印迹膜抗体稀释液北京厂家现货

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北京百奥莱博科技有限公司专业生产供应印迹膜抗体稀释液北京厂家现货，产品信息：

类别：蛋白质研究

英文名：Antibody Dilution Buffer

产品名	产品编号	包装规格
印迹膜抗体稀释液	BTN81208	250mL

产地：国产|进口

编号：BTN81208

品牌：百奥莱博

规格：250mL

本产品用于稀释Western Blot抗体，即开即用，方便快捷。

 

产品组成：

 

成分	规格
抗体稀释液成分一	100ml
抗体稀释液成分二	0.5g
说明书	1份

 

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

 

使用方法：

 

一、转膜(湿法电转移，本产品不含相关试剂)

1．制备湿法电转液：将湿法电转液干粉全部溶解在1L去离子水中得20×湿法电转液，用时用去离子水稀释20倍预冷待用。

2．根据PAGE胶的大小剪切同样大小的滤纸和各边都大1mm的硝酸纤维素膜(以下简称膜)。避免手直接接触膜。

3．将切好的膜浸泡在新鲜稀释的1×湿法电转液(下简称转移液)中15-20分钟。

 注意：最好用镊子夹住膜的一边轻轻置于转移液上，只让膜下层不转移液接触，通过毛细管作用使整个膜浸湿。避免让膜沉入转移液中，否则膜不转移液之间形成的气泡会阻止膜的湿润。

4．在容器中将两块海绵垫、六层滤纸用转移液浸湿。

5．在转移夹上依次放上一张浸湿的海绵垫、三层浸湿的滤纸、一块PAGE胶(只要分离胶部分)、一张浸湿的膜、三层浸湿的滤纸、一张浸湿的海绵垫。

 注意：每叠加层一定要用玻棒来回擀几遍以擀走里面的气泡。膜两边的滤纸绝对不能相互接触，否则电转移时会发生短路，烧坏装置。

6．合起转移夹幵放入转移槽中(一定要注意方向，转印带负电荷的蛋白质时电极方向是膜正胶负；转印带正电荷的蛋白质时，电极方向是膜负胶正)，然后用预冷的转移液灌满转移槽。

7．插上电极，一般在冷却条件下用100V恒压转移30-60分钟或冷室中14V转移过夜。

 注意：一定要检查电流的大小，电流一般在0.1-0.4A。应根据蛋白分子量的大小确定转膜时间，对于小分子量的蛋白，转膜时最好垫2张或更多张膜(最多可10 张)，即使白质已经转过了第一张膜，还会在其它膜上检测到；对于大分子量的蛋白，转膜时电压要高一点，时间也要延长一点，开始最好也用两块或多张膜。转移时间长的时候特别要注意加强降温措施。如果目的蛋白转移效率低，可以在转移液中加终浓度为20%的甲醇或0.1%的SDS。

8．终止转移后，取出膜，幵在膜上剪去一个小角以标记方向。如有必要可用自备的各种染液对胶或膜进行染色以确定蛋白质转移效率。

 

二、封膜(本产品不含相关试剂)

1．将膜转移至杂交袋中，加5-10mL Western封膜液后热密封杂交袋开口。

2．室温下用脱色摇床摇动杂交袋30-60分钟。

 

三、与一抗二抗结合

1．用5mL Western抗体稀释液(配制方法：将抗体稀释液成分二干粉到入成分一溶液中，溶解后即可。未用完的抗体稀释液需-20℃保存)将自备的一抗稀释至适当的倍数(一般需要稀释10-100000倍使用，最佳稀释倍数跟一抗效价相关，需摸索)。

2．剪开杂交袋的一角，倒去封膜液，加入5mL新鲜稀释的一抗溶液，加热密封杂交袋开口。

3．室温下在脱色摇床上摇动杂交袋30-60分钟。

4．用抗体稀释液将自备的HRP或AP标记的二抗稀释至适当浓度(一般需要稀释500-4000倍。最佳稀释倍数跟二抗效价相关，需摸索)。

5．剪开杂交袋的一角，倒去一抗溶液(可留存)，加入5mL新鲜稀释的二抗溶液，加热密封杂交袋开口。

6．室温下在脱色摇床上摇动杂交袋30-60分钟，也可过夜孵育。

7．剪开杂交袋的一角，倒去二抗溶液(可留存)。

8．剪开杂交袋，用镊子取出膜，用Western洗膜液在器皿中洗3次，每次10分钟。

9．根据二抗的标记酶选择下面两种显色方法之一。

 

