动物组织/细胞RNA提取试剂盒(含DNase I)大量库存促

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专业生产销*(代"售")动物组织/细胞RNA提取试剂盒(含DNase I)大量库存促销，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：动物组织/细胞RNA提取试剂盒(含DNase I)大量库存促销
规格：50次
英文名：RNAtiqu Tissue&Cell RNA Extraction Kit(DNase I)
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
编号：WE0198
  本试剂盒将高效的异硫*酸胍裂解技术与硅基质膜纯化技术相结合，可从动物细胞及组织中高效提取总RNA。起始样本一般最多30 mg组织或1x107细胞。本试剂盒还可回收未完全纯化的RNA、体外转录和酶促反应后得到的RNA。用本试剂盒可提取纯化分子量大于200碱基的高品质RNA，几乎无DNA残留。如果要进行对微量DNA非常敏感的RNA实验，残留的DNA可利用无RNase的DNase在柱上进行消化去除。提取的RNA可用于RT-PCR、 Nothern Blot、Dot Blot等下游实验。

试剂盒组成：

 

组份	50次
DNase I	1000 U
10×Reaction Buffer	1000μl
Buffer RL	35ml
Buffer RW1	30ml
Buffer RW2(浓缩液)	11ml
RNase-Free Water	10ml
吸附柱RM及收集管	50套
RNase-Free离心管(1.5ml)	50个

保存条件：DNase I及10×Reaction Buffer -20℃保存，其它组分室温(15～30℃)。

自备试剂：β-巯基乙醇、无水乙醇(新开封或提取RNA专用)。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、预防RNase污染，应注意以下几方面：
1)使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。
2)配制溶液应使用无RNase的水。
3)操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。
2、提取的样品避免反复冻融，否则影响RNA提取的量和质量。
3、Buffer RL在使用前请加入β-巯基乙醇，1ml Buffer RL加10μl β-巯基乙醇。加入β-巯基乙醇的Buffer RL室温可保存1个月。
4、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer RW2中加入无水乙醇。
5、Buffer RL如果产生沉淀，可于56℃加热使其溶解后室温放置。
6、所有离心步骤均在室温下进行，且所有操作步骤动作要迅速。

操作步骤：
1、样品处理
① 组织：将组织在液氮中磨碎。每20-30 mg组织加600μl Buffer RL(使用前检查是否加入β-巯基乙醇)，组织样本少于20 mg加350μl Buffer RL。样品体积不超过Buffer RL体积的十分之一。
② 单层培养细胞：将细胞在培养瓶中直接裂解或处理成细胞悬液，离心得到细胞沉淀，弃上清，每6-10cm2培养面积加入600μl Buffer RL，小于6cm2加入350μl Buffer RL，反复吹打几次，使其充分裂解。
③ 细胞悬液：12000rpm(～～13400×g)离心1分钟弃上清，得到细胞沉淀。每5×106-1×107细胞加入600μl Buffer RL，少于5×106细胞加入350μl Buffer RL，反复吹打几次，使其充分裂解。
注意：
① 尽量除尽细胞培养基，细胞培养基可能抑制细胞的裂解影响RNA产量。
② 尽量使细胞充分悬浮并充分裂解，否则影响RNA产量。
2、样品充分裂解后，室温放置5分钟，使蛋白核酸复合物完全分离。
3、12000rpm离心2-5min，取上清进行以下操作。
4、向步骤3中得到的溶液中加入1倍体积(600μl 或350μl)的70%乙醇(无RNase水配制)，混匀。
注意：加入乙醇后可能会产生沉淀，不会影响后续实验。
5、将上步所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱中，若一次不能将全部溶液加入吸附柱中，请分两次转入，12000rpm离心1分钟，弃废液。将吸附柱放回收集管中。
注意：吸附柱的最大载量为100μg，不要超载，否则会影响RNA的产量和纯度。
6、向吸附柱中加入350μl Buffer RW1，12000rpm离心1分钟，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。
7、配制DNase I 混合液：取52μl RNase-Free Water，向其中加入8μl 10×Reaction Buffer和20μl DNase I(1 U/μl)，混匀， 配制成终体积为80μl的反应液。
8、向吸附柱中直接加入80μl DNase I 混合液，20-30℃孵育15分钟。
9、向吸附柱中加入200μl Buffer RW1，12000rpm离心1分钟，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。
10、向吸附柱中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否加入无水乙醇), 12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
11、重复步骤10。
12、12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干吸附柱中的无水乙醇。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
13、将吸附柱转入新的离心管中，向吸附膜中间位置加入30-50μl RNase-Free Water，室温放置1分钟，12000rpm离心1分钟，收集RNA溶液，-70℃保存RNA，防止降解。
注意：
① RNase-Free Wate体积不应小于30μl，体积过小影响回收率。
② 如果要提高RNA的产量，可用30-50μl新的RNase-Free Water重复步骤13。
③ 如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，重复步骤13。

