北京一步式细菌DNA提取试剂盒报价

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北京百奥莱博供应的北京一步式细菌DNA提取试剂盒报价用于生化研究，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多一步式细菌DNA提取试剂盒等DNA纯化产品请联系我司咨询订购。

名称：北京一步式细菌DNA提取试剂盒报价
英文名：One-step Bacteria DNA extraction kit
品牌：百奥莱博
编号：BTN60806
产地：国产|进口
本试剂盒是在一步裂解式超快细菌基因组DNA提取试剂，其最大特点是快速，可以用于绝大多数革氏阳性和阴性细菌基因组DNA的快速提取。

试剂盒特点：
1. 操作简单，整个过程不到10分钟(对一个样品而言)。
2.产率一般在3-10μg/mL过液培养细菌。
3. OD260/280一般在1.8以上。
4. DNA片段长度一般在40-50 Kb左右。
5.适用范围广，可以使用于绝大多数细菌。
6. 也可以使用过夜培养细菌和菌落。
7. 得到的DNA可以直接用于PCR，酶切或其他分子生物学实验。

试剂盒组成：

 

成分	规格
溶菌酶	600mg
一步式细菌裂解液	25ml
专用上柱液	50ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
DNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存(溶菌酶需要冰袋运输，-20℃保存)，有效期一年。

使用方法：

一: 对革氏阴性细菌
1. 如果一步式裂解液产生沉淀，需要65℃预热直到沉淀溶解，摇匀待用。
2. 将0.1-1.5mL过夜培养的菌液转移到1.5mL塑料离心中，室温12000rpm离心1分钟沉淀细菌，弃上清。
3. 加入0.5mL一步式细菌裂解液到离心管中，吹打混匀。
4. 加入0.5mL专用上柱液到裂解液中，颠倒混匀后全部转移到离心吸附柱中，室温放置至少2分钟。
5. 12000rpm室温离心1分钟，DNA将吸附在离心吸附柱的膜上，倒弃收集管中的穿透液。
6. 将0.5mL通用洗柱液加入离心柱中，12000rpm室温离心1分钟，弃穿透液。
7. 重复第6步操作一次。
8. 空甩半分钟，将离心吸附柱转移到新的离心管中。
9. 加50-100μL DNA洗脱液，室温放置3～5分钟。
10. 12000rpm室温离心1分钟即得DNA溶液。

二: 对革氏阳性细菌
1. 将0.1-1.5mL过夜培养的细菌离心1分钟后，重悬于0.6mL溶菌液中(60mL自备超纯水+600mg溶菌酶)，颠倒混匀5-10次后37℃保温30分钟(有的菌种可能需更长时间，需要自己根据细菌不同而决定)。
2. 12000rpm离心10分钟，小心弃上清。
3.后续处理接革氏阳性细菌处理的第3步。

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·小鼠基因组DNA
编号：BTN131033
英文名称：Mouse Genomic DNA
规格：100μg
本产品为小鼠基因组DNA，是从无疾病小鼠全血中分离到的。利用脉冲电场凝胶电泳测量，90%以上的DNA的大小大于50kb。该DNA适用于Southern blot杂交,基因组分析(包括 PCR)及基因组文库构建等实验。

储存条件：低温运输、4℃保存、有效期一年。

·藻类RNA柱式提取试剂盒
编号：BTN120503
英文名称：Algae RNA Column extraction kit
规格：50次
本试剂盒是专门用于各种藻类样品RNA提取的产品。

