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- 百奥莱博
- 北京
- WE0164-PKR
- 2025年07月11日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
室温(15～30℃)
- 保质期：
长期
- 英文名：
PlaPure Maxi Extraction Kit
- 库存：
750
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销*(代"售")高纯质粒大提试剂盒厂家，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。
名称：高纯质粒大提试剂盒厂家
品牌：百奥莱博
英文名：PlaPure Maxi Extraction Kit
编号：WE0164
规格：10次
产地：国产|进口
本试剂盒提供一种简单、快捷、高效的提取质粒的方法，在碱裂解法裂解细胞的基础上，采用独特的硅基质膜吸附技术和试剂配方，通过离心吸附柱在高盐状态下高效专一的结合溶液中的质粒DNA，经过两步洗涤，一步洗脱，最大限度的去除蛋白质、基因组、RNA和其他杂质。得到的DNA可直接用于PCR、酶切、测序、连接等生物学实验。
试剂盒组成：
| 组份 | 50次 |
| Buffer P1 | 125ml |
| Buffer P2 | 125ml |
| Buffer P3 | 125ml |
| Buffer PB | 30ml |
| Buffer PW(浓缩液) | 50ml |
| Buffer EB | 30ml |
| RNase A(10 mg/ml) | 2ml |
| 吸附柱DQ及收集管 | 10套 |
| 离心管(50ml) | 10个 |
自备试剂：无水乙醇，异丙醇。
实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、所有组分可在干燥、室温(15～30℃)环境稳定保存1年，更长时间保存可置于2～8℃，加入RNase A的Buffer P1 置于2～8℃可稳定保存6个月。
2、第一次使用前，将RNase A溶液全部加入到Buffer P1 中，混匀，置于2–8℃保存，使用前需在室温中放置一段时间，恢复至室温后使用。
3、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。
4、使用前请先检查Buffer P2 、Buffer P3、Buffer PB是否出现结晶或沉淀，如有结晶或沉淀现象，可在37℃水浴几分钟，即可恢复澄清(请勿剧烈晃动Buffer P2)。
5、注意不要直接接触Buffer P2 和Buffer P3，使用后应立即盖紧盖子。
6、提取质粒的量和纯度与细菌培养浓度、菌株种类、质粒大小、质粒拷贝数等因素有关。
7、所有离心步骤均可在室温下进行。
操作步骤：
1、取150ml过夜培养的菌液加入离心管(自备)中，12000×g离心3分钟收集细菌，尽量吸弃全部上清。
注意：质粒拷贝数较低或>10 kb时，可以使用更多菌液通过二次离心将菌体沉淀收集到同一个离心管中，同时后续所加试剂Buffer P1、P2及P3的量需按比例加倍。所加试剂的量必须能够充分裂解菌体，菌体过多、裂解不充分都会降低质粒的提取效率。
2、向留有菌体沉淀的离心管中加入12ml Buffer P1(请先检查是否已加入RNase A)，使用移液器或涡旋振荡器充分混匀，悬浮细菌沉淀。
注意：如果菌块未彻底混匀，将会影响裂解效果，使提取量和纯度偏低。
3、向离心管中加入12ml Buffer P2，温和地上下颠倒混匀6-8次，充分混匀使菌体裂解，室温放置3-5分钟。此时溶液应变得清亮粘稠。
注意：温和混匀，不要剧烈震荡，以免打断基因组DNA，造成提取的质粒中混有基因组DNA片段。并且此步骤所用时间应不超过5分钟，避免质粒受到破坏。
4、向离心管中加入12ml Buffer P3，立即上下颠倒混匀6-8次，充分混匀，此时出现白色絮状沉淀，室温放置5分钟。12000×g离心10分钟。
注意：Buffer P3 加入后应立即混匀，避免产生局部沉淀。
5、取上清加入新的离心管(自备)中，向上清中加入11ml异丙醇，上下颠倒混匀。
6、将步骤5中的混合溶液转移到已装入收集管的吸附柱DQ中。12000×g离心2分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：吸附柱的最大容积为15ml，所以第5步中所得溶液分多次过柱。如果离心机转子倾角较大时，建议加入吸附柱的溶液体积不超过10ml，以防发生漏液现象。
7、向吸附柱中加入2.5ml Buffer PB，12000×g离心2分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
8、向吸附柱中加入10ml Buffer PW(请先检查是否已加入无水乙醇)，12000×g离心2分钟，倒掉收集管中的废液。
