Oligo(dT)纤维素北京现货促销

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")Oligo(dT)纤维素北京现货促销，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：Oligo(dT)纤维素北京现货促销
产地：国产|进口
英文名：Oligo(dT) Cellulose
品牌：百奥莱博
编号：BTN131231
本产品是共价交联的Oligo(dT)纤维素亲和基质，可用于分离纯化带有poly(A)结构的真核生物mRNA，本产品结合能力大于400 A260 U/g。

储存条件：常温运输，4℃保存、有效期两年。

我公司的Oligo(dT)纤维素北京现货促销，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：

·Bsu DNA聚合酶，大片段
编号：BTN130616
英文名称：Bsu DNA Polymerase，Large Fragment
规格：200U
Bsu DNA聚合酶大片段保留了Bacillus subtilis DNA聚合酶I的5´→3´聚合酶活性，但是缺失了5´→3´外切酶结构域。大片段缺乏3´→5´外切酶活性。

产品用途：
1．DNA等温扩增；
2．引物延伸；
3．80℃ 20分钟即可失活；
4．建议反应温度不要超过70℃，不能用于热循环测序或PCR。

产品组成：

 

成分	规格
Bsu DNA聚合酶，大片段，5000U/mL	0.04ml
反应Buffer，10×	1.25ml
说明书	1份

活性单位定义：1单位指37℃条件下，30分钟内使10nmol的dNTP掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量。

储存Buffer：25mM Tris-HCl(pH7.4)，50mM NaCl，1mM DTT，0.1mM EDTA，50% Glycerol。

反应条件：1×Buffer[10mM Tris-HCl，50mM NaCl，10mM MgCl2，1mM DTT(pH7.9 @ 25℃)]。加入33μm dNTPs(不随酶提供)，37℃孵育。

灭活：75℃ 20分钟。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

备注：
1．由于缺乏3´→5´核酸外切酶活性，Bsu DNA聚合酶大片段不能切除3´未配对的突出末端，因而不适用于生成平滑末端；
2．25℃时，Bsu DNA聚合酶，大片段保留50%的活性，是同温度下Klenow片段(3´→5´exo–)的两倍。


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·即用型易错PCR试剂盒
编号：BTN101005
英文名称：Instant Error-Prone PCR Kit
规格：100次
本产品就是专门为广大的研究工作者进行易错PCR而开发。易错PCR是利用Taq DNA多聚酶不具有3´→5´校对功能的特性，在一定条件下(如不同的dNTP浓度、Mg浓度和MnCl2存在)能够按较高的机率引入随机引入突变。如果有适当的选择方法，则可从构建的突变库选出所需突变体。

产品特点：
1. 即开即用，十分简单方便，尤其在生物制药和酶学研究领域显示出了它的优越性。
2. 配方经过精心优化，突变率稳定，突变没有趋向性。易错PCR的突变率为0.66%(±0.13%)，详见使用手册疑难解答。
3. 比体内基因突变更快捷简单，但如果在PCR引物中设计位点，则可使产物克隆到表达载体，也可以用于体内蛋白活性的筛选。
4.可用于连续易错PCR，只需把上一次易错PCR的产物用作下一次易错PCR的模板即可，使每一次获得的小突变累积而产生重要的有益突变。
5. 只适用于扩增1kb以下的产物，对于1kb以上的产物，建议分段扩增。

试剂盒组成：

成分	规格
Taq DNA聚合酶(5U/μL)	100μl
易错PCR Mix，10×	300μl
易错PCR专用dNTP，10×	300μl
MnCl2，5mM	300μl
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期为一年。

使用方法：
1.以30μL的标准PCR反应体系为例，如果反应体系不是30μL，各成分需要等按比例增加或减少。在一干净的PCR管中，加入下列成分：

易错PCR Mix,10×	3μl
易错PCR 专用dNTP，10×	3μl
MnCl2，5mM	3μl
自备DNA模板(10ng/μL)	1μl
PCR引物(自备，10μm each)	10pmol each
Taq DNA聚合酶(5U/μL)	1-5U
补水到	30μl

2. 按已经优化的PCR条件进行一定循环数的PCR(循环数与突变率的关系见下表)，然后取5μL电泳检查。如果没有优化的PCR条件，一般可以先尝试下面的PCR条件：

PCR前变性	94℃ 3分钟
易错PCR	94℃ 1分钟	循环30次(见注)
	45℃ 1分钟
	72℃ 1分钟

注：易错PCR一般不需要热启动，也不需要在PCR结束后做延伸处理。

循环次数与突变几率的关系
易错PCR循环次数决定每个核苷酸位置的突变几率，进而决定每个PCR产物可能得突变位点数，所以所需循环数由客户根据需要改动。

PCR循环数	每个碱基突变几率	PCR终产物中的突变位点数
		100bp	200bp	400bp	800bp	1600bp
5	0.0033	0.00	0.66	1.3	2.6	5.3
10	0.0066	0.66	1.3	2.6	5.3	11
20	0.013	1.3	2.6	5.3	11	21
30	0.020	2.0	4.0	7.9	16	32
50	0.033	3.3	6.6	13	26	53

3.电泳检测是否得到预计长度的PCR产物。

疑难解答：
Q：易错PCR与定点突变PCR有什么区别？
A：定点突变是指通过聚合酶链式反应(PCR)等方法向目的DNA片段(可以是基因组，也可以是质粒)中引入所需变化(通常是表征有利方向的变化)，包括碱基的添加、删除、点突变等。它需要预先知道靶基因的序列。易错PCR是一种随机突变，它不需要预先知道靶基因的序列(引物结合部分除外)，但需要后续的筛选方法筛选自己所需要的突变。
Q：易错PCR的错误率是多少？
A：易错PCR的突变率为0.66%(±0.13%)，对500bp的PCR产物，相当于有4%的PCR片段为野生型，12%的含一个突变，20%的含两个突变，22%的含三个突变，18%的含四个突变，12%的含五个突变，12%的含六个或更多突变。
Q：如果需要每个核苷酸有高于0.66%的突变率，如何办？
A：可以使用连续多次易错PCR来提高突变率。但最好先用胶纯化回收PCR片段,再用于下一轮PCR。此外不能用少于千分之一的第一次PCR产物作为第二轮易错PCR的模板，否则多样性将受到影响。第三轮易错PCR最好使用所有第二轮的PCR产物作为模板，但需要在10mL体系中完成(可以分成很多100μL体系进行)。


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