北京WE0151型快速实时荧光定量PCR的预混体系(荧光探针

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售")，产品线涵盖北京WE0151型快速实时荧光定量PCR的预混体系(荧光探针)价格厂家在内的分子生物学试剂产品，还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。

名称：北京WE0151型快速实时荧光定量PCR的预混体系(荧光探针)价格厂家
规格：1ml|5ml
编号：WE0151
品牌：百奥莱博
英文名：Fast TaqMan Mixture
  本品是专用于探针法(TaqMan，Molecular Beacon等)实时荧光定量PCR的预混体系，浓度为2×,包含Fast Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、dNTPs、Mg2+等，操作简单方便。主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录后的cDNA靶序列检测。本品含有的Fast Taq DNA Polymerase，能有效减少在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，酶的激活仅需在95℃孵育30s。整个PCR反应过程比普通反应可节省约40分钟，大大缩短了PCR的反应时间。独特的PCR缓冲体系与快速热启动酶的组合，有效抑制了非特异产物的产生，并显著提高了PCR的扩增效率，荧光信号更强，灵敏度更高，线性范围更宽。该产品适用范围广，可用于普通和快速定量PCR程序。

  ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同，因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。
不需要ROX校正的仪器(WE0151)：
Roche LightCycler 480，Roche LightCyler 96，Bio-rad iCyler iQ，iQ5，CFX96等。
需要Low ROX校正的仪器(WE0152)：
ABI Prism7500/7500 Fast，QuantStudio® 3 System，QuantStudio® 5 System，QuantStudio® 6 Flex System，QuantStudio® 7 Flex System，ViiA 7 system，Stratagene Mx3000/Mx3005P，Corbett Rotor Gene 3000等。
需要High ROX校正的仪器(WE0153)：
ABI Prism7000/7300/7700/7900，Eppendorf，ABI Step One/Step One Plus等。

试剂盒组成：

 

组份	WE0151-5ml	WE0152-5ml	WE0153-5ml
2×Fast TaqMan Mixture	5×1ml	5×1ml	5×1ml
50×Low ROX	-	200μl	-
50×High ROX	-	-	200μl
ddH2O	5×1ml	5×1ml	5×1ml

注意事项：
1、使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
2、避免反复冻融本品，反复冻融可能使产品性能下降。本产品长期保存可置于-20℃，避光。如果在短期内需要频繁使用，可在2～8℃保存。

使用方法：
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系	终浓度
2×Fast TaqMan Mixture(With ROX)	25μl	1×
Forward Primer，10μM	1μl	0.2μM
Reverse Primer，10μM	1μl	0.2μM
Probe，10μM	1μl	0.2μM
Template DNA	2μl
50×Low ROX or High ROX(可选)	1μl	1×
ddH2O	up to 50μl

注意：
1)通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果，可以在0.1-1.0μM作为设定范围的参考。
2)所用探针的终浓度，与使用的荧光定量PCR仪、探针种类、荧光标记物质种类有关，实际使用时请参照仪器说明书，或各荧光探针的具体使用要求进行浓度的调节。
3)通常DNA模板的量以10-100ng基因组DNA或1-10ng cDNA为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。
4)不同仪器的激发光学系统有所不同，根据使用荧光定量的仪器选择加入50× Low ROX or 50×High ROX。

2、PCR反应程序：
建议采用两步法PCR反应程序，本程序是以ABI 7500荧光定量PCR仪为参照设定。
 

步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	30 s
变性	95℃	5 s	35-40 个循环
退火/延伸	60℃	30 s

注意：
1)本产品所采用的酶须在预变性95℃、30s条件下实现酶的活化。在此条件下，大多数模板可良好的进行解链。对GC含量高、二级结构复杂的模板，可将预变性时间延长至1-4分钟，以使起始模板充分解链。
2)建议采用两步法PCR反应程序，若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增，退火温度请以 56℃-64℃的范围作为设定参考。

