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- 中国/上海
- LM60908-2825
- 2025年12月09日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
6个月
- 英文名：
pET-21d(+)(pET21d)(60908-2825)
- 库存：
大量
- 供应商：
联迈生物
- 规格：
1ug
pET-21d(+)(pET21d)(60908-2825)
质粒名称: pET-21d(+)
其他名称:
质粒大小（bp）: 5440
抗性: Ampicillin (氨苄青霉素)
质粒类型: 大肠杆菌表达载体
是否病毒: Nonviral
启动子:
稳转或瞬转: Transient
组成型或诱导性: Constitutive
表达水平: High
蛋白标签: N-T7, C-His
5’测序引物:T7
5’测序引物序列:5′-TAATACGACTCACTATAGGG-3′
GenBank号:
其他属性: Same as pET24abcd(+) but ampR; a,b,c,d vary by MCS; The f1 origin is oriented so that infection with helper phage will produce virions containing single-stranded DNA that corresponds to the coding strand.
质粒图谱:
| Feature Name | Start | End | |
|---|---|---|---|
| T7_terminator | 129 | 1 | |
| T7_Terminal_primer | 69 | 87 | |
| T7_leader | 237 | 205 | |
| T7_transl_en_RBS | 261 | 245 | |
| lacO | 306 | 279 | |
| T7_promoter | 324 | 306 | |
| tet (300 – 563) | 356 | 619 | |
| pBRrevBam_primer | 427 | 408 | |
| lacI | 702 | 1793 | |
| tet (576 – 851) | 1852 | 2127 | |
| ROP | 2602 | 2793 | |
| pGEX_3_primer | 2809 | 2787 | |
| pBR322_origin | 3827 | 3208 | |
| Ampicillin | 4842 | 3982 | |
| AmpR_promoter | 4912 | 4884 |
| ORF | Start | End | |
|---|---|---|---|
| ORF frame 2 | 461 | 961 | |
| ORF frame 3 | 834 | 1793 | |
| ORF frame 2 | 4842 | 3982 |
| Enzyme Name | Cut |
|---|---|
| XhoI | 158 |
| NotI | 166 |
| EagI | 166 |
| HindIII | 173 |
| SalI | 179 |
| SacI | 190 |
| EcoRI | 192 |
| BamHI | 198 |
| NheI | 229 |
| NcoI | 234 |
| XbaI | 273 |
| BglII | 339 |
| BclI | 1075 |
| ApaI | 1272 |
| EcoRV | 1511 |
| HpaI | 1567 |
| PstI | 4300 |
质粒序列:
| 1 | atccggatat | agttcctcct | ttcagcaaaa | aacccctcaa | gacccgttta | 50 |
| 51 | gaggccccaa | ggggttatgc | tagttattgc | tcagcggtgg | cagcagccaa | 100 |
| 101 | ctcagcttcc | tttcgggctt | tgttagcagc | cggatctcag | tggtggtggt | 150 |
| 151 | ggtggtgctc | gagtgcggcc | gcaagcttgt | cgacggagct | cgaattcgga | 200 |
| 201 | tccgacccat | ttgctgtcca | ccagtcatgc | tagccatggt | atatctcctt | 250 |
| 251 | cttaaagtta | aacaaaatta | tttctagagg | ggaattgtta | tccgctcaca | 300 |
| 301 | attcccctat | agtgagtcgt | attaatttcg | cgggatcgag | atctcgatcc | 350 |
| 351 | tctacgccgg | acgcatcgtg | gccggcatca | ccggcgccac | aggtgcggtt | 400 |
| 401 | gctggcgcct | atatcgccga | catcaccgat | ggggaagatc | gggctcgcca | 450 |
| 451 | cttcgggctc | atgagcgctt | gtttcggcgt | gggtatggtg | gcaggccccg | 500 |
| 501 | tggccggggg | actgttgggc | gccatctcct | tgcatgcacc | attccttgcg | 550 |
| 551 | gcggcggtgc | tcaacggcct | caacctacta | ctgggctgct | tcctaatgca | 600 |
| 601 | ggagtcgcat | aagggagagc | gtcgagatcc | cggacaccat | cgaatggcgc | 650 |
| 651 | aaaacctttc | gcggtatggc | atgatagcgc | ccggaagaga | gtcaattcag | 700 |
| 701 | ggtggtgaat | gtgaaaccag | taacgttata | cgatgtcgca | gagtatgccg | 750 |
