北京两管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq)价格

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京两管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq)价格是高品质的核酸扩增(PCR)产品，由北京百奥莱博供应，用于科研实验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多两管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq)等核酸扩增(PCR)产品请联系我司咨询订购。

名称：北京两管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq)价格
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
编号：BTN80206
英文名：Two-Tube RT PCR Kit
本试剂盒是整合cDNA第一链合成试剂和即用型PCR 试剂而得的RT-PCR试剂盒。cDNA第一链合成反应和PCR反应分别在两个离心管中进行。

产品特点：
1. 即开即用，足够50次RT反应(20μL体系)和600次PCR反应(30μL体系)。
2. cDNA第一链合成试剂盒可灵活选用随机引物、Oligo dT引物或基因专一引物，适合各种情况。
3. PCR试剂盒具有即用、简单等优点，PCR mix中含上样染料，所以PCR产物可以直接上样电泳。
4. 两管式操作，RT和PCR在不同试管中进行，便于单独优化RT反应或PCR反应条件。
5.扩增效率高，最长可扩增5Kbp以上的RNA。

试剂盒组成：

 

成分	规格
MMLV 逆转录酶(含RI)	100μl
RT Buffer(含dNTP)	300μl
Oligo(dT)18引物(0.5μg/μL)	50μl
随机引物(0.2μg/μL)	50μl
RNase-free 水	10ml
PCR MagicMix 3.0	9ml
专用染料	360μl
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一、样品RNA的制备(本试剂盒不提供相关试剂)
1、可用自本公司各种RNA提取方法提取样品的RNA，也可以选用其他供应商的产品，但得到的RNA一定要溶解在RNase-free的超纯水中。

二：RT(逆转录)反应合成cDNA
1. 按下表配制RT反应体系(20μl体系):

RNA模板
总RNA	100-500ng
或poly(A)mRNA	10-500 ng
或专一的RNA(如体外转录制备的)	0.01pg-500ng
引物
Oligo(dT)18(0.5μg/μL)	1μL
或随机引物(0.2μg/μL)	1μL
或自备模板专一反向引物(10pmol/μL)	1-2μL
RNase-free水	补水到12μL

注意：RNA样品不能含有基因组DNA污染。随机引物与RNA 模板的比例将决定cDNA 合成的平均长度(成反比)。一般情况下随机引物效率好于OligodT引物，但如果只想转录总RNA中的mRNA(只占5%左右)，则可优先选用OligodT引物，这样就可以排除非mRNA的干扰。
2. 70℃保温5分钟变性模板后立即冰浴。
3. 按顺序加入6μL RT Buffer(含dNTP)和2μL MMLV 逆转录酶(含RI)，反应终体积为20μl。
4. 42℃保温60分钟。此步为RT反应。
5. 70℃保温10分钟以终止反应，然后放置在冰上待用。
6. 合成的cDNA可以直接作为PCR 模板使用，不需要纯化。剩余样品可以放置在-20℃长期保存。

三、PCR(30μL体系)
1、将全部专用染料加入到PCR MagicMix 3.0中，轻柔颠倒混匀即可使用。未用完的部分需要在-20℃。也可以不加专用染料，但在PCR结束后，电泳上样前，则需要加入电泳上样液，否则电泳时没法判断电泳速度。
2、在PCR 管中加入下列成分：

成份	加入量
PCR MagicMix 3.0(已加染料)	15μl
cDNA样品(上步的RT反应液)	1-5μl
模板专一性正向引物(10 pmol/μL)	1-2μl
模板专一性反向引物(10 pmol/μL)	1-2μl
补水到	30μl

注意：cDNA 也可以稀释后用作PCR 模板。是否稀释或稀释多少倍完全取决于靶基因的丰度。
3、PCR反应参数(需要根据模板和引物决定，下面的只做参考)：

过程	温度	时间
预变性	94℃	5min
PCR反应(35个循环)	94℃	1min
	55℃	1min
	72℃	2min
最后延伸	72℃	10min

四、电泳检测
取5-0μl PCR产物直接在PAGE或琼脂糖凝胶上电泳，跟分子量标准比较估计出扩增产物的大小。
注：本试剂盒中的PCR mix含有甘油和染料，可以直接上样，不需要额外再加电泳上样液。

