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- 详细信息
- 技术资料
- 保存条件:
低温运输
- 保质期:
长期
- 英文名:
Seamless Cloning and Assembly Kit
- 库存:
760
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产供应北京现货无缝克隆试剂盒销*(代"售"),我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂,价格优惠,欢迎广大科研工作者垂询订购。
北京百奥莱博科技有限公司专业生产供应北京现货无缝克隆试剂盒销*(代"售"),产品信息:
类别:克隆与表达
英文名:Seamless Cloning and Assembly Kit
| 产品名 | 产品编号 | 包装规格 |
| 无缝克隆试剂盒 | BTN160680 | 25次 |
规格:25次
编号:BTN160680
品牌:百奥莱博
英文名:Seamless Cloning and Assembly Kit
产地:国产|进口
无缝克隆是一种简单、快速、高效的DNA 定向克隆技术,该技术突破传统,不依赖内切酶和连接酶,不受限制性内切酶酶切位点的限制,利用同源重组的原理,可将任何DNA片段克隆至任何载体的任何位点。反应及转化时间短,阳性率达95%以上。
产品特点:
1. 简单、高效地定向克隆DNA片段。
2.可同时定向克隆两个或多个DNA片段。
3. 不依赖内切酶和连接酶,不受限制性内切酶酶切位点的限制。
4. 省时,反应时间加转化时间短至20分钟。
5. PCR产物(仅有目的条带、无非特异条带和引物二聚体)可直接进行重组反应,无需纯化。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 2×Seamless Mix | 125μl |
| 阳性对照DNA片段I | 10μl |
| 阳性对照DNA片段II | 10μl |
| 阳性对照线性化载体 | 10μl |
| 超纯水 | 1ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
使用方法:
1. 线性化载体的制备:
可通过单酶切、双酶切或PCR扩增的方法来制备。(如果线性化不彻底,将会导致阴性克隆的产生,推荐使用双酶切或PCR扩增的方法。)
2. DNA片段的制备:
1)DNA片段可通过PCR扩增或酶切的方法制备,PCR扩增片段无需纯化即可用于重组反应。
2)PCR扩增法引物设计原则:
A.引物的3´端必须包含18-50个能与模板DNA 结合的碱基序列,以便PCR扩增出目的DNA片段。
B.引物的5´端必须包含15-80个与线性化载体末端同源的碱基序列,以便PCR扩增片段能与线性化载体进行重组反应。
3. 重组反应:
1)按照如下体系操作:
2)50℃反应15分钟,然后将离心管放置于冰上。如当天不进行转化实验,请将连接产物放-20℃保存。
注:线性化载体建议使用20-60 ng,DNA片段按照与线性化载体摩尔比3:1使用。
4.转化:
1)取5μl连接液至50-100μl 刚刚融化的感受态细胞中,轻轻混匀,冰浴2-30分钟。
2)42℃水浴热激30秒。
3)立即放置于冰上静置2分钟。
4)加入300-500μl 无菌SOC或LB培养基(不含抗生素),37℃,200-250rpm 振荡培养60分钟。
5)吸取 200μl菌液涂板,为得到更多克隆,可先3000 g离心2分钟,弃掉部分上清,用移液器轻吹菌体,至充分悬浮,取全部菌液涂板,然后37℃培养过夜(12-16小时)。
5. 用菌落PCR、直接测序或其他方法鉴定重组子。
6. 阳性对照反应(可选)
将本试剂盒提供的阳性对照DNA片段和线性化载体按如下体系操作:
阳性对照DNA片段I(600bp,20 ng/μL)
或阳性对照DNA片段I(900bp,30ng/μL)
| 1μl | |
| 阳性对照线性化载体(2.8kb,30ng/μL) | 1μl |
| 2×Seamless Mix | 5μl |
| 超纯水 | 3μl |
50℃反应15分钟,然后按照步骤4转化涂板后用菌落PCR、直接测序或其他方法鉴定阳性重组子。
北京现货无缝克隆试剂盒销*(代"售")专业优质供应商:北京百奥莱博科技有限公司
关键词:BTN160680,无缝克隆试剂盒,Seamless Cloning and Assembly Kit
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| 编号 | 类别 | 名称 |
| BTN100307B | DNA纯化 | 酸洗玻璃珠(200μm) |
| BTN80805 | DNA纯化 | 柱式毛发DNA提取试剂盒 |
| BTN90607 | DNA纯化 | 柱式BAC载体DNA提取试剂盒 |
| BTN140384 | 克隆与表达 | 农杆菌GV3101化学感受态细胞 |
| BTN130905 | 探针标记及检测 | 超级杂交液(芯片) |
| BTN80802A | DNA纯化 | 非冻型拭子DNA保存液 |
| BTN130846 | RNA纯化 | 白色念球菌RNA提取试剂盒 |
| BTN81212C | 蛋白质研究 | 一站式蛋白质非变性PAGE电泳套装(低pH) |
| BTN100908B | 蛋白质研究 | 一站式长效期SDS-PAGE套装B(2-30KD) |
| BTN120685 | 克隆与表达 | 先锋霉素溶液 |
| BTN120406 | DNA纯化 | 柱式植物叶绿体DNA提取试剂盒 |
| BTN131108 | 蛋白质研究 | ONPG干粉 |
| BTN130637 | 工具酶 | Tma核酸内切酶III |
| BTN120643 | 探针标记及检测 | 硫*(代"酸")葡聚糖 |
| BTN131196 | 工具酶 | Therminator II DNA聚合酶 |
| BTN3670 | DNA纯化 | 动物DNA提取试剂盒 |
| BTN80810 | 蛋白质研究 | 一站式SDS-PAGE蛋白电泳套装 |
| BTN130558 | 克隆与表达 | 大肠杆菌Rosetta(DE3)plysS感受态细胞 |
| BTN130530 | 蛋白质研究 | His标签蛋白专用蛋白酶抑制剂 |
| BTN80206 | 核酸扩增(PCR) | 两管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq) |
| BTN140576 | 克隆与表达 | 大肠杆菌DH10Bac化学感受态细胞 |
| BTN60705 | DNA纯化 | 一管式植物DNA提取试剂盒 |
| BTN100212 | 基因结构和功能 | 一管式点突变试剂盒 |
| BTN100808 | 核酸电泳和回收 | *化乙锭干粉(EB干粉) |
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