| 751 | gtgtctctta | tcagaccgtt | tcccgcgtgg | tgaaccaggc | cagccacgtt | 800 |
| 801 | tctgcgaaaa | cgcgggaaaa | agtggaagcg | gcgatggcgg | agctgaatta | 850 |
| 851 | cattcccaac | cgcgtggcac | aacaactggc | gggcaaacag | tcgttgctga | 900 |
| 901 | ttggcgttgc | cacctccagt | ctggccctgc | acgcgccgtc | gcaaattgtc | 950 |
| 951 | gcggcgatta | aatctcgcgc | cgatcaactg | ggtgccagcg | tggtggtgtc | 1000 |
| 1001 | gatggtagaa | cgaagcggcg | tcgaagcctg | taaagcggcg | gtgcacaatc | 1050 |
| 1051 | ttctcgcgca | acgcgtcagt | gggctgatca | ttaactatcc | gctggatgac | 1100 |
| 1101 | caggatgcca | ttgctgtgga | agctgcctgc | actaatgttc | cggcgttatt | 1150 |
| 1151 | tcttgatgtc | tctgaccaga | cacccatcaa | cagtattatt | ttctcccatg | 1200 |
| 1201 | aagacggtac | gcgactgggc | gtggagcatc | tggtcgcatt | gggtcaccag | 1250 |
| 1251 | caaatcgcgc | tgttagcggg | cccattaagt | tctgtctcgg | cgcgtctgcg | 1300 |
| 1301 | tctggctggc | tggcataaat | atctcactcg | caatcaaatt | cagccgatag | 1350 |
| 1351 | cggaacggga | aggcgactgg | agtgccatgt | ccggttttca | acaaaccatg | 1400 |
| 1401 | caaatgctga | atgagggcat | cgttcccact | gcgatgctgg | ttgccaacga | 1450 |
| 1451 | tcagatggcg | ctgggcgcaa | tgcgcgccat | taccgagtcc | gggctgcgcg | 1500 |
| 1501 | ttggtgcgga | tatctcggta | gtgggatacg | acgataccga | agacagctca | 1550 |
| 1551 | tgttatatcc | cgccgttaac | caccatcaaa | caggattttc | gcctgctggg | 1600 |
| 1601 | gcaaaccagc | gtggaccgct | tgctgcaact | ctctcagggc | caggcggtga | 1650 |
| 1651 | agggcaatca | gctgttgccc | gtctcactgg | tgaaaagaaa | aaccaccctg | 1700 |
| 1701 | gcgcccaata | cgcaaaccgc | ctctccccgc | gcgttggccg | attcattaat | 1750 |
| 1751 | gcagctggca | cgacaggttt | cccgactgga | aagcgggcag | tgagcgcaac | 1800 |
| 1801 | gcaattaatg | taagttagct | cactcattag | gcaccgggat | ctcgaccgat | 1850 |
| 1851 | gcccttgaga | gccttcaacc | cagtcagctc | cttccggtgg | gcgcggggca | 1900 |
| 1901 | tgactatcgt | cgccgcactt | atgactgtct | tctttatcat | gcaactcgta | 1950 |
| 1951 | ggacaggtgc | cggcagcgct | ctgggtcatt | ttcggcgagg | accgctttcg | 2000 |
| 2001 | ctggagcgcg | acgatgatcg | gcctgtcgct | tgcggtattc | ggaatcttgc | 2050 |
| 2051 | acgccctcgc | tcaagccttc | gtcactggtc | ccgccaccaa | acgtttcggc | 2100 |
| 2101 | gagaagcagg | ccattatcgc | cggcatggcg | gccccacggg | tgcgcatgat | 2150 |
| 2151 | cgtgctcctg | tcgttgagga | cccggctagg | ctggcggggt | tgccttactg | 2200 |
| 2201 | gttagcagaa | tgaatcaccg | atacgcgagc | gaacgtgaag | cgactgctgc | 2250 |
| 2251 | tgcaaaacgt | ctgcgacctg | agcaacaaca | tgaatggtct | tcggtttccg | 2300 |
| 2301 | tgtttcgtaa | agtctggaaa | cgcggaagtc | agcgccctgc | accattatgt | 2350 |
| 2351 | tccggatctg | catcgcagga | tgctgctggc | taccctgtgg | aacacctaca | 2400 |
| 2401 | tctgtattaa | cgaagcgctg | gcattgaccc | tgagtgattt | ttctctggtc | 2450 |
| 2451 | ccgccgcatc | cataccgcca | gttgtttacc | ctcacaacgt | tccagtaacc | 2500 |