我公司的北京两管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq)价格，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：
CD111 超纯dTTP(100mM)
L-半胱*酸甲酯盐*(代"酸")盐 CBZ-D-Trp 18598-63-5
1,6-二磷酸果糖二*盐 L-Isoleucine 6055-82-9
PY02-427  假单胞F琼脂  250克  
酒精-福尔马林-甘油固定液   500ml
ARB12408 大鼠组织蛋白去乙酰化酶(HD)酶标法分析 Rat Histone deacetylase,hd ELISA KIT
298-93-1 MTT 噻唑兰
BL1297 GST标签纯化树脂(GST Resin)
血液RNA稳定剂 
ARB10387 人可溶性CD40配体(sCD40L)酶联免疫定量检测 Human soluble cluster of differentiation 40 ligand,scd40l ELISA KIT
*甲*(代"酸")酐 Thymol Blue sodiu*(代"m") salt 93-97-0
BL1372 通用RT-PCR试剂盒(AMV)
ARB12653 大鼠嗜酸粒细胞趋化蛋白(EotAxIn 1/CCL11)代做ELISA实验 Rat eotaxin 1 ELISA KIT
ARB12513 大鼠载脂蛋白E(Apo-E)检测服务 Rat apolipoprotein e,apo-e ELISA KIT
北京两管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq)价格关键词：两管式RT-PCR试剂盒,MMLV-Taq,Two-Tube RT PCR Kit,两管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq),BTN80206

天门冬*酸*基转移酶(AST)检测试剂盒(赖氏比色法)   100T
SJ0194 Dextran Blue 2000 蓝色葡聚糖 2000
卡托普利 Maleic acid sodiu*(代"m") salt 62571-86-2
ARB12269 大鼠多巴胺转运蛋白(DAT)血清中含量检测 Rat dopamine transporter,dat ELISA KIT
F030819 BIOTIN标记兔抗鸡IgY抗体 Rabbit Anti-Chicken IgY*BIOTIN
固绿乙醇染色液  0.50% 100ml
11-*基十一烷酸 Cupric tartrate trihydrate 2432-99-7
无水葡萄糖 G-6-P-Na3 50-99-7
F050312 小鼠IgA抗体 Mouse IgA
DL-组*酸 Fmoc-Glu(OtBu)-OH 4998-57-6
BL1347 BCIP/NBT显色试剂盒
尿蛋白检测试剂盒(丽春红比色法)   100T
ARB12853 小鼠水通道蛋白3(AQP-3)Elisa定量检测 Mouse aquaporin 3,aqp-3 ELISA KIT
FMOC-D-色*酸 Quercetin 86123-11-7
BTN100212 一管式点突变试剂盒 One-Tube Mutagenesis Kit
PY04-039  吖啶黄素(II)  3mg/支×10支  每支添加于225ml缓冲蛋白胨水(BPW)培养基中制成MBP，用于沙门氏菌和李斯特氏菌前增菌培养
喹哪啶红指示剂   100ml
O-(内-二环[2,2,1]庚-5-稀-2,3-二甲酰亚胺)-N,N,N",N"-四甲基六*磷酸盐 Chromotropic acid disodiu*(代"m") salt dihydrate 208462-94-6
CBZ-L-谷*酰胺 DEAE Sephadex A-25 2650-64-8
北京两管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq)价格关键词：两管式RT-PCR试剂盒,MMLV-Taq,Two-Tube RT PCR Kit,两管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq),BTN80206


·烷基腺嘌呤DNA糖基化酶(AAG)
编号：BTN130643
英文名称：Alkyladenine DNA Glycosylase
规格：500U
人类烷基腺嘌呤DNA糖基化酶(hAAG)作用于烷基化和氧化了的DNA 损伤位点，包括3-甲基腺嘌呤、7-甲基鸟嘌呤、1,N6-乙*(代"烯")基腺嘌呤和次黄嘌呤。hAAG催化 N-糖苷键的水解断裂，释放受损碱基。其反应示意图如下：


