两性霉素B 克隆与表达

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")两性霉素B 克隆与表达，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：两性霉素B 克隆与表达
规格：1mL
编号：BTN120681
产地：国产|进口
英文名：Amphotericin B Solution
本品为浓度为20mg/mL两性霉素B的水溶液。两性霉素B(二性霉素B；节丝霉素B；Fungizone)分子式：C47H73NO17，分子量：924.08，CAS号：1397-89-3，可溶性两性霉素B系来自链霉菌的多烯抗真菌类抗生素，它与真菌细胞膜的固醇类物质，特别是麦角固醇有亲和性，在膜上形成通道，使一些小分子流失。抗菌谱为真菌和酵母，多用于细胞培养。在日光下易被破坏失效。

储存条件：低温运输、-20℃避光保存，有效期6个月。

更多有关两性霉素B 克隆与表达的价格及使用说明等，请联系我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销*(代"售")以下产品：
2022-85-7 5-Fluorocytosine  5-*胞嘧啶
ARB10304 人巨噬细胞炎性蛋白1β(MIP-1β/CCL4)含量测试 Human macrophage inflammatory protein-1β,mip-1β ELISA KIT
BFD069 鸡禽流感抗体检测卡
CD111 超纯dNTP Mixture(2.5mM each)
1609-47-8 DEPC   焦碳酸二乙酯
ARB13112 小鼠骨胶原交联(Cr)酶标法分析 Mouse crosslaps,cr ELISA KIT
1,4-双(5-*基-2-恶唑)* Carboxypeptidase A 1806-34-4
ARB10053 人A组链球菌菌壁多糖抗体(ASP)Elisa定量检测 Human antibody to group a streptococcal polysaccharide,asp ELISA KIT
BL0964 正常人血清
ARB13783 豚鼠生长激素(GH)elisa检测说明书 Guinea pig growth hormone,gh ELISA KIT
ARB11194 人组织因子途径抑制物(TFPI)含量测试 Human tissue factor pathway inhibitor,tfpi ELISA KIT
ARB12769 小鼠p53(p53)酶标法分析 Mouse p53/tumor protein,p53/tp53 ELISA KIT
69-57-8 Penicillin G Sodium salt 青霉素G*盐
CBZ-D-*丙*酸 Cyclooctanone 2448-45-5
PY01-138  血粉蛋白胨  250克  
缩二脲 3-O-Methylglucose 108-19-0
肌酸酶 Econazole nitrate 37340-58-2
PY01-112  胃蛋白酶(1:12000)  100克  
ARB11152 人肿瘤特异性抗原(TSA)检测服务 Human tumor specific antigen,tsa ELISA KIT
BTN100409 6 nt随机引物 Hexamer
ZCXQ02 兔血清 500ml
F020213 山羊抗人IgM抗体 Goat Anti-Human IgM
两性霉素B 克隆与表达关键词：Amphotericin B Solution,1397-89-3,两性霉素B


·dTTP溶液，2.5mM
编号：BTN130913
英文名称：dTTP Solution，2.5mM
规格：2mL
dTTP分子式为C10H14N2O14P3Na3,分子量是548.1，消光系数为：9.6×103M-1×cm-1(pH7.0)。λmax为267nm。

储存条件：低温运输和-20℃保存、有效期一年。

·Tris盐*(代"酸")溶液(1M,pH7.5)(不含RNase)
编号：BTN60903
英文名称：RNase-Free Tris-HCl Solution
规格：250mL
dTTP分子式为C10H14N2O14P3Na3,分子量是548.1，消光系数为：9.6×103M-1×cm-1(pH7.0)。λmax为267nm。

储存条件：低温运输和-20℃保存、有效期一年。

·甲基化专一性PCR试剂盒
编号：BTN100923
英文名称：Methylation Specific PCR Kit
规格：50次
本产品是基于PCR的甲基化DNA检测试剂盒(即MSP试剂盒)。它由两个成分组成，一个是亚硫*(代"酸")*盐试剂盒，用于将DNA中所有没有甲基化的C转化成U，而甲基化的C不变。二是优化的PCR试剂盒，利用客户自备的专一性引物，根据PCR来检测甲基化位点的位置。

产品特点：
1．本产品是亚硫*(代"酸")盐修饰试剂盒和即用型PCR 3.0的整合，即开即用，非常方便。
2．柱式DNA回收方法极大提高亚硫*(代"酸")盐修饰后DNA的回收率。
3．优化的PCR mix，含有PCR所需要的所有成分，减少了操作误差。
4．PCR结束后可以直接上样电泳，非常方便。
5．用户需要自备MSP专一性引物。