储存条件：-20℃，避免反复冻融

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·TRIzon试剂(总RNA提取)
编号：WE0191
英文名称：TRIzon Reagent
规格：100ml
  TRIzon是广谱型总RNA提取试剂。实验操作快速方便，颜色鲜明，便于分层。本试剂适用范围广泛，可以从动物组织、植物材料、各种微生物及培养细胞等样品中提取总RNA。样品在TRIzon中被充分裂解的同时能够最大限度地保证RNA的完整性。在加入*仿离心后，溶液会分成三层：上层无色水相、中间层和下层红色有机相，RNA分布在上清层中。收集上清层后，经异丙醇沉淀便可以回收得到总RNA。提取的总RNA完整性好，无蛋白和DNA污染，可用于各种分子生物学常规实验，如RT-PCR、Real-time RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、体外翻译等。

自备试剂：*仿、异丙醇、75%乙醇、无RNase的水(新开封或提取RNA专用)。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、预防RNase污染，应注意以下几方面：
1)使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。
2)玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时，塑料器皿可在0.5M的NaOH中浸泡10分钟，用水彻底冲洗后高压灭菌。
3)配制溶液应使用无RNase的水。
4)操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。
2、提取的样品避免反复冻融，否则影响RNA提取得率和质量。
3、本品中含有*酚，具有毒性和腐蚀性。如果吸入体内、接触皮肤、吞食等会导致中毒、灼伤以及其他身体伤害。使用本制品时应穿戴防护物品，如防护服装、手套、眼罩、面罩等。如果不小心接触到眼睛，应立即用大量的水冲洗并前往医院治疗。
4、样品用TRIzon 匀浆后，如不即刻加入*仿，置于-70℃下可放置一个月以上。
5、保存在75%乙醇中的RNA沉淀，2～8℃可以保存一周，-20℃条件下可以保存1年。RNA半衰期比较短，容易降解，建议提取后尽快进行后续实验，如反转录成cDNA，Northern Blot等。
6、若下游实验对DNA非常敏感，建议用不含RNase的DNase I(货号：WE0213A)对RNA进行处理。

操作步骤：

1．各种材料的处理
1a.植物组织：取新鲜植物组织在液氮中充分研磨或将植物组织剪碎后直接在TRIzon中迅速研磨，每30-50 mg组织加入1ml TRIzon，混匀。
注意：样品体积一般不要超过TRIzon体积的10%。
1b.动物组织：取新鲜或-70℃冻存的动物组织尽量剪碎，每30-50 mg组织加入1ml的TRIzon，匀浆仪进行匀浆处理。或在液氮中研磨后加入TRIzon 1ml混匀。
注意：样品体积一般不要超过TRIzon体积的10%。
1c.单层培养细胞：吸去培养液，可直接在培养板中加入适量TRIzon(每10cm2面积需要1ml TRIzon)，用取样器反复吹打使细胞裂解。也可用胰蛋白酶处理后，将细胞溶液转移至RNase-Free的离心管中，300×g离心5 min，收集细胞沉淀，仔细吸除所有上清，加入TRIzon 1ml混匀。
注意：
1)收集细胞数量不要超过1×107。
2)TRNzol加量根据培养板面积决定，不是由细胞数决定。如果TRIzon加量不足，可能导致提取的RNA中有DNA污染。
3)收集细胞时一定要将细胞培养液去除干净，否则会导致裂解不完全，造成RNA的产量降低。
1d.细胞悬液：离心收集细胞。每5×106-1×107动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加入1ml TRIzon。
注意：
1)加入TRIzon前不要洗涤细胞，以免RNA降解。
2)一些酵母和细菌细胞可能需要匀浆仪或液氮研磨处理。
1e.血液处理：直接取新鲜的血液，加入3倍体积TRIzon(推荐0.25ml全血加入0.75mlTRIzon)，充分振荡混匀。
1f.可选步骤：对于蛋白、脂肪、多糖或胞外物质含量高的样品，如肌肉组织、脂肪组织或植物的块茎，可以在匀浆处理后4℃，12000rpm(~～13400×g)离心10分钟以除去不溶物质，此时沉淀中含胞外物质、多糖和高分子量的DNA，而RNA存在于上清中。