9、重复步骤8。
10、将吸附柱重新放回收集管中，12000×g离心5分钟，倒掉废液，将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干吸附柱中残余的漂洗液。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
11、将吸附柱置于一个新的收集管中，向吸附膜的中间部位加入1-3ml Buffer EB，室温放置2-5分钟，12000×g离心5分钟，将质粒溶液收集到离心管中。-20℃保存质粒。
注意：
1)为了增加质粒的回收效率，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，室温放置2-5分钟，12000×g离心5分钟，将质粒溶液收集到离心管中。
2)洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液，应保证其pH值在7.0-8.5范围内(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)，pH值低于7.0会降低洗脱效率。
3)质粒拷贝数较低或>10 kb时，Buffer EB在65-70℃水浴预热，适当延长吸附和洗脱的时间，可以增加提取效率。
储存条件：室温(15～30℃)
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高纯质粒大提试剂盒厂家关键词：WE0164,高纯质粒大提试剂盒,PlaPure Maxi Extraction Kit
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高纯质粒大提试剂盒厂家关键词：WE0164,高纯质粒大提试剂盒,PlaPure Maxi Extraction Kit
·Protein A+G琼脂糖凝胶
编号：WE0268
英文名称：Protein A+G Agarose
规格：1ml
本产品为Protein A和Protein G 共价交联到Agarose beads上的产物，并保存在20%乙醇溶液中。本产品包含1ml protein A+G agarose和1ml 20%乙醇溶液，即为50%悬浮介质。主要用于免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)或免疫共沉淀(Co-IP)。免疫沉淀抗体包括Mouse IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3、IgA，Rat IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c，Rabbit IgG，Rabbit and Goat polyclonal Abs，以及Human IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。本产品也可以用于抗体的纯化。
注意事项：
1、本产品保存在2～8℃ 20%的乙醇中，从低温取出后恢复到室温后装柱，避免产生气泡影响柱效。
2、使用前请充分颠倒若干次使混合均匀。
使用方法：
I 免疫沉淀(Immunoprecipitation，IP)：
1、蛋白样品的准备：
a. 对于细胞样品，用1×PBS洗涤一次。2×106细胞加入200μl细胞裂解液，以此类推。
b. 对于组织样品约20 mg加入200μl组织蛋白抽提试剂，以此类推。
注：如果裂解获得的蛋白样品浓度过高，可以用裂解液或PBS适当稀释；如果蛋白样品浓度过低，可适当减少裂解液的用量。
2、取约200μg至1 mg蛋白样品，与0.2μg至2μg纯化后的抗体混合，4℃缓慢摇动过夜。
3、取20-40μl充分重悬的Protein A+G Agarose加入到一支新的1.5ml离心管中，短暂离心，小心吸弃上清。
4、加入500μl 1×PBS洗涤Protein A+G Agarose，短暂离心，小心吸弃上清。重复此步骤2次。
5、将步骤2的抗原抗体复合物加入到洗涤后的Protein A+G Agarose中，4℃孵育1-3个小时，短暂离心，小心吸弃上清。
6、加入500μl 1×PBS洗涤，短暂离心，小心吸弃上清。重复此步骤2次。
7、向沉淀中加入20-40μl 2×SDS-PAGE电泳上样缓冲液，涡旋重悬沉淀，短暂离心把样品离心至
8、蛋白煮沸变性5分钟，短暂离心后取部分或全部上清，用于SDS-PAGE电泳或Western Blot等。暂时不用的样品可在-20℃保存。
II 免疫共沉淀(CO-IP)：
参考免疫沉淀的方法进行，但免疫共沉淀(CO-IP)通常必须使用未经冻存的新鲜蛋白样品。普通的免疫沉淀虽然可以使用冻存的蛋白样品，但以用新鲜的蛋白样品为佳。
储存条件：2～8℃，避免冻存。
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