产品特点：
1．单细胞凝胶电泳(彗星试验)；
2．碱洗脱；
3．碱解旋。

产品组成：

组份	规格
hAAG(10000U/mL)	50μL
10×Buffer	1mL
使用手册	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：1单位是指在10μl反应体系中，37℃条件下，1小时从1pmol含有单一脱氧次黄嘌呤核苷位点的34bp寡核苷酸双链产生一个AP位点所需的酶量。

热失活：65℃,20分钟。

·单细胞RNA扩增试剂盒
编号：BTN130551
英文名称：Single Cell RNA Amplification Kit
规格：80次
一个哺乳动物单细胞一般只有约10pg的总RNA，其中的mRNA 只有1-5%(约10E5-10E6个分子),因此直接用单细胞进行mRNA扩增具有极大的技术难度。本公司进过精心研究，整合最新技术，开发出了可以直接用单个细胞进行mRNA扩增的试剂盒，其原理如下(仅以扩增mRNA 链为例)：


产品特点：
1. 双向，既可用于制备正义的mRNA，也可用于制备反义的aRNA(antisense RNA)或cRNA(complimenary RNA)。
2. 直接用单细胞裂解液进行反应，免RNA提取，整个过程只需要半天。
3.适用于多种单细胞，包括卵细胞、干细胞、FACS分离细胞等单细胞，还可用于培养细胞和胚胎等实体租组织(需要单细胞化)，也可以使用10pg-10ng 纯化的总RNA作为模板。
4. 假阴性和假阳性率均小于6%，RNA扩增成功率为90%。
5. 所得mRNA或aRNA(cRNA)可以直接用于后续的RT-PCR、芯片杂交、表达谱分析等实验。
6. 本试剂盒足够对80个单细胞进行单细胞RNA扩增。
 

成分	规格
P1(cDNA一链合成引物)	360μl
P2(cDNA 二链合成引物)	360μl
P3(T7-cDNA 二链合成引物)	100μl
溶液A(4×细胞裂解液)	100μl
溶液B(RI)	10μl
溶液C(逆转录酶)	40μl
溶液D	10μl
溶液E	10μl
溶液F	150μl
溶液G(TdT)	60μl
超纯水	10μl
PCR 3.0	9ml
转录预配液，2×	500μl
T7 RNA聚合酶	50μl
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
强烈建议首次使用本产品前，先预实验，用纯化好的任何总RNA 10倍系列稀释，直到浓度为25pg/μL，然后用0.4μL(即10pg RNA，相当于单个细胞的总RNA量)按本操作说明书进行扩增，一次需平行做4-10个重复。
下列步骤仅用于制备mRNA，如果需要制备aRNA(cRNA)，则需要把P1和P2引物对换，其他成分不需要做任何改动。

一：新鲜准备工作液
见手册左侧各表，据此配制的的各工作液足够扩增10个单细胞用。如果一次实验没有10个细胞，工作液的量仍需按10个细胞的用量新鲜配制，冰上放置时间不能超过1小时。

二：准备单细胞悬液
如何制备单个细胞取决于实验样品和所能使用的仪器设备，此处所列步骤仅供分离单个培养细胞的参考，本试剂盒不提供相关试剂。对其他材料(如干细胞克隆、2-8细胞胚胎、胚囊、胚胎组织等)用户需自行选用合适的制备单细胞的方法。对已经处于单细胞悬浮状态的细胞(如FACS分离细胞、卵细胞等)，则可以跳过此步直接进入下步操作)：
1. 按常规胰酶方法处理培养细胞或组织，将细胞重悬于培养基中并计数。
2.转移100-4000个细胞到离心管中，400g离心4分钟，弃上清。
3. 将细胞沉淀重悬于50μL自备PBS中，使其终浓度为2-80个细胞/μL，所得细胞悬液可直接用于下面的反应。本方法一个管中可以处理1-40个细胞，但这些细胞必须是先分离成独立细胞的，不能是未分离的细胞团。