试剂盒特点：
1. 操作简单快捷，整个过程只需要约30分钟。
2. RNA纯度高，OD260/280一般都在2.0左右，可直接用于RT-PCR、Northern杂交、microarray hybridization、cDNA合成等。
3. RNA产量高，一般在20-70μg/mL液体藻类培养物(约2.0 ×107个细胞)。
4. 非酶细胞破裂法，适用于各种形态的藻类和各个种属的藻类。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	50ml
溶液C	100ml
溶液D	30ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	100ml
RNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 将1-5mL液体藻类培养物在1.5mL塑料离心管中5000-7,000rpm 4℃离心 1分钟，并弃尽液体培养基(可以分多次离心)。
2. 加入0.5mL溶液A并充分吹打混匀。注意：溶液A存放时容易产生沉淀，如果有沉淀，用前请置于65℃融化并充分摇晃均匀。
3. 加入0.5mL溶液B，剧烈振荡30秒。
4. 65℃保温5分钟。注意：不要超过5分钟，否则RNA容易降解。
5. 5000-7,000rpm 4℃离心3～5分钟，转移上清到一自备的、干净的1.5mL塑料离心管中。
6.在上清液中加入0.2mL自备的*仿，充分振荡30秒混匀。
7. 4℃ 5000-7,000rpm离心3～5分钟，转移上清液到一自备的、干净的5-10mL塑料离心管中。
8. 加入相当于上清液(约1mL左右)3倍体积的溶液C和1倍体积的溶液D，充分混匀。如果上清为1mL，则加入3mL溶液C和1mL溶液D。
9. 将混合液分多次转移到离心吸附柱中，每次转移0.7mL混合液到离心吸附柱中，室温放置2-3分钟以让RNA跟吸附膜充分结合，然后5000-7,000rpm室温离心30-60秒，弃收集管中的穿透液，然后再加入0.7mL混合液，重复上面的操作，直到混合液全部挂柱。
10. 第一次洗涤：将0.7mL通用洗柱液加到离心吸附柱中，室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
11. 第二次洗涤：一次洗涤一般足够去除杂质，但如果样品OD260/280比值不高，可以再用0.3mL通用洗柱液重复上步洗涤一次。
12.室温离心空柱子(带收集管)半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响RNA的使用。
13. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 1.5mL塑料离心管中，加入30-100μL RNA洗脱液。具体加多少根据RNA浓度决定，建议先使用小体积洗脱液，这样浓度过高还可以稀释。
14.室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
15. RNA完整性的电泳检测：
 注意：普通DNA上样液不含变性剂，更没经过去RNase处理，所以最好不要用于RNA电泳。
16. RNA产量和纯度产率测定：
 将5-10μL RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度×体积)和产率(RNA产量/细菌用量)。注意不要将RNA稀释在DEPC水中检测OD260和OD280，否则光吸收比在TE(pH7.5-8.2之间)中测得的低10%-15%；也不要稀释过度，使OD读数在仪器的有效范围之外，这样得到的OD比值没有意义。


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·Hoechst 33258干粉
编号：BTN130864
英文名称：Fluorescent Dye Hoechst 33258，Powder
规格：10mg
Hoechst 33258是一种可透过细胞膜并对DNA染色的细胞核染色试剂，它在嵌入双链DNA后释放强烈的蓝色荧光，其常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。

CAS号：23491-45-4
分子式：C25H24N6O•3HCl
分子量：533.88

产品特点：
1．Hoechst 33258是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。
2．Hoechst 33258常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。也常用于普通的细胞核染色，或常规的DNA染色。
3．Hoechst 33258的最大激发波长为346nm，最大发射波长为460nm；其和双链DNA结合后，最大激发波长为352nm，最大发射波长为461nm。
4．Hoechst 33258溶于水，溶解度可达10mg/mL。用于细胞核染色时，推荐的Hoechst 33258工作浓度为0.5-10μg/mL。

储存条件：低温运输，-20℃干燥避光保存，有效期一年。

使用举例：
1．用PBS或合适的缓冲液制备10～50 µM Hoechst33258染料。
2．将1/10细胞培养基体积的Hoechst染料溶液加入细胞培养物中。
3．在37℃培养细胞10～20分钟。
4．用PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。
5．用带有350nm激发波长，460nm发射波长的滤光片的荧光显微镜观察细胞。


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·96孔板质粒DNA提取试剂盒(真空法)
编号：BTN130994
英文名称：Plasmid DNA extraction kit(96-well plates)(Vacuum method)
规格：1次