储存条件：室温(15～30℃)。

欲了解更多动物组织/细胞RNA提取试剂盒(含DNase I)大量库存促销的品牌、产地、价格及说明书等产品信息，请致电北京百奥莱博科技有限公司，我们将竭诚为您服务，另外，以下产品正在火爆促销:
ARB11143 人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体1(TRAIL-R1)Elisa分析 Human tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand 1,traIL-r1 ELISA KIT
PC4601 THERMOscript SYBR Green qRT-PCR Kit(两步法荧光定量耐热反转录PCR试剂盒)
003002 狗血浆 100ml|500ml
锌检测试剂盒(吡*(代"啶")偶氮酚微板法)   120T
BOC-L-缬*酸 Aprotinin 13734-41-3
多聚右旋赖*酸 DFIH 27964-99-4
ARB12318 大鼠低密度脂蛋白(LDL)含量分析 Rat low density lipoprotein,ldl ELISA KIT
ARB12298 大鼠抗血小板抗体IgG/M/A(PA-IgG/M/A)含量检测 Rat platelet antibodies igg/m/a,pa-igg/m/a ELISA KIT
ARB12060 大鼠叉头蛋白P3(FOXP3)酶联免疫定量检测 Rat forkhead box p3,foxp3 ELISA KIT
BTN120708 凝血酶 Thrombin
ARB12389 大鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体3(TRAIL-R3)elisa检测说明书 Rat tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand 3,trail r3 ELISA KIT
60-18-4 L-Tyrosine  L-酪*酸
动物组织/细胞RNA提取试剂盒(含DNase I)大量库存促销关键词：含DNase I,WE0198,RNAtiqu Tissue&Cell RNA Extraction Kit(DNase I),动物组织/细胞RNA提取试剂盒(含DNase I)

CYB163058 羊抗鸡IgG-RBITC
ARB13572 兔子白介素1β(IL-1β)酶免分析 Rabbit interleukin 1β,IL-1β ELISA KIT
PY02-330  FraserⅠ增菌液基础  250克  
苄基三甲基*化铵 Haptoglobin from pooled human plasma 5350-41-4
末端转移酶 Spermidine trihydrochloride 9027-67-2
蔗糖酯 γ-L-Glutamyl-β-naphthylamide
HC0108 三道定时器
BL0546 PHA-P 植物血球凝集素P
SuperReal PreMix Plus (SYBR Green) 
肝素琼脂糖凝胶6FF Xanthine
ARB10411 人可溶性蛋白185(sp185/HER-2)尿液中含量检测 Human soluble protein 185,sp185/her-2 ELISA KIT
002001 无菌脱纤维马血
*甲*(代"酚")绿指示剂   100ml
PY04-048  头孢磺啶  0.5 mg/支×10支  每支添加于100ml MUGal(4-甲基伞形酮-β-半乳糖苷)肉汤基础培养基中 ，用于食品、饮料和饮用水的大肠菌群快速检验和计数
ARB11799 人雌二醇(E2)Elisa分析 Human estradiol,e2 ELISA KIT
*甲*(代"酸")* Gum arabic 532-32-1
盐*(代"酸")付玫瑰**(代"胺") Indoxyl-Glucuronide 569-61-9
尿*丙*(代"酮")酸定性检测试剂盒   100T
ARB11517 人胸腺基质淋巴生成素(TSLP)检测服务 Human tslp   ELISA KIT
ARB13826 猪Ⅲ型前胶原肽(PⅢNP)免费代测 Porcine n-terminal procollagen Ⅲ proPeptide,pⅢnp ELISA KIT
动物组织/细胞RNA提取试剂盒(含DNase I)大量库存促销关键词：含DNase I,WE0198,RNAtiqu Tissue&Cell RNA Extraction Kit(DNase I),动物组织/细胞RNA提取试剂盒(含DNase I)


