Addgene质粒-CaV1.3e[8a,11,31b,Δ3

在大肠杆菌中高效表达外源蛋白的策略

发表[1，2，3]。国内针对外源基因在原核细胞中高效表达的关键因素，构建了高效表达载体[4]，并在此基础上成功表达了一系列细胞因子的基因[5，6，7]。我们在分析了国内外有关在原核系统中表达蛋白的实验资料的基础上，对在大肠杆菌中高效表达外源蛋白的策略所涉及的内容进行全面的总结，以期有助于我国在这方面的研究。 1.有效表达载体的构型 构建表达质粒需要多种元件，需要仔细考虑它们的组合，以保证最高水平的蛋白质合成。E.coli 表达载体的基本结构[8]。 启动子(以杂和的tac 启动子为例

RNA介导的基因沉默

作物。在燕麦中，至今尚无 RNA 沉默的研究报道。RNAi 作为一种研究植物功能基因组的工具，确切地说，第一次大规模地使用是在拟南芥和玉米研究中，超过 100 个目的基因被沉默[41]。研究的关键一直集中在设计和构建可用的质粒载体，以便引发 RNAi 的外源基因能稳定地整合到染色体组中。本章将介绍目前在大麦和小麦中，下调基因表达所使用的 RNAi 和 VIGS 等多种方法。相对而言，虽然 RNA 基因沉默已是一项广泛应用的技术，但是，在植物研究中对其进行优化的报道相对较少。一段给定的序列能否产生 RNA

TFPI的蛋白质工程

其分子间作用力呈显著下降趋势。     在计算机模拟和蛋白质分子设计的基础上，以野生型TFPI基因为模板，用PCR方法引入突变，构建表达质粒pET―28a(+)―TFPI―Mutl和pET―28a(+)―TFPI―Mut4。然后参照野生型TFPI的基因表达、蛋白质复性及纯化方式，用大肠杆菌制备重组的TFPI―Mutl和TFPI―Mut4。试验证实TFPI―Mutl和TFPI―Mut4保持了与TFPI基本相当的抗凝活性，而且半衰期较TFPl分别延长1．62和4．22倍。