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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃
- 保质期:
6个月
- 英文名:
pcDNA-dcas9-VP64
- 库存:
大量
- 供应商:
联迈生物
- 规格:
1ug
质粒名称:pcDNA-dcas9-VP64
其他名称:
质粒大小(bp):9812
抗性:Ampicillin
质粒类型:哺乳细胞质粒;哺乳编辑质粒;哺乳Cas9质粒
是否病毒:
启动子:CMV
稳转或瞬转:
组成型或诱导性:
表达水平:
蛋白标签:N-3×Flag,N-NLS,C-VP64,C-HA
| 5’测序引物: | CMV-F(CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG) |
|---|---|
| 3’测序引物: | BGH-R(TAGAAGGCACAGTCGAGG) |
GenBank号:
其他属性:
pCDNA-dCas9-VP64质粒是CRISPR/Cas9系列质粒,复制子是f1 ori、ori和SV40 ori,质粒大小是9812bp,带有Ampicillin氨苄青霉素抗性,可转化进Stbl3中培养,培养条件是LB培养基,37℃。
质粒图谱:
质粒序列:
GACGGATCGGGAGATCTCCCGATCCCCTATGGTGCACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTT
AAGCCAGTATCTGCTCCCTGCTTGTGTGTTGGAGGTCGCTGAGTAGTGCGCGAGCAAAATTTAAGCTACAACAAGGCAAGGCTTGACCGACAATTGCATGAAGAATCTGCTTAGGGTTAGGCGTTTTGCGCTGCTTCGCG
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文献和实验敲除筛选能告诉你"去掉哪个基因会让细胞死亡",但有一大类问题它回答不了:哪些基因的高表达能让人产生耐药?哪些转录因子能诱导细胞分化?哪些基因能 rescue 某个缺陷表型?这些都要靠激活文库。 先说结论:SAM(Synergistic Activation Mediator)激活文库是基于 dCas9 的功能获得性(gain-of-function)筛选工具,通过 gRNA 引导 dCas9-VP64 与 MS2-P65-HSF1 协同激活内源基因转录,找出"表达升高后导致表型改变"的基因
会怎样"用 CRISPRa。 --- 一、机制差异决定了两者能回答的问题不同 过表达质粒(cDNA / ORF) 外源启动子(CMV、EF1α 等)驱动,表达量与内源调控完全脱钩; 通常只包含单一 CDS,不含内含子和 UTR; 表达量可达到内源的几十到几百倍; 可携带标签(FLAG、HA、GFP)方便检测。 CRISPRa(dCas9-VP64 / VPR / SAM / SunTag) 失活 Cas9(dCas9)融合转录激活域,被 gRNA 引导至靶基因启动子区; 激活的是内源位点,转录本包含完整的内含
性激活/抑制:通过人为突变Cas9的RuvC1、HNH两个剪切位点,Cas9蛋白的切割能力损失变成dCas9蛋白,dCas9和sgRNA复合物可以在DNA的特定位置结合在DNA上,在此基础上,研究人员在复合物的后方连接一些转录调控元件,如转录激活的VP64、VP16等,转录抑制的KRAB等,同时将复合物锚定在基因转录起始区域的上游,即可实现对特定基因的转录激活或转录抑制。dCas9技术原理3.外源过表达和内源激活的区别和选择4.基因干扰和基因敲除的的区别和选择
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