四、HRP显色检测(对HRP标记的二抗，本产品A型，本产品不含相关试剂)

1．将膜平放，在吸附了抗原抗体的一面加入100-500μL TMB溶液A和100-500μL TMB溶液B，铺满整个膜表面(具体用量可按膜的大小增减)。

2．置于平式摇荡仪上，在室温下孵育2至5分钟，直至深蓝色条带出现。

3．用镊子夹起膜，放入去离子水中洗膜3次终止反应，每次30分钟。

4．空气中晾干后照相保存。

 注意：膜显色后的颜色在数小时后将会褪色，不能永久存在，故需要及时照相。

 

五、AP显色检测(对AP标记的二抗，本产品B型，本产品不含相关试剂)

1．用新鲜配制的1×AP缓冲液洗涤硝酸纤维素膜5分钟。

2．将膜转移到新配制的BCIP-NBT法AP显色液中，每cm2膜需要0.1mL显色液。新鲜配制BCIP-NBT法AP显色液(以10mL为例)的方法：将9mL去离子水、1mL 10×AP缓冲液、50μl BCIP溶液和50μl NBT溶液混匀。此溶液必须在1小时内使用。

3．室温摇晃5-30分钟显色(37℃可加速反应)。

4．显色到合适程度后用自备去离子水洗膜3次终止反应，每次30分钟。

5．用吸水纸吸干膜上的水分，避光干燥保存或在一周内照相。

 

六、Western抗体清除剂(说明：此处理可能会使蛋白质失去某些表位，本产品不含相关试剂)

1．将膜浸泡在Western抗体清除剂中，70℃摇晃孵育30分钟，去除一抗和二抗。用Western洗膜液洗膜两次，每次10分钟。

2．膜即可用于下一次Western检测的膜封堵步骤。

印迹膜抗体稀释液北京厂家现货专业优质供应商：北京百奥莱博科技有限公司

关键词：BTN81208,印迹膜抗体稀释液,Antibody Dilution Buffer

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编号	类别	名称
BTN120720	DNA纯化	柱式冻存血液DNA提取试剂盒
BTN130648	工具酶	Afu尿嘧啶-DNA糖基化酶
BTN100823	干粉培养基	SOC培养基
BTN131195	工具酶	Deep Vent DNA聚合酶
BTN80903	RNA纯化	柱式植物RNA大量提取试剂盒
BTN120684	克隆与表达	噻孢霉素溶液
BTN131085	蛋白质研究	亲和素
BTN130527	蛋白质研究	哺乳动物专用蛋白酶抑制剂
BTN120698	克隆与表达	青霉素G*盐溶液
BTN130862	细胞及免疫学	DAPI干粉
BTN120705	蛋白质研究	L-谷胱甘肽(还原型)
BTN60106	克隆与表达	平末端DNA加T试剂盒
BTN130666	工具酶	尿嘧啶切刻酶
BTN101204	其他生化试剂	1M Tris-HCl(pH7.0)(DNA级)
BTN101107	其他生化试剂	20%CTAB溶液(DNA级)
BTN140651	蛋白质研究	12mL亲和层析柱
BTN140645	克隆与表达	大肠杆菌TB1感受态细胞
BTN101205	其他生化试剂	1M Tris-HCl(pH7.5)(DNA级)
BTN140654	其他生化试剂	HEPES溶液(1M,pH7.3)(DNA级)
BTN130913	核酸扩增(PCR)	dTTP溶液，2.5mM
BTN160685-25K	克隆与表达	SuperTOPO-Kan通用克隆试剂盒
BTN80809	蛋白质研究	蛋白*(代"磷")酸酶抑制剂混合液Ⅰ
BTN131114	蛋白质研究	ABTS溶液(7mM)
BTN130970	RNA纯化	柱式革兰氏阳性菌RNA提取试剂盒
BTN81207	蛋白质研究	半干法电转液(干粉)
BTN131046	蛋白质研究	n-十二烷基β-D-麦芽糖苷
BTN120307	工具酶	SP6 RNA聚合酶

 

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