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- 详细信息
- 技术资料
- 保存条件:
常温运输及保存(溶菌酶需要-20℃保存)
- 保质期:
长期
- 英文名:
Bacteria DNA column extraction kit(with lysozyme)
- 库存:
291
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产供应柱式细菌DNA提取试剂盒(含)厂家,我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂,价格优惠,欢迎广大科研工作者垂询订购。
名称:柱式细菌DNA提取试剂盒(含)厂家
编号:BTN60802B
英文名:Bacteria DNA column extraction kit(with lysozyme)
规格:50次
品牌:百奥莱博
产地:国产|进口
本试剂盒可以用于绝大多数革氏阳性和阴性细菌基因组DNA的快速提取。
试剂盒特点:
1. 操作简单,整个过程不到20分钟。
2.产率一般在5-20μg/mL过液培养的饱和菌液(108-109个细胞)。
3. OD260/280一般在1.8以上,可直接用于PCR、酶切、杂交等实验。
4. DNA片段长度一般在40-50 Kb左右。
5. 每次提取可以处理0.1-1.5mL的细菌,也可以使用菌落。
6. 价廉物美,与国外同类产品相比质量相当,但价格便宜。
7. 安全无毒,本试剂盒对人体无害,无腐蚀性和刺激性气味。
8. 本产品分A型(无溶菌酶,适用于革氏阴性细菌)和B型(含溶菌酶,适用于革氏阳性细菌)。
试剂盒组成:
| 成分 | A型 | B型 |
| 溶菌酶干粉 | 无 | 600mg |
| 溶液A | 15ml | 15ml |
| 溶液B | 7.5ml | 7.5ml |
| 溶液C | 30ml | 30ml |
| 离心吸附柱 | 50套 | 50套 |
| 通用洗柱液 | 50ml | 50ml |
| DNA洗脱液2.0 | 10ml | 10ml |
| 说明书 | 1份 | 1份 |
储存条件:常温运输及保存(溶菌酶需要-20℃保存),有效期一年。
使用方法:
注意:溶液A和溶液B容易产生沉淀,溶液B十分粘稠,均需要放置在65℃预热使沉淀溶解、粘稠度降低,用前充分摇匀。
一: 对革氏阴性细菌样品,只需用A型
1. 将0.1-1.5mL过夜培养的菌液转移到1.5mL离心管中,12000rpm室温离心1min沉淀细菌,弃上清。
2. 加入300μL预热的溶液A到细菌沉淀中,充分吹打均匀。
3. 再加入150μL预热的溶液B到离心管中,颠倒数次混匀。此时溶液中可能有白色丝状悬浮物产生。由于溶液B比较粘稠,可以采取称量方法取用,150μL约等于150-160mg。也可以将1mL枪头剪去一截再吸取。
4. 65℃放置3~5分钟。如果室温放置,DNA产量会降低10-20%。
5. 加入200μl自备*仿,震荡混匀10-30秒,此时溶液将呈乳白色。
6. 12000rpm室温离心2分钟。此时上清液将变得透明,中间层有白膜。小心转移上清液到一个新的1.5mL塑料离心管中,避免触及中间层的白膜。
7. 加入1.5倍体积(约0.7mL)的溶液C,颠倒混匀后全部转移到离心吸附柱中,室温放置至少2分钟。
8. 12000rpm室温离心1分钟,DNA将吸附在离心吸附柱的膜上,倒弃收集管中的穿透液。
9. 将0.5mL通用洗柱液加入离心柱中,12000rpm室温离心1分钟,弃穿透液。
10. 重复上步操作一次。
11. 空甩半分钟去除残留液体,将离心吸附柱转移到新的1.5mL离心管中。
12. 加50-100μL通用洗脱液,室温放置3~5分钟。
13. 12000rpm室温离心1分钟即得DNA溶液。
14. 由于本产品使用的离心吸附柱吸附DNA的能力较强,可以重复上步操作一次以便得到更多的DNA。
15. 直接取5-10μL电泳检测DNA,其余放冰箱备用。
二: 对革氏阳性细菌样品,需用B型(含溶菌酶)
