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冷藏
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长期
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589
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北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销*(代"售")北京无内毒素水促销,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:北京无内毒素水促销
品牌:百奥莱博
产地:国产|进口
更多有关北京无内毒素水促销的价格及使用说明等,请联系我们的业务经理王欣女士咨询,我公司还销*(代"售")以下产品:
·SP6体外转录试剂盒
编号:BTN91107
英文名称:SP6 in vitro Transcription Kit
规格:50次
本试剂盒是基于SP6 RNA聚合酶的RNA体外转录试剂盒,它利用含有SP6启动子的模版DNA,以NTP为底物,从SP6启动子下游开始合成与模版DNA中一条链互补的RNA,简单快速获得大量的RNA分子。
产品特点:
1. 即开即用,用户只需提供含SP6启动子的DNA模板即可以进行体外转录实验,不需要单独准备每一个成份。
2. 单溶液预配液,减少加样次数,避免了操作误差,增加了可重复性。
3. 模版DNA可以是线性化的质粒DNA,也可以是PCR扩增产物。
4.可以合成的RNA的最佳长度在20nt到2000nt之间。
5.产品配方经过精心优化,每μg DNA模版可以合成2-6μg RNA。
得到的RNA可以用于RNA 结构研究、核酶生物化学、体外翻译、RNA-蛋白质相互作用、反义技术、SELEX技术和RNA干扰(RNAi)等实验。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 转录预配液(2×) | 0.5mL |
| 阳性对照DNA(1.3 kb片段) | 20μL(10 ng/μL) |
| SP6 RNA聚合酶混合液 | 50μl |
| RNase-free水 | 1ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
使用方法:
一、制备DNA模板
PCR片段和质粒DNA都可以用作体外转录的模板,但是必须注意以下几点。一是必须使用线性化的DNA。如果是质粒DNA,则必须先用适当的限制性内切酶切成线状。二是需要转录的DNA序列的上游必须有SP6启动子。如果模板是PCR产物,则可以在设计引物时将SP6启动子序列(5´ATT TAG GTG ACA CTA TAG AGN G 3´)加上,转录其实是从3端G AGN G中的第一个G开始。如果是将DNA片段克隆到载体上,则需要选择有SP6启动子的载体,并且克隆位点必须位于SP6启动子下游。三是需要转录的DNA序列的下游端最好不要是3´突出。如果是3´突出(如选择了Pst I来线性化质粒),则最好用T4 DNA聚合酶修平。四是必须保证DNA模板中没有RNase。由于提取质粒DNA的过程中一般要使用大量的RNase A,因此质粒DNA一般都有严重的RNase A污染,所以在用作模板前,最好采取胶回收得方法回收质粒DNA。并且加入少量总RNA一起保温,然后电泳检测RNA是否被降解,以此判断纯化的DNA模板是否有残留RNase A。
二、体外转录反应
1.在一个RNase-free的塑料离心管中,在室温下(不是在4℃下)按次序加入下列成分:
| 成分 | 加入量 | 备注 |
| DNA模板 | xμL | 总量在50 ng-1μg(如果模板是PCR片段,建议用50 ng左右;如果模板是质粒DNA,建议用1μg左右;如果用本产品提供的阳性对照,建议用4μL) |
| SP6转录预配液(2×) | 10μl | 本成分还含其他促进剂,所以是混合物 |
| RNase-free水 | 补水到20μL |
注:此为20μL反应体系的用量,对其他反应体系,各成分的用量可以按比例增减。如果需要标记RNA探针,则需要订购NTP分开的试剂盒。如果需要得到加帽RNA,则需要加入自备的加帽修饰核苷酸(本公司有各种加帽修饰核苷酸)。
2. 37℃保温1-2小时。注意:延长保温时间并不能提高产量。
3. 70℃加热10分钟灭活SP6 RNA聚合酶。
4. 取1-3μL电泳检测转录效果。一般1μg DNA可以合成 5-10μg的RNA。
5. 得到的RNA可以放-80℃保存。
若需进一步去除DNA模板,可参考下列操作步骤,但所用试剂需另行购买,本试剂盒不提供。
1.在体外转录体系中加入3-5U自备的RNase-free DNase(BTN90903;3-5U/μL)。
