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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃
- 保质期:
半年
- 英文名:
Fluorescent PCR detection kit for Yersinia enterocolitica
- 库存:
346
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博致力于最快速、最有效的检测产品,包括SYA024型小肠耶尔森菌荧光PCR检测试剂盒哪里卖在内的病毒PCR检测试剂盒产品是我公司倾力打造的优势产品,欢迎选购。
名称:SYA024型小肠耶尔森菌荧光PCR检测试剂盒哪里卖
产地:国产|进口
规格:48次/盒
编号:SYA024
品牌:百奥莱博
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SYA024型小肠耶尔森菌荧光PCR检测试剂盒哪里卖关键词:Fluorescent PCR detection kit for Yersinia enteroc,小肠耶尔森菌荧光PCR检测试剂盒,SYA024
·土拉弗朗西斯菌单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA132
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·结核杆菌(TB)单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA488
等级:科研实验专用
规格:48次/盒|96次/盒
一、简介
本试剂盒用一对结核杆菌特异性引物,结合一条特异性探针,用荧光PCR技术对结核杆菌核酸进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。
二、用途
该试剂盒适合于检测外周血等样本中结核杆菌DNA,用于结核病等疾病的辅助诊断,其检测结果仅供临床参考。
三、试剂盒组成(40T/Kit)
组份 数量 规格
TB反应液(TB-qPCR MIX) 1管 560μL/管
核酸提取液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管
酶混合液(Enzymes MIX) 1管 40μL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
TB阳性对照(TB-PTC) 1管 50μL/管
四、荧光PCR仪器适用范围:
ABI系列、MJ系列、Roche系列,博日系列及其他荧光定量PCR检测仪。
五、储存条件及有效期:
本试剂盒于-18℃以下保存,有效期为12个月。
六、样品采集、前处理与DNA提取
6.1 样品采集
6.1.1 适用标本类型:痰、支气管灌洗液、尿、粪、脑脊液或胸、腹水,其他肺外感染可取血、相应部位分泌液或组织细胞等。
6.1.2 标本采集
6.1.2.1 组织:取发病组织约1g,置入1.5mL洁净EP管,立即送检;
6.1.2.2 血液:无菌注射器抽取外周血1-2mL注入EDTA2Na(或柠檬酸*)抗凝管;
6.1.2.3 液体标本:取0.5-1mL左右,置入1.5ml洁净EP管,立即送检;
6.2 样本前处理:
6.2.1 脑脊液和胸、腹水:13000rpm离心3min沉淀集菌,去上清;
6.2.2 痰、支气管灌洗液、尿、粪等污染标本:经4%NaOH(痰和碱的比例为1:4,尿、支气管灌洗液和碱的比例为1:1)处理15min;尿标本加5%鞣酸、5%乙酸各0.5mL于锥形量筒内静置,处理后吸去上清,沉淀直接用于提取结核杆菌DNA或者经酸中和后接种培养,然后再对培养物提取DNA。
6.3 DNA提取
6.3.1 对上述处理好的样本加入40uL核酸提取液,100℃恒温处理10min,13000rpm离心5min,取上清液转移至新的1.5mL EP管,-20℃保存;
6.3.2 DNA的提取也可以采用商业化DNA提取试剂盒。
注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取4µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议最后在样品制备区域加入阳性对照。
七、检测步骤:
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(TB-qPCR MIX)、酶混合液(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合液 1µL N×1µL
总量 15µL N×15µL
计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入21μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(TB-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
八、结果分析
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
(1) 阴性对照(NTC):不应产生任何的扩增曲线。
(2) 阳性对照(TB-PTC):均产生扩增曲线。
(3) 以上条件应同时满足,否则,此次试验视为无效。
8.3 结果判定
(1) 在试验成立的条件下,Ct值≤35的样本为阳性,表明结核杆菌核酸阳性。
(2) Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明结核杆菌核酸阴性。
(3) 如果35<Ct值≤40,判为可疑样品。对于可疑样品,先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线,则为可疑阳性,否则判为阴性。
(4) 对于可疑阳性样品,重新抽提核酸,再次进行结核杆菌real time PCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明结核杆菌核酸阳性;否则判为样本阴性。
九、注意事项:
(1) 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2) 所有使用的离心管应高压灭菌,而且必须不含DNA酶。
(3) PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等),防止实验室污染。
(4) 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
(5) 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
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