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北京现货无缝克隆试剂盒销售

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  • ¥110 - 2380
  • 百奥莱博
  • 北京
  • BTN160680-SBD
  • 2025年07月16日
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      低温运输

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    • 英文名

      Seamless Cloning and Assembly Kit

    • 库存

      760

    • 供应商

      北京百奥莱博科技有限公司

    特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

    百奥莱博专业生产供应北京现货无缝克隆试剂盒销*(代"售"),我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂,价格优惠,欢迎广大科研工作者垂询订购。

    北京百奥莱博科技有限公司专业生产供应北京现货无缝克隆试剂盒销*(代"售"),产品信息:

    类别:克隆与表达

    英文名:Seamless Cloning and Assembly Kit

    产品名 产品编号 包装规格
    无缝克隆试剂盒 BTN160680 25次

    规格:25次

    编号:BTN160680

    品牌:百奥莱博

    英文名:Seamless Cloning and Assembly Kit

    产地:国产|进口

    无缝克隆是一种简单、快速、高效的DNA 定向克隆技术,该技术突破传统,不依赖内切酶和连接酶,不受限制性内切酶酶切位点的限制,利用同源重组的原理,可将任何DNA片段克隆至任何载体的任何位点。反应及转化时间短,阳性率达95%以上。

     

    产品特点:

    1. 简单、高效地定向克隆DNA片段。

    2.可同时定向克隆两个或多个DNA片段。

    3. 不依赖内切酶和连接酶,不受限制性内切酶酶切位点的限制。

    4. 省时,反应时间加转化时间短至20分钟。

    5. PCR产物(仅有目的条带、无非特异条带和引物二聚体)可直接进行重组反应,无需纯化。

     

    试剂盒组成:

     

    成分 规格
    2×Seamless Mix 125μl
    阳性对照DNA片段I 10μl
    阳性对照DNA片段II 10μl
    阳性对照线性化载体 10μl
    超纯水 1ml
    说明书 1份

     

    储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。

     

    使用方法:

     

    1. 线性化载体的制备:

     可通过单酶切、双酶切或PCR扩增的方法来制备。(如果线性化不彻底,将会导致阴性克隆的产生,推荐使用双酶切或PCR扩增的方法。)

    2. DNA片段的制备:

     1)DNA片段可通过PCR扩增或酶切的方法制备,PCR扩增片段无需纯化即可用于重组反应。

     2)PCR扩增法引物设计原则:

      A.引物的3´端必须包含18-50个能与模板DNA 结合的碱基序列,以便PCR扩增出目的DNA片段。

      B.引物的5´端必须包含15-80个与线性化载体末端同源的碱基序列,以便PCR扩增片段能与线性化载体进行重组反应。

    3. 重组反应:

     1)按照如下体系操作:

     2)50℃反应15分钟,然后将离心管放置于冰上。如当天不进行转化实验,请将连接产物放-20℃保存。

     注:线性化载体建议使用20-60 ng,DNA片段按照与线性化载体摩尔比3:1使用。

    4.转化:

     1)取5μl连接液至50-100μl 刚刚融化的感受态细胞中,轻轻混匀,冰浴2-30分钟。

     2)42℃水浴热激30秒。

     3)立即放置于冰上静置2分钟。

     4)加入300-500μl 无菌SOC或LB培养基(不含抗生素),37℃,200-250rpm 振荡培养60分钟。

     5)吸取 200μl菌液涂板,为得到更多克隆,可先3000 g离心2分钟,弃掉部分上清,用移液器轻吹菌体,至充分悬浮,取全部菌液涂板,然后37℃培养过夜(12-16小时)。

    5. 用菌落PCR、直接测序或其他方法鉴定重组子。

    6. 阳性对照反应(可选)

     将本试剂盒提供的阳性对照DNA片段和线性化载体按如下体系操作:

     

    阳性对照DNA片段I(600bp,20 ng/μL)

     

    或阳性对照DNA片段I(900bp,30ng/μL)

    1μl
    阳性对照线性化载体(2.8kb,30ng/μL) 1μl
    2×Seamless Mix 5μl
    超纯水 3μl

     50℃反应15分钟,然后按照步骤4转化涂板后用菌落PCR、直接测序或其他方法鉴定阳性重组子。

    北京现货无缝克隆试剂盒销*(代"售")专业优质供应商:北京百奥莱博科技有限公司

    关键词:BTN160680,无缝克隆试剂盒,Seamless Cloning and Assembly Kit

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