2. 37℃保温15-30分钟。
3. 补水到100μL。
4. 用等体积(100μL)的Tris饱和酚-*仿抽提一次去除残留的DNase和RNA聚合酶。
5.在上清中加200μL自备的微量核酸沉淀剂(BTN50903;用前需要摇晃混匀),振荡后15000rpm离心3~5分钟,弃上清。
6. 加入1mL 75%乙醇,震荡10秒后15000rpm离心3~5分钟,弃上清。
7. 短暂离心数秒,用枪头吸弃上清。
8. 晾干半分钟,所得沉淀即去除DNA模板后的RNA。可溶于RNase-free水中后立即使用或放-80℃长期保存。
疑难解答:
1. 没有RNA产物。最常见原因是模板有RNase污染,可用纯化的RNA跟模板DNA一起保温,再检测RNA是否降解。还可以增加RNase Inhibitor用量,本试剂盒缓冲液和酶混合液中有RNase inhibitor,如果模板RNase污染严重,可能需要用户补加RNase inhibitor。
2. RNA产量低。最常见的原因是DNA模板。在转录序列的第一个和第二个碱基最好都是G,在前14个碱基内避免有U存在。
3. RNA长度比预期的短。可能是模板序列中有SP6 RNA聚合酶的终止序列。可以改用SP6体外转录试剂盒(启动子也必须改成SP6启动子)。
4. RNA长度比预计的长。SP6 RNA聚合酶跟Taq DNA聚合酶一样,有不依赖于模板的加尾功能,最多有一半的RNA可以带一个或两个碱基的尾巴。如果RNA长度比预计的长很多,使用的模板又是质粒DNA,则可能是质粒DNA线性化不彻底。
5. 5´单磷酸还是三磷酸。如果使用GTP,则得到的RNA是三磷酸,体外转录时如果保温时间太长(如12小时),则有50%的三磷酸会变成单磷酸。如果在转录体系中加入GMP,则SP6 RNA聚合酶将优先使用GMP,所得RNA产物中5´端是单磷酸的比例将大大增加。
6. 如何得到带帽RNA?需加入带帽NTP类似物即可,本公司提供5种供选择。
北京无内毒素水促销关键词:无内毒素水,百奥莱博,BTN130502
我公司所售商品均为100%厂家供货,品质保证,价格优惠!
1.试剂包装:1g、5g、10g、25g、100g、500g等不同包装,欢迎来电咨询:无内毒素水,生化试剂
2.试剂纯度:97%-99%以上
3.库存均有现货。
4.产品订购以订货当日最新价格为准。
5.所有产品为确保质量,出库均复检。
·白细胞裂解液
编号:BTN130989
英文名称:White Cell Lysis Solution
规格:250mL
本品为即用型白细胞裂解溶液,可以用于裂解分离纯化好的血液白细胞,用于DNA提取、RNA提取等后续实验。
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
使用方法:(以DNA提取为例)
1. 取新鲜抗凝血5mL,在10mL或15mL的塑料离心管中用红细胞裂解液裂解红细胞(红细胞裂解液有几种配方,用户需要根据所选产品的使用手册进行操作,这里不列出每种的详细步骤),也可以直接2500rpm离心5分钟后取白细胞层到一新的10mL或15mL的塑料离心管中。
2.在所得的白细胞沉淀中或所得白细胞层溶液中加自备的生理盐水使得白细胞的终体积为2mL。
3. 加1mL的本产品,混匀后55℃ 保温3小时,其间轻轻振摇数次。
4. 加入3mL自备的Tris饱和酚,轻轻震摇5分钟,使得水相和酚相充分分开。
5. 3500rpm离心15分钟,上层水相含DNA,中间白色层为蛋白质,下层为酚相。
6. 将非常粘稠的含DNA的上清液转移到一干净的10mL或15mL的塑料离心管中。
7. 再用Tris饱和酚重复上面的抽提步骤,直到离心后中间层没有白色的蛋白出现为止。
8.在上清液中加入等体积的自备的*仿,轻轻震摇5分钟,3500rpm离心5分钟,转移上清液到一干净的10mL或15mL的塑料离心管中。此步可以除去残留的酚。
9.在上清液中加入0.1倍体积的自备的3 M 乙酸*溶液(pH5.2)和2倍体积的无水乙醇,轻柔颠倒混匀,将出现絮状的DNA沉淀。
10. 用移液枪头将DNA沉淀挑取出来,转移到1.5mL的塑料离心管中,用75%的乙醇浸泡2次。此操作可以去除DNA中残留的盐离子。
11.转移DNA沉淀到一个1.5mL的塑料离心管中,空气中放置10分钟左右待乙醇挥发后,加入0.5mL自备的TE缓冲液溶解DNA,4℃放置待用。
北京无内毒素水促销关键词:无内毒素水,百奥莱博,BTN130502
我公司先后与天津中医学院、北京军区总医院、复旦大学、北京大学、上海交通大学、华东师范大学、第二军医大学、南京大学、清华大学、复兴医院、南京工业大学、301医院、中科院上海分院等多家单位建立了良好的合作关系。本公司可为您提供高品质的无内毒素水等科研试剂。 公司秉承“专注品质、信守承诺、积极沟通、创新服务”的企业文化积极参与生物领域的技术创新和技术服务,力求为我国科研事业更好的,更专业的服务!
