手足口病EV-U/EV71型/CoxA16型病毒三重荧光PC

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手足口病EV-U/EV71型/CoxA16型病毒三重荧光PCR检测试剂盒价格是高品质的病毒PCR检测试剂盒产品，由北京百奥莱博供应，用于科研实验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多手足口病EV-U/EV71型/CoxA16型病毒三重荧光PCR检测试剂盒等病毒PCR检测试剂盒产品请联系我司咨询订购。

名称：手足口病EV-U/EV71型/CoxA16型病毒三重荧光PCR检测试剂盒价格
英文名：EV-U/EV71/CoxA16 PCR Detection Kit
规格：48次/盒
品牌：百奥莱博
编号：SYA214
一、简介
本试剂盒用一对手足口通用型特异性引物，一对手足口EV71型特异性引物，一对手足口CA16型特异性引物，分别结合一条特异性荧光探针，用一步法荧光RT-PCR技术对手足口通用型EV-U RNA、手足口EV71型RNA、手足口CA16型RNA进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。本试剂盒中手足口通用型的探针报告基团为CY5，手足口EV71型的探针报告基团为FAM，手足口CA16型的探针报告基团为HEX/VIC/JOE。

二、用途：
本试剂盒适用于检测各种脑脊液、咽拭子、粪便或肛拭子或疱疹液内的液体等。可用于手足口病病毒感染的辅助诊断、监测及流行病学调查，其检测结果仅供参考。

三、试剂盒组成：(48T)
组份 数量 规格
EV-U+EV71+CA16荧光反应液(EV-U+EV71+CA16-qRT-PCR MIX) 2管 456μL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
阴性对照(NTC) 1管 30μL/管
阳性对照(EV-U+EV71 +CA16-PTC) 1管 30μL/管

四、储存条件及有效期：
本试剂盒于-20℃以下保存，有效期为9个月。

五、荧光PCR仪器适用范围：
1ABI系列，Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。

六、病毒RNA提取
6.1 样品的采集
按照相关标准采集。标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-80℃，但不能超过6个月，标本运送应采用0℃冰壶。
6.1.1 血清：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入无菌的干燥玻璃管，室温(22-25℃)放置30-60min，血标本可自发完成凝集析出血清，或直接使用水平离心机，3000rpm离心5min，吸取上层血清，转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.2 血浆：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入含EDTA2Na(乙二*(代"胺")四乙酸二*)或柠檬酸*抗凝剂的玻璃管，立即轻轻颠倒玻璃管混合5-10次，使抗凝剂与静脉血充分混匀，5-10min后即可分离出血浆，转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.3 拭子、分泌物等样品：在装有拭子或分泌物的离心管中加入500µL PBS或生理盐水，剧烈振荡30s。棉拭子尽量挤出液体转移到无RNA酶污染的离心管中，6000rpm离心20s，取上清备用。
6.1.4 病灶组织样品：称取组织约0.1g于研磨器或组织匀浆器中研磨(最好置于冰上或加入液氮)，再加1mL生理盐水研磨至无块状物，然后将样品转至1.5mL灭菌离心管中，8000rpm离心2min，取上清液于1.5mL灭菌离心管中。
6.2 样品RNA提取
可按常规方法提取，也可采用商品化试剂盒提取病毒RNA。
6.2.1 取无RNA酶的1.5 mL Eppendorf离心管，做好标识。
6.2.2 加入600 µL 裂解液，200 µL样本，200 µL *仿，混匀器上振荡5 s，4℃ 12000 rpm离心15 min。
6.2.3 吸取步骤6.2.2中的上清液转移至新的无RNA酶的1.5 mL Eppendorf离心管中(避免吸出中间层)，加入400 µL 异丙醇，颠倒混匀。
6.2.4 4℃ 12000 rpm离心15 min，弃上清；加入600 µL 75％乙醇。
6.2.5 4℃ 12000 rpm离心10 min，弃上清。打开离心管管盖，室温干燥5 min-10 min。
6.2.6 加入10µL 无核酸酶水，溶解管底的RNA，5000 rpm离心5 s，-20℃保存。若长期保存需放置-80℃冰箱。
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

