北京现货柱式细菌DNA提取试剂盒(含)促销

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")北京现货柱式细菌DNA提取试剂盒(含)促销，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京现货柱式细菌DNA提取试剂盒(含)促销
编号：BTN60802B
规格：50次
产地：国产|进口
英文名：Bacteria DNA column extraction kit(with lysozyme)
本试剂盒可以用于绝大多数革氏阳性和阴性细菌基因组DNA的快速提取。

试剂盒特点：
1. 操作简单，整个过程不到20分钟。
2.产率一般在5-20μg/mL过液培养的饱和菌液(108-109个细胞)。
3. OD260/280一般在1.8以上，可直接用于PCR、酶切、杂交等实验。
4. DNA片段长度一般在40-50 Kb左右。
5. 每次提取可以处理0.1-1.5mL的细菌，也可以使用菌落。
6. 价廉物美，与国外同类产品相比质量相当，但价格便宜。
7. 安全无毒，本试剂盒对人体无害，无腐蚀性和刺激性气味。
8. 本产品分A型(无溶菌酶，适用于革氏阴性细菌)和B型(含溶菌酶，适用于革氏阳性细菌)。

试剂盒组成：

 

成分	A型	B型
溶菌酶干粉	无	600mg
溶液A	15ml	15ml
溶液B	7.5ml	7.5ml
溶液C	30ml	30ml
离心吸附柱	50套	50套
通用洗柱液	50ml	50ml
DNA洗脱液2.0	10ml	10ml
说明书	1份	1份

储存条件：常温运输及保存(溶菌酶需要-20℃保存)，有效期一年。

使用方法：
注意：溶液A和溶液B容易产生沉淀，溶液B十分粘稠，均需要放置在65℃预热使沉淀溶解、粘稠度降低，用前充分摇匀。

一: 对革氏阴性细菌样品，只需用A型
1. 将0.1-1.5mL过夜培养的菌液转移到1.5mL离心管中，12000rpm室温离心1min沉淀细菌，弃上清。
2. 加入300μL预热的溶液A到细菌沉淀中，充分吹打均匀。
3. 再加入150μL预热的溶液B到离心管中，颠倒数次混匀。此时溶液中可能有白色丝状悬浮物产生。由于溶液B比较粘稠，可以采取称量方法取用，150μL约等于150-160mg。也可以将1mL枪头剪去一截再吸取。
4. 65℃放置3～5分钟。如果室温放置，DNA产量会降低10-20%。
5. 加入200μl自备*仿，震荡混匀10-30秒，此时溶液将呈乳白色。
6. 12000rpm室温离心2分钟。此时上清液将变得透明，中间层有白膜。小心转移上清液到一个新的1.5mL塑料离心管中，避免触及中间层的白膜。
7. 加入1.5倍体积(约0.7mL)的溶液C，颠倒混匀后全部转移到离心吸附柱中，室温放置至少2分钟。
8. 12000rpm室温离心1分钟，DNA将吸附在离心吸附柱的膜上，倒弃收集管中的穿透液。
9. 将0.5mL通用洗柱液加入离心柱中，12000rpm室温离心1分钟，弃穿透液。
10. 重复上步操作一次。
11. 空甩半分钟去除残留液体,将离心吸附柱转移到新的1.5mL离心管中。
12. 加50-100μL通用洗脱液，室温放置3～5分钟。
13. 12000rpm室温离心1分钟即得DNA溶液。
14. 由于本产品使用的离心吸附柱吸附DNA的能力较强，可以重复上步操作一次以便得到更多的DNA。
15. 直接取5-10μL电泳检测DNA，其余放冰箱备用。
二: 对革氏阳性细菌样品，需用B型(含溶菌酶)
1. 将0.1-1.5mL过夜培养的革氏阳性细菌12000rpm室温离心1分钟后，重悬于0.6mL溶菌液中(溶菌液配制:30mL无菌水+600mg溶菌酶，配制后最好分装成小管并放-20℃长期保存，每次只用一小管)，颠倒混匀5-10次后放37℃保温至少30分钟(有的革氏阳性菌种可能需更长时间，自己摸索)。
2. 12000rpm室温离心10分钟，小心弃上清。
3.后续处理接上面的革氏阴性细菌提取步骤中的第2步。
三:其他注意事项
1.可以直接使用细菌菌落提取DNA，操作时直接将细菌菌落挑入到溶液A中，后续操作同上。
2.从单个菌落中提取到的DNA较少，所以只用30μL通用洗脱液洗脱。

使用效果：

图注:用本产品提取1.0mL过夜培养的E.coli Tg1细菌，DNA最后溶于100μL TE中，取20μL上样。M表示全长的λDNA,其余均为提取的样品DNA。