| 2501 | gggcatgttc | atcatcagta | acccgtatcg | tgagcatcct | ctctcgtttc | 2550 |
| 2551 | atcggtatca | ttacccccat | gaacagaaat | cccccttaca | cggaggcatc | 2600 |
| 2601 | agtgaccaaa | caggaaaaaa | ccgcccttaa | catggcccgc | tttatcagaa | 2650 |
| 2651 | gccagacatt | aacgcttctg | gagaaactca | acgagctgga | cgcggatgaa | 2700 |
| 2701 | caggcagaca | tctgtgaatc | gcttcacgac | cacgctgatg | agctttaccg | 2750 |
| 2751 | cagctgcctc | gcgcgtttcg | gtgatgacgg | tgaaaacctc | tgacacatgc | 2800 |
| 2801 | agctcccgga | gacggtcaca | gcttgtctgt | aagcggatgc | cgggagcaga | 2850 |
| 2851 | caagcccgtc | agggcgcgtc | agcgggtgtt | ggcgggtgtc | ggggcgcagc | 2900 |
| 2901 | catgacccag | tcacgtagcg | atagcggagt | gtatactggc | ttaactatgc | 2950 |
| 2951 | ggcatcagag | cagattgtac | tgagagtgca | ccatatatgc | ggtgtgaaat | 3000 |
| 3001 | accgcacaga | tgcgtaagga | gaaaataccg | catcaggcgc | tcttccgctt | 3050 |
| 3051 | cctcgctcac | tgactcgctg | cgctcggtcg | ttcggctgcg | gcgagcggta | 3100 |
| 3101 | tcagctcact | caaaggcggt | aatacggtta | tccacagaat | caggggataa | 3150 |
| 3151 | cgcaggaaag | aacatgtgag | caaaaggcca | gcaaaaggcc | aggaaccgta | 3200 |
| 3201 | aaaaggccgc | gttgctggcg | tttttccata | ggctccgccc | ccctgacgag | 3250 |
| 3251 | catcacaaaa | atcgacgctc | aagtcagagg | tggcgaaacc | cgacaggact | 3300 |
| 3301 | ataaagatac | caggcgtttc | cccctggaag | ctccctcgtg | cgctctcctg | 3350 |
| 3351 | ttccgaccct | gccgcttacc | ggatacctgt | ccgcctttct | cccttcggga | 3400 |
| 3401 | agcgtggcgc | tttctcatag | ctcacgctgt | aggtatctca | gttcggtgta | 3450 |
| 3451 | ggtcgttcgc | tccaagctgg | gctgtgtgca | cgaacccccc | gttcagcccg | 3500 |
| 3501 | accgctgcgc | cttatccggt | aactatcgtc | ttgagtccaa | cccggtaaga | 3550 |
| 3551 | cacgacttat | cgccactggc | agcagccact | ggtaacagga | ttagcagagc | 3600 |
| 3601 | gaggtatgta | ggcggtgcta | cagagttctt | gaagtggtgg | cctaactacg | 3650 |
| 3651 | gctacactag | aaggacagta | tttggtatct | gcgctctgct | gaagccagtt | 3700 |
| 3701 | accttcggaa | aaagagttgg | tagctcttga | tccggcaaac | aaaccaccgc | 3750 |
| 3751 | tggtagcggt | ggtttttttg | tttgcaagca | gcagattacg | cgcagaaaaa | 3800 |
| 3801 | aaggatctca | agaagatcct | ttgatctttt | ctacggggtc | tgacgctcag | 3850 |
| 3851 | tggaacgaaa | actcacgtta | agggattttg | gtcatgagat | tatcaaaaag | 3900 |
| 3901 | gatcttcacc | tagatccttt | taaattaaaa | atgaagtttt | aaatcaatct | 3950 |
| 3951 | aaagtatata | tgagtaaact | tggtctgaca | gttaccaatg | cttaatcagt | 4000 |
| 4001 | gaggcaccta | tctcagcgat | ctgtctattt | cgttcatcca | tagttgcctg | 4050 |
| 4051 | actccccgtc | gtgtagataa | ctacgatacg | ggagggctta | ccatctggcc | 4100 |
| 4101 | ccagtgctgc | aatgataccg | cgagacccac | gctcaccggc | tccagattta | 4150 |
| 4151 | tcagcaataa | accagccagc | cggaagggcc | gagcgcagaa | gtggtcctgc | 4200 |
| 4201 | aactttatcc | gcctccatcc | agtctattaa | ttgttgccgg | gaagctagag | 4250 |