·即用型蓝白T载体A型(T7-SP6，有MCS)
编号：BTN60603
英文名称：Instant Blue-White Vector T，Type A
规格：20次
本产品是用Xcm I酶切环状的可保种型蓝白T载体(BTN60803)去掉一段1.3Kb的插入片段后得到的线性DNA片段(载体部分)，其两个末端的5´都有一个突出的T，可以用于快速克隆具有加尾活性的耐热酶(如Taq DNA聚合酶)扩增得到的PCR片段。

产品特点：
1. 由于是通过Xcm I酶切制备，所以载体两端的带T率为100%，远高于用Taq DNA聚合酶和TdT末端转移酶在平末端载体加尾得到的T载体。
2. 克隆的阳性率一般在90%以上，缩短了筛选过程。
3. 插入位点两侧有对称的常见酶切位点(如EcoR I)，便于对克隆的PCR片段进行近一步的分析。
4. 克隆位点两侧分别有T7和T3 RNA聚合酶启动子，便于用克隆的PCR片段制备RNA探针。
5.可以使用pUC/M13 Forward和Reverse测序引物测定插入片段的序列。
6. T克隆位点位于β-半乳糖苷酶的α-肽编码区内，可以进行蓝白斑筛选。
7.含有丝状噬菌体f1 复制起始子，可以制备单链DNA。

产品组成：

成分	规格
即用型蓝白T载体(40ng/uL)	20μl
阳性对照(40ng/uL)	5μl
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期两年。

使用方法：

一. PCR产物的纯化和定量
1. 将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳分离。最好不要使用TBE缓冲液，因为它会影响DNA的胶回收效率。
2.在长波(360nm)紫外灯下快速切胶，尽可能切掉多余的凝胶。为避免嘧啶二聚体的形成，可以使用百奥莱博的DNA防护剂UV Scavenger(BTN60601)。
3. 用百奥莱博的柱式DNArc(BTN60202)纯化回收PCR片段。溶解PCR片段的超纯水体积越小越便于后续操作。
4. 将回收的片段与浓度已知的DNA Marker在含EB(BTN3180)或绿如蓝染料(BTN70303)的琼脂糖凝胶中电泳，通过比较DNA条带的荧光强度而估测PCR纯化产物的浓度。注意：一般不推荐使用测OD260的方法，因为回收的DNA很珍贵，该方法需要比较多的DNA。
5. 如果所得的DNA片段浓度较低，可以使用本公司核酸浓缩剂(BTN110801)将其浓缩到需要的浓度。
6. 如果PCR片段为平末端，则需要用加A试剂盒处理，否则不能用于与T载体的连接反应。

二. 连接反应
1. 短暂离心装有T载体的离心管。
2.在两个离心管中加入下列成分：

成分	样品管	负对照	正对照
自备T4 Ligase Buffer，10×	1μl	1μl	1μl
蓝白T载体(40 ng/uL)	1μl	1μl	1μl
自备PCR纯化产物	见下注	不加	不加
阳性对照(40ng/uL)	不加	不加	1μl
自备T4 Ligase(5-10U/μL)	1μl	1μl	1μl
补超纯水到	10μl	10μl	10μl

注：PCR纯化产物与蓝白T载体的摩尔比最好为3-10，可以按下面的公式计算出连接反应中需要的PCR纯化产物的ng数:

假如插入片段和载体的连接比例设定为3，连接反应中加入蓝白T载体(长度为3Kb)的量为40ng，则需要长度为0.5Kb的PCR纯化产物的量是:

3. 用移液器吹打连接反应使之混匀后，16℃孵育12小时(或按T4 Ligase供货商提供的说明书进行连接)。

三. 细菌转化
1. 将100μL感受态细胞于冰上解冻。注意：最好使用转化效率在1×108cfu/μg DNA以上的感受态细胞进行转化，因为采用单碱基突出端进行连接不是很有效。
2. 取5μL连接产物加入到感受态细胞中，轻轻旋转几次以混匀内容物。在冰上放置30分钟。
3. 将管放入预加温到42℃的水浴中，热休克90秒。快速将管转移到冰浴中。

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