关于北京现货柱式细菌DNA提取试剂盒(含)促销的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·AMV逆转录酶
编号：BTN90502
英文名称：AMV Reverse Transcriptase
规格：200U
AMV逆转录酶分离自禽类成髓细胞瘤病毒(AMV)，其方法由Houts等人的方法改进而来。分离得到的酶是分子量为157KD的αβ全酶。本酶经高度纯化，完全无核酸酶污染。本酶可用于cDNA合成，也可用于RNA和DNA的双脱氧测序。AMV逆转录酶以总RNA或polyA+ RNA为模板，具有以RNA为模板的DNA聚合酶活性，DNA为模板的DNA聚合酶活性和RNase H酶活性，最适反应温度在42-55℃，最高可达60℃，如果使用焦磷酸*，最适温度为37-41℃。按照标准使用方法可以得到长至10-12 kb cDNA。本AMV逆转录酶比普通AMV逆转录酶和MMLV逆转录酶能耐受更高的温度和合成更长的cDNA。

产品特点：
1．高灵敏度,可以1ng的总RNA进行cDNA合成。
2．反应温度可升高到60℃，可有效打开RNA二级结构，适用于二级结构复杂的RNA模板。
3．可合成长至10-12kb的cDNA。
4．可用于first strand cDNA合成、RT-PCR、RNA测序和双脱氧法DNA测序、引物延伸和DNA片段的3´-末端标记。
5．本酶具有内源性的RNase H活性，所以最好不要用于cDNA文库的构建。

产品组成：

成分	规格
AMV 逆转录酶(10U/μL)	20μl
5×AMV Buffer	200μl
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：以poly(rA)为模板，以oligo(dT)12-18 为引物，在37℃温度下，在10分钟将1nmol的dTMP掺入入到多核苷酸中所需酶量为一个单位。

使用方法：(合成1st-strand cDNA)
1．按下表配制RT反应体系:

加入物	加入量
总RNA 或poly(A)mRNA 或专一的RNA	500-2000ng 50-500ng 0.05pg-500ng
注：RNA样品不能有基因组DNA污染。
Oligo(dT)18(0.5ug/μL) 或随机引物(0.2ug/μL) 或RNA模板专一性引物	1μL 1μL 15-20pmol
注：随机引物于RNA模板的比例跟最后得到的cDNA的平均长度成反比
RNase-free水	补水到11μL

2．70℃保温5分钟后立即冰浴。
3．严格按下表顺序加入各成分：

5×AMV Buffer(本产品提供)	5μL
RNase Inhibitor(40U/μL,自备)	1μL
焦磷酸* 40mM(预热到42℃)	2.5μL
dNTP(10mM each,自备)	2.5μL
AMV逆转录酶	1-3μL(=10-30U)

4．补水使反应终体积为25μL。
5．42℃保温60分钟(对Oligo dT引物或模板专一引物)或37℃保温60分钟(对随机引物)。如果不使用焦磷酸*，反应温度可以提高到42-55℃，最高可达60℃。
6．70℃保温10分钟以终止反应，放置在冰上待用。合成的cDNA可以直接作为PCR模板使用，不需要纯化。50μL Taq DNA聚合酶催化的PCR体系中最多可以使用25μL的RT产物，一般使用10μL AMV催化的RT产物即可。


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·昆虫细胞裂解液
编号：BTN130889
英文名称：Insect cell lysate
规格：50mL

·Denhardt溶液(同位素探针)
编号：BTN91104A
英文名称：Denhardt Solution
规格：250mL
本产品是最经典的、用于核酸膜杂交时降低膜对标记探针的非特异结合的试剂，早在Southern杂交出现前10年由Denhardt发明，该产品可用与Southern(含单拷贝基因)、Northern、非同位素杂交(B型规格)，与硝酸纤维素膜、尼龙膜等各种常用的核酸杂交介质兼容。A和B分别适用于同位素和非同位素探针。

储存条件：低温运输、-20℃保存、有效期一年。

·动物RNA提取试剂盒(柱式Trizol)
编号：BTN71201
英文名称：Animal RNA column extraction kit(Trizol)
规格：50次
本试剂盒是动物总RNA快速提取试剂动物RNA提取试剂盒(BTN3070)的柱式升级产品，可用于从各种动物组织(包括白细胞)快速提取总RNA。

试剂盒特点：
1. 操作更加简单快速，整个过程只需要不到十分钟(对一个样品而言)。
2. RNA 纯度更高，OD260/OD280一般在2.0左右。
3.一般不含用RT-PCR可以检测到的基因组DNA污染。
4.适用于培养细胞、大部分动物组织和部分植物组织。
5. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA 合成等实验。
6. 性价比高于进口的柱式RNA提取产品。

试剂盒组成：

成分	50T
溶液A	50ml
溶液B	25ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
RNA 洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
下面的操作步骤是针对在1.5mL塑料离心管中进行的微量提取的，如果处理样品量大，请按比例增加各成份的用量并使用大的离心管和离心机。

