜效率。此步也可跳过。
8.将印迹膜夹在两层滤纸中间80℃干燥15分钟以固定核酸(不需真空)，干燥时间不需延长，否则杂交信号可能会降低。
9.此时印迹膜可直接用于后续的核酸杂交实验或者在干燥状态下保存待用(可放数月)。

二：Northern印迹膜的制备
10.按常规方法进行电泳，本试剂盒不提供电泳所需试剂。本方法适用于甲醛变性胶和乙二醛变性胶，电泳后和荧光标尺并排拍照。
凝胶不需要变性和中和处理(也不能变性，否则RNA将会降解)，直接进入转膜步骤(同Southern印迹膜制备的第3到第9步)。

我公司的超快DNA-RNA两用转膜试剂盒现货促销，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：

·柱式土壤DNA提取试剂盒
编号：BTN71205
英文名称：Soil DNA column extraction kit
规格：50次
本试剂盒专门用于从各种土壤样品和河海沉积物中提取高质量的DNA的试剂。

试剂盒特点：
1. 去污染效果更好，得到的DNA可以直接作为PCR模板或酶切，不需要再进行去腐殖酸处理。
2. 操作过程更加简单快速，整个操作只需要10多分钟，扩容性好。
3.产量高，每克土壤一般可以提取到5-50μg DNA，片段长度在20-50 Kb，OD260/280一般都在1.8以上。
4.适合于各种土壤(包括河海沉积物)。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	25ml
溶液B	25ml
溶液C	40ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
DNA洗脱液2.0	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存，保存期为一年。

使用方法：
1. 65℃预热溶液A，待其沉淀溶化后充分混匀，取0.5mL加入到1.5mL塑料离心管中并放置于65℃待用。
2. 称取0.1-0.3 g的土壤，加入到含预热溶液A的离心管中，震荡器上剧烈震荡5-10分钟。如果是扩量操作，可以使用更多土壤和较大离心管。也可以将同一种土壤在较大离心管中震荡处理，然后再分到1.5mL离心管中。注意:不论使用大的还是小的离心管，一定要让管底的土壤震荡起来。
3. 将离心管置于65℃水浴中保温至少5分钟。
4. 12000～15000g室温离心3分钟，将上清转移到一新离心管中(上清液一般呈淡黄色或深棕色，实际颜色取决于腐殖酸的含量，上清液的体积一般为300-400μl)。
5.在上清液中加入等体积的溶液B，上下颠倒30秒充分混匀，溶液将呈白色或淡黄色混浊状。
6. 将离心管冰浴至少5分钟。
7. 12000～15000g室温离心3分钟，转移上清到新的1.5mL离心管中，上清液颜色将比第4步得到的上清的颜色稍淡，体积在0.7mL左右。
 注意：下面第8-第9步的*仿抽提操作可以省略，直接进入第10步，但DNA的产量会低50%左右，OD260/280在1.7-1.8。如果直接进入第10步，则转移的溶液体积不要超过0.6mL，否则没有空间加溶液C。
8. 加入0.2mL的*仿(自备)，震荡器上充分振荡30秒混匀。注意:一定要让管底的溶液震荡起来。
9. 12000～15000g室温离心3分钟，小心转移上清到新离心管中。说明：离心后两相交界面将有白色膜状物，其中有机相部分颜色较深，一般呈淡棕色。上清的颜色取决于土壤中腐殖酸的含量。将上清转移到新的1.5mL离心管时，不要超过0.6mL，否则没有空间加溶液C。如果有多余的可以弃之不用。
10. 加入1.5倍体积的溶液C，上下颠倒30秒混匀。
11. 分两次上柱(即先转移一半的混合液到离心吸附柱中，12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液，然后再将剩下的混合液到离心吸附柱中，12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液)。
12. 加0.7mL通用洗柱液到离心吸附柱中，12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液。
13. 如果有必要，可以再加0.3mL通用洗柱液到离心吸附柱中，12000～15000g室温离心半分钟，弃穿透液。增加一步洗涤能使最后得到的DNA的纯度稍有提高，但产量稍微有所降低。
14. 12000～15000g室温再离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会污染DNA。
15. 将离心吸附柱转移到一新的1.5mL塑料离心管中，加入50-100μL DNA洗脱液2.0。
16.室温放置离心吸附柱1-2分钟。
17. 12000～15000g室温离心半分钟，离心管中溶液即为DNA样品，可以立即使用或存放于冰箱待用。

疑难解答：
Q: 如何判断提取的DNA没有腐植酸污染？
A：方法一是目测法，即看得到的溶液是否无色。如果呈淡棕黑色或淡黄色，说明可能是少量残留的未除尽的腐植酸。方法二是检测最大光吸收。注意：有腐植酸污Q: 如何判断提取的ＤＮＡ没有腐植酸污染？
A：方法一是目测法，即看得到的溶液是否无色。如果呈淡棕黑色或淡黄色，说明可能是少量残留的未除尽的腐植酸。方法二是检测最大光吸收。注意：有腐植酸污染并不表示 DNA 不能使用，有的腐殖酸并不抑制 PCR扩增。
Q: 腐殖酸的最大吸收波长是多少？
A：腐植酸(humic acid)是一大类呈棕黑色或黑色的物质，其结构千差万别，土壤中腐殖酸的组成和特点随土壤不同而不同，所以其最大吸收波长也各不相同，有的土壤的腐殖酸在 260nm 有最大吸收(见 Appl.Environ. Microbiol.，63：4993，1997)，有的则在 340nm。所以用特定的波长测定 OD 值时波长的选定要根据土壤而决定。Sigma，Fluke等公司出售的腐植酸产品成分一般比较简单，其最大吸收波长不能推广到成分更为复杂的土壤腐殖酸样品。
Q:是否腐植酸都会抑制后续的DNA反应？
A：否，因为腐植酸是一大类物质的统称，他们的结构和特性各不相同，所以是否对后续反应有影响最好通过实验来验证。如果用提取的DNA溶液原液进行反应而反应没发生，而对照样品(已知的不含污染的DNA)能够发生，说明可能抑制作用。
Q：如果得到的DNA样品还是含有抑制后续反应的腐植酸，如何去除？
A：如果提取的DNA原液不能扩增，可以将样品稀释10倍和100倍再进行 PCR，抑制作用一般可以解除。如果仍然抑制，可以使用我公司的PCR Inhibitor Scavenger(BTN60804)。如果仍然不能解除，则可以通过柱式腐殖酸清除剂(BTN60801)或先电泳，再用超大片段胶回收试剂 Magic Gel DNArc(BTN60706)纯化土壤 DNA，去除残留抑制剂。其中后两方法最有效，得到的原液一般可以直接扩增。
Q：在用土壤 DNA进行细菌专一性 PCR时，为何没加 DNA 模版的阴性对照有扩增产物出现？
A：这是由于使用的Taq DNA聚合酶一般从E.coli表达菌株中提取，提取过程中污染了E.coli的基因组 DNA，而使用的广谱细菌专一性引物可以识别所有细菌DNA基因组DNA模版，所以会产生扩增。建议使用高质量的Taq DNA聚合酶。


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