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pcDNA-dcas9-VP64
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CCACCTGACGTC
质粒名称:pcDNA-dcas9-VP64
其他名称:
质粒大小（bp）:9812
抗性:Ampicillin
质粒类型:哺乳细胞质粒；哺乳编辑质粒；哺乳Cas9质粒
是否病毒:
启动子:CMV
稳转或瞬转:
组成型或诱导性:
表达水平:
蛋白标签:N-3×Flag,N-NLS,C-VP64,C-HA
| 5’测序引物: | CMV-F(CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG) |
|---|---|
| 3’测序引物: | BGH-R（TAGAAGGCACAGTCGAGG） |
GenBank号:
其他属性:
pCDNA-dCas9-VP64质粒是CRISPR/Cas9系列质粒，复制子是f1 ori、ori和SV40 ori，质粒大小是9812bp，带有Ampicillin氨苄青霉素抗性，可转化进Stbl3中培养，培养条件是LB培养基，37℃。
质粒图谱:
质粒序列:
GACGGATCGGGAGATCTCCCGATCCCCTATGGTGCACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTT
AAGCCAGTATCTGCTCCCTGCTTGTGTGTTGGAGGTCGCTGAGTAGTGCGCGAGCAAAATTTAAGCTACAACAAGGCAAGGCTTGACCGACAATTGCATGAAGAATCTGCTTAGGGTTAGGCGTTTTGCGCTGCTTCGCG
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文献和实验相关实验
性激活/抑制：通过人为突变Cas9的RuvC1、HNH两个剪切位点，Cas9蛋白的切割能力损失变成dCas9蛋白，dCas9和sgRNA复合物可以在DNA的特定位置结合在DNA上，在此基础上，研究人员在复合物的后方连接一些转录调控元件，如转录激活的VP64、VP16等，转录抑制的KRAB等，同时将复合物锚定在基因转录起始区域的上游，即可实现对特定基因的转录激活或转录抑制。dCas9技术原理3.外源过表达和内源激活的区别和选择4.基因干扰和基因敲除的的区别和选择
基因”)。 『Cas9 细胞系的构建』 dCas9-VP64 融合蛋白，需要细胞系预表达。该文献案例中，作者将 CRUK0748-XCL 细胞系改造为 CRUK0748-XCL-GLD 细胞，使其表达催化失活的 dCas9 与 VP64 融合的蛋白 (用于激活基因转录) 、GFP 和荧光素酶 (用于体内追踪)。 简单来说：使用了一种“没有剪切活性”的突变 Cas9 蛋白 (称为 dCas9) 。在 dCas9 上连了一些“转录激活因子” (如 VP64、p65、HSF1) 。当它被向导 RNA (sgRNA
targeting 3ZF library. The 3ZF library was then used as a template to assemble the 18 bp�targeting 6ZF library (8.4 107 members). TFZF s were linked to a potent transcriptional activation domain (VP64)10 . We expected that the 3ZF library would recognize
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