1. 根据组织细胞类型的不同分为下面及种情况使用：
a)对贴壁细胞：吸尽培养液，在每10 平方厘米细胞中加入1mL溶液A，用枪轻柔吹打数次，确保细胞全部裂解。
b)对悬浮细胞：离心收集细胞，吸尽液体，在每1-5×106 悬浮细胞中加入1mL溶液A，用枪轻柔吹打数次，确保细胞全部裂解。如果是fibroblasts或carcinoma cell，1mL溶液A的细胞使用量不要超过1×106个细胞。
c)对新鲜组织：先将剪切成小块新鲜组织或液氮保存的组织放入10mL或15mL塑料离心管中，每50-100mg 组织加1mL溶液A，用匀浆器匀浆30秒左右。对肝、脾、胰、肾等细胞分裂十分旺盛的组织(细胞中含大量正在复制的DNA)，建议组织的使用量不要超过50mg/ mL溶液A，否则十分容易产生DNA污染。
d)对RNAhold 保存组织：先用纸吸去RNAhold液体后再剪切成小块，其余操作同新鲜组织的处理。
2. 将裂解物转移至一个干净的1.5mL塑料离心管中，然后加入0.2倍体积的自备*仿(1mL溶液A需0.2mL *仿)，振荡器上充分振荡混均30秒。
3. 12000rpm室温离心3～5分钟。
4. 将上清液(约0.6-0.8mL的无色透明水相，有时水相比重大时，水相在下层，有机相即蓝相在上层，吸取时应吸取透明水相)转移到一个干净的1.5mL塑料离心管中。注意：离心后下层有机相和中间层含有DNA和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和DNA污染。为保险起见，可以留下100μl上清液不取。同时吸取上清时最好缓慢进行，否则容易吸出交界面的不可见的丝状DNA。
5. 加入等体积的溶液B，充分颠倒混匀。
6. 将一半的溶液转移到离心吸附柱中，12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。
7. 将剩下的一半溶液转移到同一离心吸附柱中，12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。
8. 加0.7mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。一次洗涤一般足够去除杂质。
9. 加0.3mL 通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。此步可以省略。
10.室温12000 rmp离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响RNA的使用。
11. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 收集管中，加入50-100μL RNA 洗脱液。
12.室温12000 rmp离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
13. RNA的电泳检测：本试剂盒提取的RNA 最好用甲醛变性胶电泳，如果在非变性的普通琼脂糖胶(in TAE或TBE buffer)上电泳，一定要使用RNA 专用上样液RNAload(操作详见RNAload 使用手册)，千万不要使用常用的DNA上样液，因为DNA上样液没有经过去RNase处理，也不能将RNA变性，得到的带型将十分杂乱。
14. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。
15. RNA产量产率测定：将5-10μl RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度×体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
16. RNA 纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1 之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。

疑难解答：
Q：上样孔里的红色荧光物一定是DNA污染吗？
A：不是。用TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳RNA时容易产生此现象，我们初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA通过碱基互补或通过硼*(代"酸")络合(如果使用TBE作电泳液的话)形成的复合物，加RNase处理后，这些红色荧光物(RNA)一般会消失。为避免此现象，建议最好使用甲醛变性胶电泳和RNA 专用上样液(如RNAload)。
Q：如何确认和去处除污染的基因组DNA？
A：如果怀疑有DNA污染，可以用RNase处理RNA样品，然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组DNA污染。进一步确认可以使用PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用百奥莱博的非酶的DNA去除剂DNA Scavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一般都有残留的RNase污染，所以必须严格按照厂家提供的使用说明书进行操作。


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CYB161008 兔IgG(冻干粉)
N,N,N",N"-四甲基-O-(N-琥珀酸亚胺基)脲六*磷酸盐 DEAE Sepharose FF 265651-18-1
9001-69-0 L-乳酸脱*酶
次水杨酸铋 BHT 14882-18-9
Taq酶 Sodium molybdate dihydrate 9012-90-2
碘化银 Pluronic F-68 7783-96-2
ARB11947 大鼠I型前胶原C末端肽(CICP)elisa检测说明书 Rat cross-linked c-teloPeptides of type i collagen,cicp ELISA KIT
ARB10368 人正常T细胞表达和分泌因子(RANTES/CCL5)含量测试 Human regulated on activation in normal t-cell expressed and secreted,rantes ELISA KIT
SJ0694 D15000
ARB13322 山羊催乳素(PRL)含量检测 
BL1224 GoldViewⅡ型核酸染色剂(5000×)
F030438 胶体金标记山羊抗人IgM抗体 Polyclonal Goat Anti-Human IgG FC*GOLD
BL0322 弗氏不完全佐剂 Freund "s Adjuvant Incomplete
F030307 胶体金标记兔抗卵清蛋白抗体 Rabbit Anti-OVA*GOLD

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