七、检测步骤
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qRT-PCR反应液(EV-U+EV71+CA16-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，室温融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 19µL N×19µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 20µL N×20µL
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入20μL，向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(EV-U+EV71+CA16-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qRT-PCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。推荐循环条件:
反转录(Reverse Transcription) 1循环 50℃ for 10 min
预变性 1循环 95℃ for 3 min
PCR扩增 45循环 95℃ for 5 sec
55℃ for 60 sec
在55℃延伸时收集荧光信号。设置为CY5、FAM和HEX/VIC/JOE。其中CY5基团检测EV-U，FAM基团检测EV71，HEX/VIC/JOE基团检测CA16。
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
（1） 阴性对照(NTC)：EV-U、FAM和HEX/VIC/JOE通道全部阴性。
（2） 阳性对照(EV-U+EV71+CA16-PTC)：EV-U、FAM和HEX/VIC/JOE通道均有扩增曲线。
（3） 以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
8.3 结果判定
（1） CY5通道：Ct值≤35手足口通用型病毒核酸为阳性；Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明手足口通用型病毒核酸阴性。Ct值在35-40个循环之间，为灰区，需要进行重复试验。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明手足口通用型病毒核酸阳性；否则判为样本阴性
（2） FAM通道：Ct值≤35 EV71型手足口病病毒核酸为阳性；Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明EV71型手足口病病毒核酸阴性。Ct值在35-40个循环之间，为灰区，需要进行重复试验。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明EV71型手足口病病毒核酸阳性；否则判为样本阴性。
（3） HEX/VIC/JOE通道：Ct值≤35 CA16型手足口病病毒核酸为阳性；Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明CA16型手足口病病毒核酸阴性。Ct值在35-40个循环之间，为灰区，需要进行重复试验。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明CA16型手足口病病毒核酸阳性；否则判为样本阴性。

九、注意事项：
（1） 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
（2） 所有使用的离心管最好高压灭菌，而且必须不含RNA酶。
（3） PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
（4） 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
（5） 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。



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·丙型流感病毒单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA164
等级：科研实验专用
规格：48次/盒

·禽马立克氏病病毒(MDV)单重荧光PCR检测试剂盒
编号：SYA360
等级：科研实验专用
规格：48次/盒|96次/盒
一、简介：
本试剂盒用一对禽马立克病病毒特异性引物，结合一条特异性探针，用荧光PCR技术对禽马立克病病毒DNA进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染动物的病原学诊断。

二、用途：
该试剂盒适合于检测肿瘤组织、病变淋巴结、肝、肾、脾组织等样本中的禽马立克病病毒，用于禽马立克病毒病病毒(MDV)感染的辅助诊断，其检测结果仅供参考。

三、试剂盒组成：(48T)
组份 数量 规格
MDV反应液(MDV-qPCR MIX) 1管 672μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
MDV阳性对照(MDVPTC) 1管 50μL/管

四、储存条件及有效期：
本试剂盒于-20℃以下保存，有效期为6个月。

五、荧光PCR仪器适用范围：
ABI系列，Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。

六、样品的采集与DNA提取
6.1 样品的采集
剪取肿瘤组织、病变淋巴结组织。
6.2 样品前处理
组织样品：每份组织分别从3个不同的位置称取样品约1g，手术剪剪碎混匀后取0.05g于研磨器中研磨，加入1.5mL生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至1.5mL灭菌离心管中，8000rpm离心2min，取上清液100μL于1.5mL灭菌离心管中。
6.3 DNA提取
可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液，按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品，并按照相应试剂盒说明进行操作。
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。

七、检测步骤
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(MDV-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(MDV-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃ 延伸时收集荧光信号 。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX 参比荧光。

八、结果分析
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
（1） 阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。
（2） 阳性对照(MDV-PTC)：均产生扩增曲线。
（3） 以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
8.3 结果判定
（1） 在试验成立的条件下，Ct值≤35，且曲线有明显的指数增长曲线，表明MDV核酸阳性。
（2） Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明MDV核酸阴性。
（3） 如果Ct值>35，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
（4） 对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行MDV 检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明MDV核酸阳性；否则判为样本阴性。

九、注意事项：
（1） 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
（2） 所有使用的离心管最好高压灭菌，而且必须不含DNA酶。
（3） PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
（4） 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
（5） 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。



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