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pENTR223-VEGFA(NM_001171628.1)
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100
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上海柯雷生物
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20ul
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文献和实验RNase H RT来合成cDNA第一链,然后利用一个快速、有效的方法分离cDNA,通过一个简单的dC加尾系统来加尾,并使用了一个新颖的锚定引物,该引物带有脱氧次黄嘌呤,可以最大可能的有效、特异地从dC尾巴引发扩增发应。锚定引物设计时还可以选择提供UDG克隆位点,使获得5'RACE产物很方便。5'RACE系统版本2保留了原始的5'RACE系统基本策略和优点,同时包括下列一些改进:1)利用无DNase的RNase H和RNase T1的混合物,来去掉制备好的cDNA中的RNA,以防止带有的RNA会抑制
体DNA上只含有一种复制起点,如用于大肠杆菌的pBR和pUC系列质粒载体,然而有的克隆载体却含有两种复制子顺序,它们常来自于不同的生物,比如大肠杆菌-酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)穿梭载体YRp12 和YEp13等,这类载体能在这两种不同的生物中自主复制。 2) 病毒型载体:这类载体中所含的复制起点是来自病毒DNA。在大肠杆菌中,以噬菌体λ所组建的charon系列,λEMBL和λNM系列载体和以单链DNA噬菌体M13组建的M13mp系列载体。在动物
DNA大片段±*++-构建基因组文库-++-构建cDNA文库+---常规的亚克隆化+---构建新型的DNA结构+---序列分析+--+单链探针+**--+外源基因在大肠杆菌中的表达+--- *外源DNA如超过10kb,则重组质粒的转化率和DNA得率都非常低 **已有个别质料可用于此目的 四、其他载体 现在提到的分子载体有的不是用于克隆 某基因,而是作为外源基因进入受体细胞的运载工具。 (一)转座子载体 这里主要提一下有关果蝇转座因子(P因子)作为基因载体。因为这是很有希望的真核
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