1. 将0.1-1.5mL过夜培养的革氏阳性细菌12000rpm室温离心1分钟后,重悬于0.6mL溶菌液中(溶菌液配制:30mL无菌水+600mg溶菌酶,配制后最好分装成小管并放-20℃长期保存,每次只用一小管),颠倒混匀5-10次后放37℃保温至少30分钟(有的革氏阳性菌种可能需更长时间,自己摸索)。
2. 12000rpm室温离心10分钟,小心弃上清。
3.后续处理接上面的革氏阴性细菌提取步骤中的第2步。
三:其他注意事项
1.可以直接使用细菌菌落提取DNA,操作时直接将细菌菌落挑入到溶液A中,后续操作同上。
2.从单个菌落中提取到的DNA较少,所以只用30μL通用洗脱液洗脱。
使用效果:
图注:用本产品提取1.0mL过夜培养的E.coli Tg1细菌,DNA最后溶于100μL TE中,取20μL上样。M表示全长的λDNA,其余均为提取的样品DNA。
想要了解更多关于柱式细菌DNA提取试剂盒(含)厂家的价格、品牌、厂家、说明书、促销信息,请和我们联系。此外我公司还销*(代"售")下面的产品:
·利福平溶液
编号:BTN120700
英文名称:Rifampicin Solution
规格:10mL
本产品为浓度为100mg/mL的利福平溶液(溶剂为DMSO)。利福平(甲哌利福霉素;3-(4-甲基-1-哌*(代"嗪")基亚胺甲基)利福霉素SV;Rifampin;Rifamycin AMP),分子式:C43H58N4O12,分子量:822.94,CAS号:13292-46-1。利福平是从利福霉素B得到的一种半合成抗生素,能抑制细菌DNA转录合成RNA,可抑制成熟病毒粒子DNA和蛋白质的合成,是细菌核糖核酸聚合酶的特殊抑制剂,可用于治疗结核病、肠球菌感染等。除作为抗生素应用外,在分子生物学中可用做从细菌中去除质粒的试剂利福平。
储存条件:常温运输,4℃保存,有效期6个月。
·20% PVP K30溶液(DNA级)
编号:BTN100865
英文名称:Rifampicin Solution
规格:250mL
本产品为浓度为100mg/mL的利福平溶液(溶剂为DMSO)。利福平(甲哌利福霉素;3-(4-甲基-1-哌*(代"嗪")基亚胺甲基)利福霉素SV;Rifampin;Rifamycin AMP),分子式:C43H58N4O12,分子量:822.94,CAS号:13292-46-1。利福平是从利福霉素B得到的一种半合成抗生素,能抑制细菌DNA转录合成RNA,可抑制成熟病毒粒子DNA和蛋白质的合成,是细菌核糖核酸聚合酶的特殊抑制剂,可用于治疗结核病、肠球菌感染等。除作为抗生素应用外,在分子生物学中可用做从细菌中去除质粒的试剂利福平。
储存条件:常温运输,4℃保存,有效期6个月。
·痰液采集器
编号:BTN130938
英文名称:Sputum collector
规格:1个
本产品为浓度为100mg/mL的利福平溶液(溶剂为DMSO)。利福平(甲哌利福霉素;3-(4-甲基-1-哌*(代"嗪")基亚胺甲基)利福霉素SV;Rifampin;Rifamycin AMP),分子式:C43H58N4O12,分子量:822.94,CAS号:13292-46-1。利福平是从利福霉素B得到的一种半合成抗生素,能抑制细菌DNA转录合成RNA,可抑制成熟病毒粒子DNA和蛋白质的合成,是细菌核糖核酸聚合酶的特殊抑制剂,可用于治疗结核病、肠球菌感染等。除作为抗生素应用外,在分子生物学中可用做从细菌中去除质粒的试剂利福平。
储存条件:常温运输,4℃保存,有效期6个月。
·柱式分枝杆菌DNA提取试剂盒
编号:BTN70703
英文名称:Mycobacteria DNA column extraction kit
规格:50次
分枝杆菌属(Mycobacterium)是极为古老的细菌,与人类的疾病相关的就有25种以上,包括引起结核病的结核分枝杆菌(Mycobacteria tubercμLosis)。近年来由于多重耐药性分枝杆菌的出现,分枝杆菌再次成为人们关心的细菌。PCR快速诊断是目前检测分枝杆菌的主流方法,但由于此类细菌具有十分独特的坚硬的细胞壁,快速提取其基因组DNA一直是十分棘手的技术问题。本产品就是为解决这一问题而开发。
试剂盒特点:
1. 操作简单,客户不需要准备额外的试剂。
2. PCR检测灵敏度一般在10-100CFU/mL样品。
3. 既可以使用培养的细菌,也可以使用痰液、精液、血液、脑脊液等样品。
4. 价廉物美,与国外同类产品相比质量相当,但价格便宜。
