DiI 细胞膜红色荧光探针

DiI即DiIC18(3)，全称为1,1'-dioctadecyl-3,3,3',3'-tetramethylindocarbocyanine perchlorate，是常用的细胞膜荧光探针之一，呈现橙红色荧光。DiI是一种亲脂性膜染料，进入细胞膜后可以侧向扩散逐渐使整个细胞的细胞膜被染色。
DiI在进入细胞膜之前荧光非常弱，仅当进入到细胞膜后才可以被激发出很强的荧光。DiI被激发后可以发出橙红色的荧光，DiI和磷酯双层膜结合后的激发光谱和发射光谱。其中，大激发波长为549nm，大发射波长为565nm。
DiI可以溶解于无水乙醇、DMSO和DMF，溶解度约为1-2.5mg/ml。发现较难溶解时可以适当加热，并用超声处理以促进溶解。
DiI被广泛用于正向或逆向的，活的或固定的神经等细胞或组织的示踪剂或长期示踪剂(long-termtracer)。DiI通常不会影响细胞的生存力(viability)。被DiI标记的神经细胞在体外培养的条件下可以存活长达4周，在体内可以长达一年。DiI在经过固定的神经元细胞膜上的迁移速率为0.2-0.6mm/day，在活的神经元细胞膜上的的迁移速率为6mm/day。
DiI除了简单的细胞膜荧光标记外，还可以用于检测细胞的融合和粘附，检测发育或移植过程中细胞迁移，通过FRAP(Fluorescence Recovery After Photobleaching)检测脂在细胞膜上的扩散，检测细胞毒性和标记脂蛋白等。
用于细胞膜荧光标记时，DiI的常用浓度为1-25μM，常用的浓度为5-10μM。DiI可以直接染色活的细胞或组织，染色时间通常为5-20分钟。对于固定的细胞或组织，通常宜使用配制在PBS中的4%多聚甲醛进行固定，使用其它不适当的固定液会导致荧光背景较高。
1. DiD，DiO，DiI，DiR 和 DiS 细胞膜染色液制备
(1) 配置 DMSO 或 EtOH 储存液：储存液用 DMSO 或 EtOH 配置浓度 1～5 mM。
(2) 注意：未使用的储存液保存在-20℃，避免反复冻融。 (3) 工作液制备：用合适的缓冲液(如：无血清培养基，HBSS 或 PBS)稀释储存液，配制浓度为 1～5µM 的工 作液。   注意：工作液的终浓度是根据不同细胞和实验的经验来配制。可以从推荐浓度的十倍以上寻找佳条件。
2. 悬浮细胞染色
(1) 悬浮细胞密度为 1 × 106/mL 加入到工作液中。
(2) 在 37 ℃培养细胞 2～20 分钟，不同的细胞佳培养时间不同。
(3) 染色细胞试管在 1000～1500 转离心 5 分钟。
(4) 倾倒上清液，再次缓慢加入预温 37℃的培养液。
(5) 重复(3)，(4)步骤两次以上。
3. 粘壁细胞的染色
(1) 使粘壁的细胞在无菌实验室培养。
(2) 从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，将盖玻片放在潮湿的环境中。
(3) 在盖玻片的一角加入 100µL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
(4) 在 37 ℃培养细胞 2～20 分钟，不同的细胞佳培养时间不同。
(5) 吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片 2～3 次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，培养 5～10 分钟，然 后吸干培养基。
4. 显微镜检测
(1) DiD，DiO，DiI，DiR 和 DiS 滤光器的选择参见表 1。
(2) 多色染料的同时检测，滤光器按照以下设定： a) DiI 和 DiO=Omega XF52，Chroma 51004; b) DiI 和 DiD=Omega XF92，Chroma 51007; c) DiI，DiO 和 DiD=Omega XF93，Chroma 61005 5. 流式细胞仪的检测   DiD，DiO，DiI，DiR 和 DiS 染色的细胞可以分别用经典的 FL1，FL2，FL3 和 FL4 流式细胞仪检测。
-20℃干燥避光保存，有效期一年。