| 4251 | taagtagttc | gccagttaat | agtttgcgca | acgttgttgc | cattgctgca | 4300 |
| 4301 | ggcatcgtgg | tgtcacgctc | gtcgtttggt | atggcttcat | tcagctccgg | 4350 |
| 4351 | ttcccaacga | tcaaggcgag | ttacatgatc | ccccatgttg | tgcaaaaaag | 4400 |
| 4401 | cggttagctc | cttcggtcct | ccgatcgttg | tcagaagtaa | gttggccgca | 4450 |
| 4451 | gtgttatcac | tcatggttat | ggcagcactg | cataattctc | ttactgtcat | 4500 |
| 4501 | gccatccgta | agatgctttt | ctgtgactgg | tgagtactca | accaagtcat | 4550 |
| 4551 | tctgagaata | gtgtatgcgg | cgaccgagtt | gctcttgccc | ggcgtcaata | 4600 |
| 4601 | cgggataata | ccgcgccaca | tagcagaact | ttaaaagtgc | tcatcattgg | 4650 |
| 4651 | aaaacgttct | tcggggcgaa | aactctcaag | gatcttaccg | ctgttgagat | 4700 |
| 4701 | ccagttcgat | gtaacccact | cgtgcaccca | actgatcttc | agcatctttt | 4750 |
| 4751 | actttcacca | gcgtttctgg | gtgagcaaaa | acaggaaggc | aaaatgccgc | 4800 |
| 4801 | aaaaaaggga | ataagggcga | cacggaaatg | ttgaatactc | atactcttcc | 4850 |
| 4851 | tttttcaata | ttattgaagc | atttatcagg | gttattgtct | catgagcgga | 4900 |
| 4901 | tacatatttg | aatgtattta | gaaaaataaa | caaatagggg | ttccgcgcac | 4950 |
| 4951 | atttccccga | aaagtgccac | ctgaaattgt | aaacgttaat | attttgttaa | 5000 |
| 5001 | aattcgcgtt | aaatttttgt | taaatcagct | cattttttaa | ccaataggcc | 5050 |
| 5051 | gaaatcggca | aaatccctta | taaatcaaaa | gaatagaccg | agatagggtt | 5100 |
| 5101 | gagtgttgtt | ccagtttgga | acaagagtcc | actattaaag | aacgtggact | 5150 |
| 5151 | ccaacgtcaa | agggcgaaaa | accgtctatc | agggcgatgg | cccactacgt | 5200 |
| 5201 | gaaccatcac | cctaatcaag | ttttttgggg | tcgaggtgcc | gtaaagcact | 5250 |
| 5251 | aaatcggaac | cctaaaggga | gcccccgatt | tagagcttga | cggggaaagc | 5300 |
| 5301 | cggcgaacgt | ggcgagaaag | gaagggaaga | aagcgaaagg | agcgggcgct | 5350 |
| 5351 | agggcgctgg | caagtgtagc | ggtcacgctg | cgcgtaacca | ccacacccgc | 5400 |
| 5401 | cgcgcttaat | gcgccgctac | agggcgcgtc | ccattcgcca | 5440 |
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文献和实验相关实验
真DNA聚合酶可能会导致此问题。大肠杆菌 BL21（DE3）中的蛋白质表达重组pET-32α（+）载体可以表达所需的蛋白质，其在被异丙基β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导后与大肠杆菌 BL21（DE3）中的109aa Trx•Tag TM融合。首先，将含有100μg/ ml氨苄青霉素的10ml LB培养基与含有重组pET-32α（+）载体的新鲜细菌菌落一起接种37℃过夜; 然后，将500-μl过夜培养物加入到含有100-μg/ ml氨苄青霉素的30-ml新鲜LB培养基中，在37℃接种直至OD 600
中，现在Invitrogen已经克服了这个问题。在载体上多加四个碱基GTGG，就是这四个碱基使它可以与PCR产物定向连接。其作用机理见下图。 结合TOPO技术的有五个系列载体：pET100/D-TOPO®、pET101/D-TOPO®、pET102/D-TOPO®、pET151/D-TOPO®和pET200/D-TOPO®，这五个载体根据所带的标记、是否具有蛋白酶切位点而各有不同。详细信息参见下图。 结合TOPO技术的有五个系列载体：pET100/D
（ DE3 ）表达的活性蛋白比其它宿主菌高 10 倍以上。 Origami 宿主菌与氨苄抗性质粒相容，可用于 pET-32 载体，硫氧还蛋白标签能够进一步增强在胞浆内形成二硫键。 TrxB 和 gor 突变可分别用卡那霉素和四环素选择，因此该菌株建议用于带氨苄抗性标记 bla 的 pET 质粒。 Origami B 宿主菌来源于 BL21 lacZY 突变株，还带有与原始 Origami 菌株相同的 TrxB / gor 突变。 Origami B 菌株集 BL21 、 Tuner
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