2、样品中加入TRIzon后反复吹打几次，使样本充分裂解。室温放置5分钟，使蛋白核酸复合物完全分离。
3、向以上溶液中加入*仿，每使用1ml TRIzon加入0.2ml*仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置2-3分钟。
4、4℃下12000rpm离心15分钟，此时样品分成三层：红色有机相，中间层和上层无色水相，RNA 主要在水相中，把水相(约600μl)转移到一个新的RNase-Free离心管(自备)中。
5、在得到的水相溶液中加入等体积异丙醇，颠倒混匀，室温放置10分钟。
6、4℃ 12000rpm 离心10分钟，弃上清。
7、加入75%乙醇(用无RNase的水配制)洗涤沉淀。每使用1ml TRIzon用1ml 75%乙醇对沉淀进行洗涤。
8、4℃ 12000rpm离心3分钟，小心吸弃上清，注意不要吸弃RNA沉淀。
注意：剩余的少量液体可短暂离心，然后用枪头吸出，注意不要吸弃沉淀。
9、室温放置2-3分钟，晾干。加入30-100μl无RNase的水，充分溶解RNA，得到的RNA保存在-70℃，防止降解。
注意：沉淀不要过分干燥，以免难于溶解。

储存条件：2～8℃避光。


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·血液基因组DNA提取试剂盒
编号：WE0176
英文名称：BalbGen Blood DNA Kit
规格：可处理50ml血液|可处理200ml血液
  本试剂盒提供了一种快速、灵活的方法，适用于新鲜或冷冻全血(用柠檬酸盐、EDTA或肝素等抗凝剂处理过的样品)提取总DNA，包括基因组DNA和线粒体DNA。本品可以灵活处理0.1-20ml的全血，采用非离心柱的方法，无需使用*酚、*仿等有机溶剂，有效去除蛋白、色素、脂类及其它抑制性杂质污染。整个过程在一个管中操作，减少了污染及样本混淆的风险。提取的DNA产量高、质量好，可直接用于PCR、荧光定量PCR、酶切和Southern Blot以及文库构建等实验。

试剂盒组成：

组份	可处理50ml血液	可处理200ml血液
Buffer FG1	2×65ml	2×260ml
Buffer FG2	30ml	120ml
Buffer GE	15ml	60ml
蛋白酶K	3 mg	12.5mg
蛋白酶K 储存液	1.25ml	1.25ml

保存条件：Buffer FG1 2～8℃，其他组分室温(15～30℃)。

产品特点
1、纯度高：提取的基因组DNA可直接用于下游PCR、荧光定量PCR、酶切等各种实验。
2、提取量大：可从0.1-20ml的全血中提取DNA，无需使用*酚、*仿等有机溶剂。
3、兼容性强：适用于处理各种血液和细胞样本。

自备试剂：异丙醇、70%乙醇

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、向蛋白酶K 中加入指定用量(0.3ml/1.25ml)的蛋白酶K 储存液使其溶解，-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
2、所有离心操作均在室温下完成。
3、血液样品反复冻融，会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。所得基因组DNA也应尽可能避免反复冻融，以免降解。如果提取冷冻血液的基因组DNA，建议37℃水浴，迅速解冻后再进行后续操作。
4、血液样品的储存：
1)短期保存：已加入抗凝剂的血液样品可在2～8℃储存最多10天，对于某些实验例 如Southern杂交等，需要得到完整全长的基因组DNA，请将血液样品在2～8℃储存不超过3天，此时基因组DNA的降解程度较轻。
2)长期保存：已加入抗凝剂的血液请置于-70℃保存(如果提取的是高分子量的DNA，推荐使用EDTA作为抗凝剂)。