53-84-9 NAD 氧化型辅酶Ⅰ
77-86-1 TRIS 三羟甲基*基甲*(代"烷")
ARB11573 人基质金属蛋白酶7(MMP-7)定量分析 Human matrix metalloproteinase 7,mmp-7 ELISA KIT
BTN81225 Tricine-SDS-PAGE配胶液 Tricine-SDS-PAGE Gel Buffer
13114-27-7 Zeatin 玉米素
BTN131234 地塞米松溶液 Dexamethasone DXM Solution
PY01-171 酚酞 ind 25克
硅钨酸 8-Hydroxyquinaldine 12027-43-9
ARB11844 人凝血因子X(FX)Elisa方法检测 Human coagulation factor x,fx ELISA KIT
钯碳加*催化剂 1,8-Dihydroxyanthraquinone 7440-05-3
丽丝胺罗丹明B D-Phenylalanine methyl ester hydrochloride 3520-42-1
SDS溶液(20%) 100ml
556-50-3 甘*酸二肽 Glycylgcine
ARB13901 猪血管内皮生长因子(VEGF)酶免分析 Porcine vascular endothelial cell growth factor,vegf ELISA KIT
ARB13730 兔核因子κB受体活化因子配基(RANKL)ELISA检测服务 Rabbit receptor activator of nuclear factor kappa b ligand,rankl ELISA KIT
BTN130597 萤火虫荧光素酶活性检测试剂盒 Firefly Luciferase Assay Kit
我公司是一家专业经营生化试剂、仪器、无内毒素水、实验室耗材的公司,代理许多国际先进水平的高科技产品,包括分子生物学、细胞生物学、免疫学等多个研究及应用领域。我们努力将欧美专业生产厂家的具有国际先进水平的产品推荐给各类研究人员;另一方面也非常重视自主产品研究和开发,推出了一系列具有竞争力的产品和服务。同时国家对于生物行业的发展给予了极大的重视,更多地侧重于科研的投入。
北京百莱博科技有限公司专业生产生化试剂产品,欢迎来电咨询选购北京无内毒素水促销。
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个和12,000个,其中11,000个克隆的表达已经通过Western Blot的验证。这些克隆以2种形式提供:一种是在表达的蛋白C末端带Myc-DDK(即FLAG)标签,一种是带GFP标签。这些cDNA克隆均构建于pCMV6入门载体上,可方便转换至其他目的载体。 按照其网页上的促销价:900RMB/clone × 100 = 9万RMB, 直接买,不用等时间,就可搞定,批量买估计还可以讲价,关键的是品质有保证。 注:非公司托儿,因前段时间帮朋友筹划项目专门研究
至010-80485460或E-mail至 liuyu@genomics.cn。010-80485460或E-mail至liuyu@genomics.cn。培训费用:全程培训(讲座+实验): 3500元/人,学生为 2900元/人。 注:学生报到请带学生证培训费用包含会务费、资料费、餐费。培训期间公司协助安排住宿,费用自理。 三、相关促销政策 参加本届培训班的学员可以享受公司提供的常规技术服务八折优惠。优惠有效时间2013.10.17-2013.12.31 四、汇款信息 账号
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