5. 安全无毒,本试剂盒对人体无害,无腐蚀性和刺激性气味。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 化痰液 | 100ml |
| 溶液A | 7.5ml |
| 溶液B | 15ml |
| 离心吸附柱 | 50套 |
| 通用洗柱液 | 50ml |
| DNA洗脱液2.0 | 10ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输和保存,有效期一年。
使用方法:
注意:文献报道部分分枝杆菌在DNA提取过程中还有形成菌落的能力,所以任何丢弃的溶液都必须按有传染性的污染物品对待,并严格按有关部门要求进行消毒处理。
一:培养的分枝杆菌样品的预处理
1. 刮取培养的分枝杆菌到0.5mL自备TE缓冲液中。
2. 80℃放置20分钟以杀灭细菌。
3. 3000 g室温离心15分钟,弃上清。
4.细菌沉淀放-20℃冰箱备用或直接进入细菌基因组DNA提取步骤。
二:含分枝杆菌的痰液样品的预处理
1. 将需要处理的痰液样品加入到干净的10mL或15mL塑料离心管中。
2. 加入等体积的化痰液,充分混合均匀后室温放置15-30分钟。如果痰很浓,可以延长保温时间。
3. 3000 g室温离心15分钟,弃上清。
4.细菌沉淀放-20℃冰箱备用或直接进入细菌基因组DNA提取步骤。
三:含分枝杆菌的血液样品的预处理
1. 用自备红细胞裂解液对血液进行红细胞裂解处理,具体操作见百奥莱博红细胞裂解液(BTN60403)使用手册。
2. 将得到的白细胞沉淀-20℃或更低温度放置10分钟。
3. 迅速将得到的白细胞沉淀100℃加热10分钟。
4.上述处理将使大部分白细胞破裂,加入自备的TE或PBS缓冲液,直到离心管体积的一半位置。此步使白细胞的DNA进入缓冲液中。
5.离心5-10分钟沉淀细菌,离心速度取决于离心管的大小。如果样品在1.5mL离心管,则可以12000~15000g室温离心。如果样品在10-15mL离心管,则3000-5000g室温离心。
6. 吸弃上清(含白细胞DNA)后所得细菌沉淀可以放-20℃冰箱备用或直接进入细菌基因组DNA提取步骤。
四:细菌基因组DNA的提取
1. 将150μl 65℃预热过的溶液A加到有细菌沉淀的离心管中,充分震荡混匀。
2. 将细菌和溶液A的混合物转移到一个干净的1.5mL塑料螺旋盖离心管中。强烈建议不要使用压盖式塑料离心管,否则后面处理过程中溶液容易漏出。
3. 加入300μl溶液B和300μl自备*仿,充分震荡混匀。
4. -20℃放置直到液体凝固,一般需要20-60分钟。过夜放置也可。
5. 放室温融化后振荡半分钟。
6. 12000~15000g室温离心3~5分钟,小心转移上清到离心吸附柱中,室温放置2分钟。
7. 12000~15000g室温离心半分钟,弃穿透液。
8. 加入0.5mL通用洗柱液 12000~15000g室温离心半分钟,弃穿透液。
9. 重复第8步的洗涤过程一次。
10. 短暂离心半分钟。此步不要省略,否则残留的洗柱液(含乙醇)将会影响DNA电泳、酶切和PCR等反应。
11. 将离心吸附柱转移到一新的离心管中,加入30-100μL DNA洗脱液2.0,12000~15000g室温离心半分钟,所得溶液即基因组DNA。
柱式细菌DNA提取试剂盒(含)厂家关键词:BTN60802B,含,柱式细菌DNA提取试剂盒(含),Bacteria DNA column extraction kit(with lysozyme)
·一管式病毒RNA提取试剂盒
编号:BTN3073
英文名称:One-tube virus RNA extraction kit
规格:100次
本试剂盒是专用于血清(血浆)等液体样品中提取病毒RNA的纯化试剂。本产品回收率极高,尤其适合于整合到临床RT-PCR检测试剂盒中。且能用于提取其他液体样品和微量样品。
产品特点:
1. 回收率达到90%以上,高于绝大部分基于离心柱的提取方法。
2. 灵敏度高,RT-PCR检测到的最终灵敏度可以达到50-100拷贝/mL(对HIV和HCV)。
3.一管式操作,不使用离心柱,整个操作过程均在室温下完成。
4. 无毒环保,不需要使用*酚和*仿等有毒的有机溶液。
