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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
负80度
- 保质期:
3年
- 英文名:
pENTR223-CXCR4(NM_003467.2)
- 库存:
100
- 供应商:
上海柯雷生物
- 规格:
20ul
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文献和实验RNase H RT来合成cDNA第一链,然后利用一个快速、有效的方法分离cDNA,通过一个简单的dC加尾系统来加尾,并使用了一个新颖的锚定引物,该引物带有脱氧次黄嘌呤,可以最大可能的有效、特异地从dC尾巴引发扩增发应。锚定引物设计时还可以选择提供UDG克隆位点,使获得5'RACE产物很方便。5'RACE系统版本2保留了原始的5'RACE系统基本策略和优点,同时包括下列一些改进:1)利用无DNase的RNase H和RNase T1的混合物,来去掉制备好的cDNA中的RNA,以防止带有的RNA会抑制
盒,您可以得到:完整序列: 克隆基因片段的全长5'和3'末端以构建完整的cDNA序列灵敏: 得到每个细胞中拷贝数低至30的稀有转录本的全长5’和3’末端长度: 可以由长度至少为9kb的转录本得到cDNA仅通过一轮PCR反应就可以得到这些结果。一般不需进行巢式PCR,所以仅试一次就可以得到结果。全长5’末端选择:传统的RACE会得到多个PCR结果,因为其所使用的cDNA来源于断裂及全长mRNA。研究人员必须鉴定每一个PCR产物以获得带有全长5’末端序列的产物。GeneRacer™只针对全长的5’加帽mRNA
/254000×100%=1.2 掺入dNTP量=2nmol dNTP/μl×25×1.2%=0.6nmol 合成cDNA量=0.6nmol dNTP×330ng/nmol=198ng mRNA向cDNA转变率=198nm/1000ng×100%=19.8% 由于1000ng RNA中20%(5μl/25μl)用于掺入测定,而反应体积占总体积80%,因而实际第一链cDNA合成量为0.8×198ng=158ng。 4. 第二链产量计算 除需去除第一链掺入dNTP外,方法同第一链产量
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