北京PCR Mix(含染料)(滴瓶装)厂家

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京PCR Mix(含染料)(滴瓶装)厂家是高品质的核酸扩增(PCR)产品，由北京百奥莱博供应，用于生化科研试验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多PCR Mix(含染料)(滴瓶装)等核酸扩增(PCR)产品请联系我司咨询订购。

名称：北京PCR Mix(含染料)(滴瓶装)厂家
产地：国产|进口
编号：WE0100
规格：5ml
英文名：PCR Mix(With Dye)
品牌：百奥莱博
  本产品以滴瓶包装，集成了PCR反应所需各要素及稳定剂、增强剂，对PCR反应中各成份的浓度有较高的宽容度，无需加样工具，将本产品直接滴入加有模板、引物的PCR管即可完成反应准备。本产品热稳定性高，启封后置2～8℃保存，六个月内可随时取用。本产品使用高度封闭的热启动DNA聚合酶，可有效减少非特异PCR产物扩增，配制PCR反应体系可在室温进行，但须注意热循环程序的第一步必须包括至少10分钟的95℃热启动。本产品已加入染料(蓝色)，反应结束后可直接进行电泳检测。扩增得到的大部分PCR产物3"端附有一个“A”碱基，因此可直接用于T/A克隆。

质量控制：
1、经检验无外源核酸酶活性；
2、PCR方法检测无宿主残余DNA；
3、能有效地扩增多种基因组中的单拷贝基因；2～8℃存放六个月，活性无明显改变。

使用方法：
  本产品以滴瓶包装，使用时，取掉旋盖后将滴瓶倒置，滴塞口对准已加入适量模板和引物的PCR管口上方，以食指和拇指轻轻挤压滴瓶，滴入一滴反应液，即可完成PCR反应准备。正常挤压时，液滴平均体积约为25μl，可能会因挤压滴瓶用力不一，造成挤出液滴体积存在差异，但对多数PCR反应，均可获得良好扩增。

1、PCR反应体系：

试剂	反应体积
PCR Mix	1 滴
Forward Primer，10μM	1μl
Reverse Primer，10μM	1μl
Template DNA	≤4μl

注意：
1)引物浓度以10μM作为参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
2)PCR模板的使用量应视DNA性质加以调整。一般而言，在每滴PCR反应中，当模板为质粒DNA时，以1 pg至10ng为宜；当模板为细菌基因组DNA时，以1ng至100ng为宜；当模板为真核生物基因组DNA时，以10ng至300ng为宜。需注意，PCR模板绝非越多越好。过多的模板会对PCR反应产生抑制作用，且容易增高其它抑制物水平，影响扩增效果。

2、PCR反应条件：
 

步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	10 min
变性	94℃	30 s	30-40个循环
退火	55-65℃	30 s
延伸	72℃	60 s
终延伸	72℃	5 min

注意：
1)产品含有高度封闭热启动DNA聚合酶，须在预变性95℃，10 min条件下实现酶的活化。
2)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
3)延伸时间应根据所扩增片段大小设定，本产品的扩增效率为1 kb/min。
4)可根据扩增产物下游应用设定循环数。如循环次数太少，扩增量不足；如循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。

储存条件：-20℃，有效期2年

欲咨询购买北京PCR Mix(含染料)(滴瓶装)厂家，请致电北京百奥莱博科技有限公司，为您提供最全面周到的产品服务，除此之外，我公司正在促销以下产品：

·快速实时荧光定量PCR预混体系(高含量ROX校正染料)
编号：WE0143
英文名称：BaFaSYBR Mixture(High ROX)
规格：5ml
  本品是专用于染料法(SYBR GreenⅠ)实时荧光定量PCR的预混体系，浓度为2×,包含Fast Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、dNTPs、SYBR Green I荧光染料和Mg2+，操作简单方便。主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录后的cDNA靶序列检测。本品所含荧光染料SYBR Green I可以与所有的双链DNA相结合，使该产品可用于不同靶序列的检测而不需合成特异性标记探针。本品含有的Fast Taq DNA Polymerase能有效减少在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，酶的激活仅需在95℃孵育20s。整个PCR反应过程比普通反应可节省约40分钟，大大缩短了PCR的反应时间。独特的PCR缓冲体系与热启动酶的组合，有效抑制了非特异产物的产生，并显著提高PCR的扩增效率。该产品应用范围广，适用于普通和快速定量PCR程序，可适用于无需ROX校正的所有荧光定量PCR仪。

  ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同，因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。
不需要ROX校正的仪器(WE0141)：
Roche LightCycler 480，Roche LightCyler 96，Bio-rad iCyler iQ，iQ5，CFX96等。
需要Low ROX校正的仪器(WE0142)：
ABI Prism7500/7500 Fast，QuantStudio® 3 System，QuantStudio® 5 System，QuantStudio® 6 Flex System，QuantStudio® 7 Flex System，ViiA 7 system，Stratagene Mx3000/Mx3005P，Corbett Rotor Gene 3000等。
需要High ROX校正的仪器(WE0143)：
ABI Prism7000/7300/7700/7900，Eppendorf，ABI Step One/Step One Plus等。

产品组成：

组份	WE0141-5ml	WE0142-5ml	WE0143-5ml
2×BaFaSYBR Mixture	5×1ml	5×1ml	5×1ml
50×Low ROX	-	200μl	-
50×High ROX	-	-	200μl
ddH2O	5×1ml	5×1ml	5×1ml