操作步骤：

一、从100～900μl全血中提取基因组(以300μl血液处理量为例)
1、取300μl全血于2ml离心管(自备)中，加入300μl(样本等体积)Buffer FG1，上下颠倒混匀5次，10000×g离心30秒，弃上清。
2、再向离心管中加入450μl(1.5倍样本体积)Buffer FG1，涡旋震荡，使沉淀完全分散。10000g离心30秒，弃上清，并把离心管倒置于干净的吸水纸上，放置2分钟。
注意：在极少情况下沉淀可能会松弛，所以要缓慢倒掉上清。将离心管倒置在吸水纸上，可以减少管壁上清的回流。
3、按照附表配制Buffer FG2与蛋白酶K 的混合液(比例100:1)。
注意：此混合液最好现用现配.井在配好后1小时之内用完。
4、加入150μl的Buffer FG2与蛋白酶K 的混合液，立即涡旋混匀至溶液无团块。
注意：
1)如果有多个样品同时操作，加入Buffer FG2/蛋白酶K 混合液后立即涡旋震荡，不要等所有样品部加完后再震荡。
2)通常涡旋震荡3-4次.毎次5秒，可以使沉淀充分悬浮，如果涡旋震荡后发现沉淀中含胶状物质可以再加入30μl的Buffer FG2/蛋白酶K 混合液，再次混旋混匀。
5、65℃孵育10分钟，其间颠倒混匀数次。
注意：如果样品颜色从红色变成橄榄绿说明蛋白消化完全。
6、加入150μl导丙醇，上下颠倒彻底混匀直至出现丝状或簇状基因组DNA。
注意：与异丙醇完全混合对于沉淀DNA非常重要。如果样品中白细胞含量少，可能看不到DNA，则至少上下频倒高心管20次确保沉淀完全。
7、10000×g离心5分钟。
注意：如果沉淀贴壁不牢，可以适当延长离心时间或増大离心力。
8、弃上清，并把离心管倒置于干净的吸水纸上吸干。
注意：少数时候沉淀可能贴壁不牢，注意不要吸弃沉淀。
9、加入300μl的70%乙醇，涡旋震荡5秒，10000×g离心5分钟，弃上清。
注意：如果沉淀贴壁不牢，可以适当延长离心时间或増大离心力。
10、把离心管倒置于干净的吸水纸上5分钟，确保沉淀在管中 。
注意：在管底可见白色的DNA沉淀，在极少情況下沉淀可能会松弛 ，所以要缓慢倒掉上清。
11、空气干燥DNA沉淀直至所有的液体挥发干净(至少5分钟)。
注意：乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、 PCR等)实验，但避免过度干操DNA沉淀，因过度干燥会使DNA难于溶解。
12、加入200lμl的Buffer GE，低速涡旋5秒，65℃孵育1小时溶解DNA，期间轻弹数次助溶。-20℃保存DNA。
注意：如果DNA没有完全溶解，可室温过夜。如果使用少量的FG3溶解DNA，建议延长孵育时间。