5.可放量,如果加上病毒离心富集步骤,每管最多可以处理样品1.5mL。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 溶液A | 30ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输,4℃保存,有效期一年。
使用方法:
一:准备工作
1. 血浆的抗凝剂必须是EDTA或ACD,不能是肝素。使用ACD时由于所加入ACD会增加体积,样品会被稀释,得到的病毒滴度会比使用EDTA低15%左右。
2. 用于制备血浆的全血在2-25℃放置的时间不能超过6小时,在此时间内,可以室温800-1600g离心20分钟,上清即为血浆。
3. 血浆可以在2-8℃或更低温度下运输,可以在室温放置一天,2-8℃放置5天,-20℃以下长期保存。
4. 血浆最好按0.6mL/管的量分装保存,以避免反复冻融。
5. 实验前所有试都必须放置在室温。
6. 实验当天新鲜配制70%的乙醇。
二:病毒提取操作
1. 标记1.5-2mL螺旋盖塑料离心管(如Sarstedt CAT#:782.694.006),为避免污染,建议不要使用压盖式塑料离心管。注意设置阳性和阴性对照。
2. 每管(包括正负对照管)中加入0.6mL病毒RNA提取试剂盒溶液(需提前融化)。
3.快速震荡样品几秒,再短暂离心,取0.2mL液体样品加入到已经装有0.6mL病毒RNA提取试剂盒溶液的管中。如果病毒需要富集,可以将1.5mL液体样品在4℃ 24,000 g冷冻离心60分钟,移弃1.3mL上清后在取用样品。
4.在正负对照样品管中分别加正负对照样品。
5.室温放置10分钟。此间可以在每个管上做个标记,以在下步区别向心面和离心面。
6. 振荡数秒后加入0.7mL室温异丙醇,旋紧盖后振荡30秒混匀,把离心管的向心面对向转头的中央,13,000-15000g室温离心至少15分钟。
7.小心移弃上清,注意不要触及管底和管壁离心面的RNA沉淀(此时可能看不见)。
8. 加入1.0mL室温70%乙醇,振荡数秒后 15000g室温离心5分钟。注意:在离心机中放置离心管时将其向心面对向转头的中央。
9.小心移弃上清,注意不要触及管底和管壁离心面的RNA沉淀(此时呈膜状沉淀)。
10. 再短暂离心数秒,用移液器移弃残留液体(70%乙醇),否则它会影响后续反应。
11. 加入200μl RNase-free水或百奥莱博的1×液相RNase Scavenger(能灭活残留的RNase,而RNase-free水无此功能),用移液枪仔细吹打离心管管底和管壁离心面的膜状RNA沉淀,溶液将呈混浊状,含少量不溶物。由于不溶沉淀物中含有RNA,所以不要离心后取上清使用,必须取混合液使用,哪怕很浑浊。
12. 直接取适量用于RT-PCR,如果溶于200μl水,同时样品使用量不超过RT-PCR体系的1/2,不溶物一般不会影响RT-PCR。剩余样品可以室温放置2小时,也可保存于-80℃保存一个月。
疑难解答:
Q:提取液体样品/病毒核酸(RNA或DNA)为何很难?
A:原因一是量少。病毒颗粒中的RNA或DNA是作为遗传物质保存,每个病毒最多只携带几个拷贝(而一个细胞中有上万个RNA分子),同时其长度也十分有限(是细胞基因组的万分之一以下),样品中病毒数往往也不是很多,使得样品中核酸的绝对量几乎是微乎其微,十分容易丢失。另外,由于得到的核酸量少,不能使用电泳和测OD检测,只能通过PCR或RT-PCR检测,而病毒RNA往往具有稳定的二级结构,进一步增加了鉴定的难度(即不知道是RNA提取的问题还是RT-PCR的问题)。
Q:如何判断是病毒RNA没提取出来还是提取出来了但没有RT-PCR成功?
A:在RT-PCR反应中加阳性和阴性对照。
柱式细菌DNA提取试剂盒(含)厂家关键词:BTN60802B,含,柱式细菌DNA提取试剂盒(含),Bacteria DNA column extraction kit(with lysozyme)
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α-酮基缬*酸*盐 Glutathione Sepharose 4FF 51828-94-5
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