·T4 DNA连接酶
编号：WE0239
英文名称：T4 DNA Ligase
规格：100U|500U
  T4 DNA Ligase 是从表达T4 DNA Ligase 基因的大肠杆菌经诱导表达后分离纯化而来的，催化相邻DNA链的5’磷酸基团和3’羟基基团以磷酸二酯键结合反应。该酶可催化平末端或粘性末端DNA之间的连接，还可修复双链DNA、RNA、DNA/RNA杂交双链中的单链切口。本品可应用于DNA插入片段和载体DNA的粘性末端和平末端的连接，以及线性DNA的自身环化。

产品组成：

组份	100U	500U
T4 DNA Ligase，5 U/μl	20μl	100μl
10×Ligation Buffer	150μl	750μl
50%PEG Solution	150μl	750μl

实验前准备及重要注意事项
1、T4 DNA Ligase的最终用量不要超过推荐的用量，否则影响连接效率。
2、PEG可以极大提高平末端的连接效率，我们推荐加入终浓度为5% PEG Solution以提高平末端的连接效率。
3、为了提高转化效率，建议所加入连接产物的量不要超过感受态细胞体积的10%。
4、由于T4 DNA Ligase中含有甘油，比较粘稠容易挂壁，建议使用之前短暂离心将液体收集到管底，取样时枪头尽量不要深入液面太深以免粘在枪头上造成损失。

使用方法：

一、粘性末端的连接：

1、按以下体系配制反应液：

组份	20μl体系	终浓度
线性载体DNA	Xμl	20-100ng
插入DNA片段	Yμl	插入片段：载体1:1-5:1
10×Ligation Buffer	2μl
T4 DNA Ligase，5 U/μl	0.2μl	1 U
ddH2O	补充至20μl

2、涡旋震荡，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
3、反应条件：22℃孵育10分钟。
4、瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底，65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase。
5、可取5μl连接产物热击转化50μl感受态细胞或取1-2μl连接产物电击转化50μl感受态细胞。
注意：如需电击转化，推荐用乙醇沉淀法去除T4 DNA Ligase后进行电击转化。

二、平末端的连接：

1．反应体系：

组分	20μl体系	终浓度
线性载体DNA	Xμl	20-100ng
插入DNA片段	Yμl	插入片段：载体1:1-5:1
10×Ligation Buffer	2μl
T4 DNA Ligase，5 U/μl	1μl	5 U
50%PEG Solution	2μl	5%
ddH2O	补充至20μl	20μl

2、涡旋震荡，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
3、反应条件：22℃孵育1小时。
4、瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底，65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase。
5、可取5μl连接产物热击转化50μl感受态细胞或取1-2μl连接产物电击转化50μl感受态细胞。
注意：如需电击转化，推荐用乙醇沉淀法去除T4 DNA Ligase后进行电击转化。

三、线性DNA的自身环化：

1、反应体系：

组分	50μl体系	终浓度
线性载体DNA	Xμl	5-50ng
10×Ligation Buffer	5μl
T4 DNA Ligase，5 U/μl	1μl	5 U
ddH2O	补充至50μl	50μl

2、涡旋震荡，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
3、反应条件：粘性末端22℃孵育10分钟；平末端22℃孵育1小时。
4、瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底，65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase。
5、可取5μl连接产物热击转化50μl感受态细胞或取1-2μl连接产物电击转化50μl感受态细胞。
注意：如需电击转化，推荐用乙醇沉淀法去除T4 DNA Ligase后进行电击转化。

储存条件：-20℃。

北京百莱博科技有限公司专业生产供应销*(代"售")生物试剂、化学试剂、抗原抗体、血清血浆、Elisa试剂盒，更多试剂产品需求，欢迎来电咨询选购动物组织/细胞RNA提取试剂盒(含DNase I)大量库存促销。