二、从1～5ml全血中提取基因组(以3ml血液外理量为例)
1、取3ml全血于15ml离心管(自备)中，加入3ml(样本等体积)Buffer FG1，上下颠倒混匀5次，2500×g离心5分钟，弃上清。
2、再向离心管中加入4.5ml(1.5倍样本体积)Buffer FG1，涡旋震荡，使沉淀完全分散。2500×g离心5分钟，弃上清，并把离心管倒置于干净的吸水纸上，放置2分钟。
注意：在极少情况下沉淀可能会松弛 ，所以要缓慢倒掉上清。将离心管倒置在吸水纸上，可以減少管壁上清的回流。
3、按照附表配制缓冲液FG2与蛋白酶K 的混合液(比例100:1)。
注意：此混合液最好现用现配，井在配好后1h之内用完。
4、加入1.5ml Buffer FG2/蛋白酶K 混合液，立即涡旋混匀至溶液无团块。
注意：
1)如果有多个样品同时操作，加入Buffer FG2/蛋白酶K 混合液后立即涡旋振荡，不要等所有样品都加完后再震荡。
2)通常涡旋震荡3-4次，毎次5秒可以使沉淀充分悬浮，如果涡旋震荡后发现沉淀中含胶状物质可以再加入300lμl的Buffer FG2/蛋白酶K 混合液，再次涡旋混匀。
5、65℃孵育10～30分钟，其间颠倒混匀数次。
注意：如果样品额色从红色变成橄榄绿说明蛋白消化完全。
6、加入1.5ml导丙醇，上下颠倒彻底混匀直至看到DNA。
注意：与异丙醇完全混合对于沉淀DNA非常重要。如果样品中白细胞含量少，可能看不到DNA，则至少上下颠倒离心管20次确保沉淀完全。
7、2500×g离心5分钟。
注意：如果沉淀贴壁不牢，可以造当延长离心时间或増大离心力。
8、弃上清，并把离心管倒置于干净的吸水纸上吸干。
注意：在管底可见自色的DNA沉淀，在极少情况下沉淀可能会松弛 ，所以要缓慢倒掉上清。
9、加入1.5ml的70%乙醇，涡旋震荡5秒，2500×g离心5分钟，弃上清。
注意：如果沉淀贴壁不牢.可以适当延长离心时间或増大离心力。
10、把离心管倒置于干净的吸水纸上5分钟，确保沉淀在管中 。
注意：在极少情况下沉淀可能会松弛，所以要缓慢倒掉上清。
11、空气干燥DNA沉淀直至所有的液体挥发干净(至少5分钟)。
注意：乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、 PCR等)实验，但避免过度干燥DNA沉淀，因过度干燥会使DNA难于溶解。
12、加入300μl的Buffer GE，低速涡旋5秒，65℃孵育1小时溶解DNA，期间轻弹数次助溶。一20℃保存DNA。
注意：如果DNA没有完全溶解，可室温过夜。如果使用少量的FG3溶解DNA，建议延长孵育时间。

三、从6～20ml全血中提取基因组(以10ml血液处理量为例)
1、取10ml全血于50ml离心管(自备)中，加入10ml Buffer FG1，上下颠倒混匀5次，2500×g离心5分钟。
2、再向离心管中加入15ml Buffer FG1，涡旋震荡，使沉淀完全分散。2500×g离心5分钟，弃上清，并把离心管倒置于干净的吸水纸上，放置2分钟。
注意：在极少情况下沉淀可能会松弛，所以要缓慢倒掉上清。
3、按照附表配制缓冲液FG2与蛋白酶K 的混合液(比例100:1)。
注意：此混合液最好现用现配，井在配好后1小时之内用完。
4、加入5ml Buffer FG2/蛋白酶K 混合液，立即涡旋混匀至溶液无团块。
注意：
1)如果有多个样品同时操作，加入Buffer FG2/蛋白酶K 混合液后立即涡旋震荡，不要等所有样品都加完后再震荡。
2)通常涡旋震荡3-4次，毎次5秒可以使沉淀充分悬浮，如果涡旋震荡后发现沉淀中含胶状物质可以再加入1ml BufferFG2/蛋白酶K 混合液，再次涡旋混匀。
5、65℃孵育30分钟，其间颠倒混匀数次。
注意：如果样品颜色从红色变成橄榄绿说明蛋白消化完全。
6、加入5ml导丙醇，上下颠倒彻底混匀直至看到DNA。
注意：与异丙醇完全混合对于沉淀DNA非常重要，应该至少上下颠倒离心管20次确保沉淀完全。
7、2500×g离心5分钟。
注意：如果沉淀贴壁不牢，可以适当延长离心时间或増大离心力。
8、弃上清，并把离心管倒置于干净的吸水纸上吸干。
注意：在管底可见白色的DNA沉淀，在极少情况下沉淀可能会松弛 ，所以要缓慢倒掉上清。
9、加入5ml的70%乙醇，涡旋震荡5秒，2500×g离心5分钟，弃上清。
注意：如果沉淀贴壁不牢，可以适当延长离心时间或増大离心力。
10、把离心管倒置于干净的吸水纸上5分钟，确保沉淀在管中 。
注意：在极少情况下沉淀可能会松驰 ，所以要缓慢倒掉上清。
11、空气干燥DNA沉淀直至所有的液体挥发干净(至少5分钟)。
注意：乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、 PCR等)实验，但避免过度干燥DNA沉淀，因过度干燥会使DNA难于溶解。
12、加入1ml的Buffer GE，低速涡旋5秒，65℃孵育1小时溶解DNA，期间轻弹数次助溶。-20℃保存DNA。
注意：如果DNA没有完全溶解.可室温过夜。如果使用少量的FG3溶解DNA，建议延长孵育时间。