三：cDNA 合成和PCR扩增
4. 标记10个0.5mL PCR管(10 号设为阴性对照)，按下表加入各成分：

成分	1-10 号样品管
RT工作液(按下表1 配)	每管加4.0μL，共10管
细胞样品(来于第3 步)或10pg-10ng/μL纯化的RNA	1-19号加0.5μL样品(1-40个细胞)，10号用0.5μL水代替
·70℃水浴90秒，转冰上放置1分，短暂离心
溶液C(试剂盒提供)	每管加0.5μL，共10管
·总反应体系为5μL，37℃水浴90m，70℃水浴10m，冰上放置1分钟，短暂离心
Tailing预处理液(按下表2 配)	每管加1μL，共10管
·短暂离心后PCR 仪上37℃ 30m，再80℃ 25m，离心后放冰上1m
Tailing工作液(按下表3配)	每管加6μL，共10管
·短暂离心后37℃15分钟，70℃10分钟，放冰上1分钟
·上步反应管中每个取3μL分别加入2个新PCR管做模板，共分得20个PCR管。每个反应管中剩约6μL，作未PCR对照放-20℃待用。
引物+水混合液(按下表4 配)	每个PCR管加12μL，共20管
PCR Mix 3.0	每管加15μL，共20管
·按(95℃3分，50℃2分，72℃3分)参数循环1次，冰上放1分
P2	每管加1.5μL，共20管
自备PCR级石蜡油	若PCR 仪无热盖，则每管加50μL
·(95℃30秒，67℃1分，72℃3分，每次循环后在72℃的时间增加6秒)循环20次，4℃放置

5. 将模板来于一个样的2 管PCR产物汇集，20 管汇集后将得10 管(对应于10个样)，每管30μL。只有循环数在24次以上时电泳才能检测到PCR产物，故此步不需要电泳检测。
6. 用自备的PCR产物纯化回收试剂盒回收PCR产物，去除残留的引物，50μl 洗脱DNA，产物放-80C 长期保存。
7. 10个样和其对应的未PCR 对照(共20个样)各取0.5μL 为模板进行PCR或定量PCR分析，判断靶基因在哪个样品中得到了扩增和扩增效率如何。没有靶基因的可以选择看家基因。客户需自备相关引物和试剂。

四：制备含T7启动子的模板(下列操作只针对10个样品中的一个)
8. 选一个靶基因得到扩增的DNA样品(第6 步回收所得)，各取1μl 加到10个PCR 管中，各加29μl 新鲜配制的PCR Mix(按下表5 配)，混匀后按以下参数扩增1次(95℃ 5m30s，64℃ 1m，72℃ 5m18s)，再按以下参数扩增8次(95℃ 30秒，67℃ 1m，72℃ 5m18s，每次循环后将72℃延伸时间增加6秒)，PCR结束后在72℃保温10m。
9. 汇集10 管PCR反应液(共300μl)，用自备的PCR产物纯化回收试剂盒回收PCR产物，30μl 洗脱。
10. 将30μL洗脱DNA全部上样到琼脂糖胶上进行电泳(只要电泳10分钟即可，否则胶体积太大，回收效率低)，360nm紫外灯下切胶(250bp以上区域)，最后用30-50μL 洗脱。此步所得PCR片段无250bp以下的非特异扩增产物，可直接用于后续体外转录。

五：T7 体外转录：请按该试剂盒的使用说明书操作(本产品含体外转录试剂)。

表1:RT工作液

成分	用量
超纯水	30.8μl
溶液A	11μl
溶液B	1.1μl
P1稀	1.1μl
合计	44μl

注：P1 稀是将1μl P1加入到100μL超纯水新鲜配制后得到，需新鲜配制。用户可在此步加入自备的内参，但超纯水的用量要相应减少。如加入2μL内参，则少加2μL 水。

表2:Tailing预处理液

成分	用量
超纯水	8.8μl
溶液D	1.1μl
溶液E	1.1μl
合计	11μl

表3:Tailing工作液

成分	用量
超纯水	42.9μl
溶液F	16.5μl
溶液G	6.6μl
合计	66μl

表4:引物+水混合液

成分	用量
超纯水	231μl
P1	33μl
合计	254μl

表5:PCR Mix

成分	用量
超纯水	132μl
P1	11μl
P3	11μl
PCR 3	165μl
合计	319μl

我公司正在火爆促销核酸扩增(PCR)系列产品，欢迎您的垂询选购北京两管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq)价格。