试剂盒组成：

 

成分	规格
溶液A	5ml
溶液B成分一(干粉)	2.3g×5瓶
溶液B成分二(干粉)	110mg×5瓶
通用溶胶液	50mL×2
离心吸附柱	50套×2
通用洗柱液	100mL
DNA洗脱液	10mL
PCR MagicMix 3.0	1.5mL
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存(PCR MagicMix 3.0要低温运输，-20℃保存)，有效期一年。

自备试剂：超纯水、MSP引物、对照DNA模板和引物。
 注：严格的实验一般要求下列5种对照DNA模板和相应的引物对，用户可以根据自身实验的要求只做其中的部分。

对照名称	起始DNA	处理
未修饰未甲基化DNA对照	未甲基化DNA (无甲基化宿主菌或体外扩增而得)	未经过亚硫*(代"酸")*盐修饰
已修饰未甲基化DNA对照	未甲基化DNA(同上)	经过亚硫*(代"酸")*盐修饰
未修饰甲基化DNA对照	甲基化DNA (用甲基化酶修饰未甲基化DNA而得)	未经过亚硫*(代"酸")*盐修饰
已修饰甲基化DNA对照	甲基化DNA(同上)	经过亚硫*(代"酸")*盐修饰
未修饰样品DNA对照	样品DNA	未经过亚硫*(代"酸")*盐修饰

使用方法：

Ⅰ．亚硫*(代"酸")*盐修饰
一、准备试剂
1．配制溶液B成分一溶液：加5.0mL超纯水和27μl溶液A到装有溶液B成分一干粉的棕色塑料瓶中，轻柔摇晃至溶(尽量少的剧烈摇晃，约需要5分钟)，总体积约5.5mL。
2．配制溶液B成分二溶液：加10mL超纯水到装有溶液B成分二干粉的棕色塑料瓶中，轻柔摇晃混匀(尽量少的剧烈摇晃)。
3．配制溶液B工作液：将55μL溶液B成分二溶液加入到溶液B成分一溶液中，轻柔颠倒混匀即可使用。一瓶溶液B工作液可以用10次。
二、DNA变性处理
1．将5μL溶液A加入到45μL DNA溶液中并吹打混匀(总体积没有45μL需要用水补足到45μL，DNA总量在0.2-5μg之间，不能超过 5μg，一般使用2μg DNA即可)。 注意：DNA必须是线状的，长度最好在20-50 Kb左右。基因组DNA可以预先用酶切处理(酶的位点不得在研究的DNA序列之内)，也可以用机械打断法处理(得到的DNA一般在20-50 Kb左右)。
2．37℃放置15分钟使DNA充分变性。
3．立即在DNA溶液中加入500μl溶液B工作液，轻柔颠倒混匀。
4．55℃避光保温8-16小时。如果使用水浴或没有热盖的PCR仪器保温，最好加50-100μL石蜡油，避免水分蒸发。
 注意：必须避光保温。55℃处理8小时足以使95%的C变成U，保温时间过长会引起DNA的断裂。如果有的区域的C难以转化成U，可以改用两步式PCR处理(每55℃保温3小时后95℃变性处理5分钟，共5-10个循环)，效果会更佳。
5．冰浴10分钟。
6．加入1mL的通用溶胶液，颠倒混匀后取一半溶液上柱。单链DNA会结合在离心吸附柱上，亚硫*(代"酸")*盐等将穿透过柱。
7．12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。
8．取另一半溶液再上柱，12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。单链DNA会结合在离心吸附柱上，亚硫*(代"酸")*盐等将穿透过柱。
9．加入0.7mL通用洗柱液，12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。此步可以洗涤残留的亚硫*(代"酸")*盐。
10．干甩半分钟后，将离心吸附柱转移到一个新的离心管中，加入50μl新鲜配制的溶液A稀释液(5μl的溶液A原液与45μl的超纯水混合而得)，室温放置2分钟后离心半分钟。
11．将洗脱下来的DNA溶液放置在37℃保温15分钟。
12．加入0.7mL的通用溶胶液，混匀后上柱。
13．12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。单链DNA会结合在离心吸附柱上，杂质等将穿透过柱。
14．干甩半分钟后，将离心吸附柱转移到一个新的离心管中，加入50μl DNA洗脱液，室温放置2分钟后离心半分钟。
15．所得溶液即为亚硫*(代"酸")*盐修饰的DNA，可以用于下面的甲基化专一PCR。
 说明：此方法的回收率一般为50%，2μg DNA最后可以得到1μg的修饰后的DNA。由于修饰后的DNA呈长短不一的单链，EB染色效果很差，所以不能用灵敏度低的琼脂糖电泳-EB染色的方法检测，但可以用灵敏度更高的PAGE-银染方法检测。