注意事项：
1、使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
2、本产品中含有荧光染料SYBR Green I，保存本产品或配制PCR反应液时应避免强光照射。
3、避免反复冻融本品，反复冻融可能使产品性能下降。本产品长期保存可置于-20℃，避光。如果在短期内需要频繁使用，可在2～8℃保存。
4、本品不能用于探针法荧光定量PCR。

使用方法：
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系：
 

试剂	50μl反应体系	终浓度
2×BaFaSYBR Mixture	25μl	1×
Forward Primer，10μM	1μl	0.2μM
Reverse Primer，10μM	1μl	0.2μM
Template DNA	2μl
50×Low ROX or High ROX(可选)	1μl	1×
ddH2O	up to 50μl

注意：
1)通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果，可以在0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
2)通常DNA模板的量以10-100ng基因组DNA或1-10ng cDNA为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。
3)不同仪器的激发光学系统有所不同，根据使用荧光定量的仪器选择加入50×Low ROX or 50×High ROX.

2、PCR反应条件：
 

步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	20 s
变性	95℃	3 s	35-40个循环
退火/延伸	60℃	30 s
融解曲线分析	95℃	15 s
	60℃	1 min
	95℃	15 s
	60℃	15 s

注意：
1)本产品所采用的酶须在预变性95℃、20s条件下实现酶的活化。在此条件下，大多数模板可良好的进行解链。对GC含量高、二级结构复杂的模板，可将预变性时间延长至1分钟，以使起始模板充分解链。若高温处理时间过长，会对酶的活性造成影响。可根据模板情况确定最佳的预变性时间。
2)建议采用两步法PCR反应程序，退火温度请以60-64℃作为设定范围的参考，发生非特异性反应时，可提高退火温度。若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增，退火温度请以 56℃-64℃的范围作为设定参考。
3)融解曲线分析请以所使用的荧光定量PCR仪推荐的程序进行设定，本程序是以ABI 7500荧光定量PCR仪为参照设定。

储存条件：-20℃，避免反复冻融


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·miRNA荧光定量检测试剂盒
编号：WE0158
英文名称：miRNA qPCR Assay Kit
规格：125次
  本试剂盒采用SYBR Green I嵌合荧光染料法的原理来进行miRNA荧光定量PCR检测。试剂盒包括检测所需的2×miRNA qPCR premix和Reverse primer。

  2×miRNA qPCR premix是专门为miRNA定量检测而研发的新一代预混形式的荧光定量PCR检测试剂，所含的荧光染料SYBR Green I可以与所有的双链DNA结合，使该产品可用于不同靶序列的检测而不需合成特异性标记探针。其中的BaldStar Taq DNA polymerase是经化学修饰的高效热启动酶，配合独特的缓冲体系，使反应特异性更好，灵敏度更高，并能在更广的范围内对miRNA进行准确定量。

试剂盒组成：

组份	125次
2×miRNA qPCR Mixture(ROX)	2×750μl
Reverse Primer，10μM	60μl
ddH2O	1.5ml

备注：本试剂盒须与miRNA cDNA第一链合成试剂盒(WE0157)配套使用。

自备实验材料：qPCR上游引物(Forward primer)。

Forward Primer设计原则
1、遵循引物设计的最普遍原则。
2、以成熟的miRNA序列为基础，将U替换成T，这是最基础和最简单的设计方法。
3、试剂盒中提供的下游引物的Tm值为63.6℃，设计上游引物的Tm值要尽量保证在63.6℃左右。
4、若按照原则“2”的方式直接设计的引物其Tm值过低，可以在引物的5’端添加几个碱基(最好为G或C碱基)；也可以在3’端添加1个或几个A碱基；或者5’端和3’端同时修饰。
5、若按照原则“2”的方式直接设计的引物其Tm值过高，可以在引物的5’或3’端去掉几个碱基。

注意事项：
1、试剂使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
2、miRNA 第一链cDNA 的加入量不要超过Real time PCR 体积10%。
3、对于特殊的检测体系，高含量的cDNA模板易导致非特异性扩增，根据所检测miRNA的丰度适当的稀释cDNA(稀释10倍或者100倍)。
4、本产品中的2×miRNA qPCR Mixture中含有SYBR Green I和ROX染料，保存本产品或配制PCR反应液时应避免强光照射。
5、避免反复冻融本品，反复冻融可能使产品性能下降，本产品长期保存可置于-20℃。如果在短期内需要频繁使用，2×miRNA qPCR Mixture可于2～8℃保存。而Reverse primer仍需置于-20℃保存。

使用方法：
1、室温融化2×miRNA qPCR Mixture和Reverse primer(10μM)。
2、使用时请将2×miRNA qPCR Mixture上下颠倒轻轻均匀混合，避免起泡，并经短暂离心后使用。如果试剂没有混匀，其反应性能会有所下降。
3、将试剂置于冰上，并按下表配制反应体系：
 

试剂	体积	终浓度
2×miRNA qPCR Mixture(ROX)	10μl	1×
Forward primer(10μM)	0.4μl	0.2μM
Reverse primer(10μM)	0.4μl	0.2μM
miRNA第一链cDNA	Xμl	—
ddH2O	up to 20μl	—

4、反应程序设置如下：
注意！本产品预变性反应必须在95℃ 10分钟下完成！
 

步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	10 min
变性	95℃	15 s	40-45个循环
退火/延伸	60℃	1 min
溶解曲线分析	根据PCR仪要求设定

注意：
1)本产品所采用的热启动酶须在预变性95℃、10 min条件下实现酶的活化。
2)退火温度请以60-64℃作为设定范围的参考，发生非特异性反应时，可提高退火温度。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。


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