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北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博致力于最快速、最有效的检测产品,包括北京现货禽流感H9病毒荧光PCR检测试剂盒怎么卖在内的病毒PCR检测试剂盒产品是我公司倾力打造的优势产品,欢迎选购。
名称:北京现货禽流感H9病毒荧光PCR检测试剂盒怎么卖
等级:科研试剂
规格:48次/盒
品牌:百奥莱博
产地:国产|进口
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编号:SYA193
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
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等级:科研实验专用
规格:48次/盒
一、简介:
本试剂盒用一对副溶血性弧菌特异性引物,结合一条特异性探针,用荧光PCR技术对副溶血性弧菌核酸进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。
二、用途:
该试剂盒适用于检测水样粪便、疑似污染的水、食物等样本中的副溶血性弧菌,用于副溶血性弧菌(VP)感染的辅助诊断,其检测结果仅供临床参考。
三、试剂盒组成:(48T)
| 组份 | 数量 | 规格 |
| VP反应液(VP-qPCR MIX) | 1管 | 1mL/管 |
| 核酸提取液(DNA Extraction) | 2管 | 1.5mL/管 |
| 酶混合物(Enzymes MIX) | 1管 | 48μL/管 |
| 阴性对照(NTC) | 1管 | 250μL/管 |
| VP阳性对照(VP-PTC) | 1管 | 50μL/管 |
四、荧光PCR仪器适用范围
ABI系列、MJ系列、Roche系列,博日系列及其他荧光定量PCR检测仪。
五、储存条件及有效期:
本试剂盒于-20℃以下保存,有效期为12个月。
六、样品采集、前处理与DNA提取
6.1 样品采集
水样便取0.5-1 mL;疑似污染的食物取1g。
6.2 样本前处理:
水样便13000rpm离心2min,去尽上清;疑似污染的食物用手术剪剪碎混匀后取0.05g于研磨器中研磨,加入1.5mL生理盐水后继续研磨,待匀浆后转至1.5mL灭菌离心管中,8000rpm离心2min,取上清液100μL于1.5mL灭菌离心管中;疑似污染的水直接取100μL。
6.3 DNA提取
6.3.1 对上述处理好的样本加入等体积的核酸提取液(固体标本加入50uL核酸提取液),100℃恒温处理10min,13000rpm离心5min,取上清液转移至新的1.5mL EP管,-20℃保存;
6.3.2 DNA的提取也可以采用商业化DNA提取试剂盒。
注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取4µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议最后在样品制备区域加入阳性对照。
七、检测步骤:
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(VP-qPCR MIX)、酶混合液(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
| 试剂 | 每个反应加入的量 | N个反应加入的量 |
| 荧光PCR反应液 | 20µL | N×20µL |
| 酶混合液 | 1µL | N×1µL |
| 总量 | 21µL | N×21µL |
计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入21μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(VP-PTC)4μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。推荐循环条件:
| 预变性 | 1循环 | 94℃ for 2 min |
| PCR扩增 | 40循环 | 94℃ for 15 sec 55℃ for 30 sec |
在55℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
八、结果分析:
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
(1)阴性对照(NTC):不应产生任何的扩增曲线。
(2)阳性对照(VP-PTC):均产生扩增曲线。
(3)以上条件应同时满足,否则,此次试验视为无效。
8.3 结果判定
(1)在试验成立的条件下,Ct值≤35的样本为阳性,表明副溶血性弧菌核酸阳性。
(2)Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明副溶血性弧菌核酸阴性。
(3)如果35<Ct值≤40,判为可疑样品。对于可疑样品,先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线,则为可疑阳性,否则判为阴性。
(4)对于可疑阳性样品,重新抽提核酸,再次进行副溶血性弧菌qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明副溶血性弧菌核酸阳性;否则判为样本阴性。
九、注意事项:
(1)初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2)所有使用的离心管应高压灭菌,而且必须不含DNA酶。
(3)PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等),防止实验室污染。
(4)样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
(5)盒内所有物品应视为污染物对待,按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
北京百莱博科技有限公司专业生产供应销*(代"售")生物试剂、化学试剂、抗原抗体、血清血浆、Elisa试剂盒,更多试剂产品需求,欢迎来电咨询选购北京现货禽流感H9病毒荧光PCR检测试剂盒怎么卖。
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文献和实验刘金华 ,山东冠县人,1966年9月出生,现为中国农业大学动物医学院教授,长期致力于动物流感病毒研究,取得多项流感病毒科研成果。 他从基因水平证明了近年来发生于中国的H9N2禽流感病毒已在流感家族中形成了一稳定的谱系,不同于在中国周围国家发生的流感,有力地驳斥了国外的禽流感是由中国引起的。特别是,在世界流感研究中,首次证明了大陆流感与香港流感的分子区别。成功制备了H9亚型流感病毒血凝素单克隆抗体,并应用该系列抗体证明了世界各地的H9N2流感病毒的抗原
、H3、H5、H7和H9等各亚型毒株,对野生型的人H5N1病毒则有更高的生产效率[15]。其工艺流程:复苏细胞库的Vero细胞,经方瓶和转瓶扩增种子细胞,接种至生物反应器中,经过反应器逐级放大至6000L反应器,控制细胞密度在2×106~3×106/mL,按一定的病毒感染复数(Multiplicity of infection,MOI)接种病毒,病毒吸附lh后加入胰酶,32~35℃孵育48~72 h后收获病毒液。 2.2 国内应用现状 国内禽流感疫苗或流感疫苗的生产工艺均采用鸡胚生产
余种。值得注意的是:该公司2009年6月先后通过甲型H1N1流感病毒RNA检测试剂盒(荧光PCR法)的质量管理体系考核、取得甲型H1N1流感病毒RNA检测试剂盒(荧光PCR法)的注册受理通知书。2009年6月17日国家食品药品监督管理局医疗器械监管司王宝亭司长、王兰明专员光临我公司并对甲型H1N1流感病毒检测试剂盒文号申报工作进行指导。2009年6月首批428套甲型H1N1流感病毒检测试剂盒配发至全国213个流感检测网络实验室PS:今年甲型流感这一试剂的开发和应用,让金豪公司赚得盆满钵满
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