Ⅱ．甲基化专一性PCR(以60μL的标准PCR反应体系为例)
1．在一干净的PCR管中，加入下列成分(冰上操作)：

成分	样品管	对照管
PCR MagicMix 3.0	30μl	30μl
亚硫*(代"酸")*盐修饰的DNA模板	100-500ng	无
对照DNA模板	无	100-500ng
自备MSP引物F	25pmol	无
自备MSP引物R	25pmol	无
对照模板专一性PCR引物F	无	25pmol
对照模板专一性PCR引物R	无	25pmol
补水到	60μl	60μl

 注：有5种对照DNA模板可以供用户根据自身需要选择，详见自备试剂栏。
2．将混合物混匀，放入PCR仪中进行热启动PCR，结束后取5-10μL PCR产品直接进行琼脂糖电泳。


两性霉素B 克隆与表达关键词：Amphotericin B Solution,1397-89-3,两性霉素B


·一站式Tricine-SDS-PAGE套装
编号：BTN81205
英文名称：One-Stop Tricine-SDS-PAGE Pack
规格：30次

·土壤微生物RNA提取试剂盒
编号：BTN90704
英文名称：Soil microbe RNA extraction kit
规格：50次
由于土壤中有机质含量丰富，尤其是其中的腐殖酸对 RT-PCR等后续反应有极大的抑制作用，所以从土壤微生物提取高纯度的RNA一直是十分棘手的问题。本试剂盒就是为解决相关问题而研发设计的。

试剂盒特点：
1. 操作简单快速，处理一个样品只需要约十几分钟。
2. 去污染效果好，RNA 纯度更高，平均 OD260/280一般都在 2.0左右。
3. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA 合成等实验。
4. 性价比高于进口的土壤 RNA提取产品。
5. 试剂无毒无害，环保。

试剂盒组成：

成分	A型
溶液A	50ml
溶液B	15ml
溶液C	25ml
溶液D	25ml
RNA溶解液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 称取 0.1-0.5 g的土壤，加入1mL溶液A，震荡器上剧烈震荡 5-10分钟。
 注意:一定要让管底的土壤震荡起来。注意：溶解溶液A沉淀。溶液A在 4℃ 放置后可能会产生沉淀，使用前必须放在 65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇 匀后再取用。
2. 稍微静置后将上清液转移至一个干净的1.5mL塑料离心管中。
3.在离心管中加入0.3mL的溶液B和0.2mL自备*仿，在振荡器上振荡 30秒混匀。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
4.室温 12000rpm离心 3～5分钟。
5. 将上清液(约0.6mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中，下层有机相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。最好留下 100μl上清液不取。
6.在上清液中加入0.5mL的溶液C和0.2mL的自备*仿，用手上下颠倒或振 荡器振荡 30秒混匀，此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
7.室温 12000rpm离心 3分钟，两相间将有白色膜状物(蛋白质)形成。
8. 将上清液(约1mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中,避免触及或吸取有机相及其上面的白色膜状物。
9.在上清液中加入0.5倍体积的溶液D，用手上下颠倒或振荡器振荡 30秒混匀，此时溶液呈白色浑浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
10. 13000-15000g室温离心 5-30分钟，小心移弃上清液，避免触及管底大量的白色 RNA沉淀。
11.在离心管中加入1mL 75%乙醇，振荡器上振荡混均 30秒。室温离心13000-15000g 1分钟，RNA 此时在管底形成细小沉淀。小心吸弃上清液，注意不要吸弃 RNA沉淀。
12. 重复第 11 步的75%乙醇清洗步骤一次。
13. 短暂快速离心数秒使管壁上残留液体沉到管底(约50μl)，用移液枪小心吸弃，注意不要吸弃沉淀。此步十分重要，因为残留的乙醇会影响后续反应。
14.室温短暂放置 2分钟，立即加入适量(一般为10-30μl)RNA 溶解液使 RNA沉淀溶解。注意:千万不要用真空离心法使 RNA沉淀过于干燥，否则 RNA 将变得十分难溶。RNA样品可以直接使用，也可以存放于-80℃长期保存。
15. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做 Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行 RNA电泳 ，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。
16. RNA产量产率测定：将5-10μl RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在 OD260的光吸收。通过光吸收可以得出 RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出 RNA的产量(浓度 X 体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
17. RNA 纯度测定：无污染的总 RNA的OD260/OD280一般在 1.8-2.1 之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响 RT-PCR等反应。

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