附表：不同体积血液所需各种缓冲液用量

缓冲液	血液样品的体积(μl)
	100	300	1000	3000	5000	10000	20000
Buffer FG1(μl)	250	750	2500	7500	12500	25000	50000
Buffer FG2(μl)	50	150	500	1500	2500	5000	10000
蛋白酶K(μl)	0.5	1.5	5	15	25	50	100
异丙醇(μl)	50	150	500	1500	2500	5000	10000
70%乙醇(μl)	50	150	500	1500	2500	5000	10000
Buffer GE(μl)	100	200	200	300	500	1000	1000
补加FG2和蛋白酶K 混合液	10	30	100	300	500	1000	1000

储存条件：室温(15～30℃)。


北京WE0151型快速实时荧光定量PCR的预混体系(荧光探针)价格厂家关键词：荧光探针,快速实时荧光定量PCR的预混体系,快速实时荧光定量PCR的预混体系(荧光探针),Fast TaqMan Mixture,WE0151

F030830 BIOTIN标记兔抗人IgG抗体 Rabbit Anti-Human IgG*BIOTIN
3,3-二*基联*(代"*")*(代"胺")四盐*(代"酸")盐 Resazurin sodiu*(代"m") salt  868272-85-9
BL0885 兔抗猪IgG免疫血清
F050321 猫IgG抗体 The cat IgG
ARB14065 鲤鱼卵黄蛋白原(VTG)elisa检测操作说明书 Fish vtg ELISA KIT
丽春红2R EDTA-3K 3761-53-3
ARB14106 大鼠前列环素(PGI2)酶免分析 
ARB11777 人解整合素样金属蛋白酶9(ADAM9)免费代测 Human a disintegrin and metalloprotease 9,adam9 ELISA KIT
9048-46-8 牛血清白蛋白Ⅴ Albumin BovineⅤ
甘*酸* Leucine Dehydrogenase 6000-44-8
91079-40-2 Casein Enzymatic Hydrolysate  酶水解酪素
BL1165 细菌基因组DNA提取试剂盒
ARB12750 小鼠CD3分子(CD3)代做ELISA实验 Mouse cluster of differentiation 3,cd3 ELISA KIT
PY04-095  利福平  1mg/支×10支  每支添加于100ml 改良CCDA琼脂培养基基础中，用于弯曲杆菌的选择性分离培养
β-乳球蛋白 Sulfanilamide 9045-23-2
110-15-6 Succinic acid  琥珀酸
PY04-070  *啶酮酸  2mg/支×10支  每支添加于100mlFraser增菌液中制成FraserⅡ培养基，用于李斯特氏菌选择性增菌培养
ARB13557 兔子内皮型一氧化*(代"氮")合成酶3(eNOS-3)ELISA检测服务 Rabbit endothelial nitric oxide synthase 3,enos-3 ELISA KIT
9007-34-5 Collgen TypeⅡ  胶原蛋白Ⅱ型(牛)

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