AFLP试剂盒(EcoRI-MseI)优惠促销

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博供应的AFLP试剂盒(EcoRI-MseI)优惠促销用于生化科学研究，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多AFLP试剂盒(EcoRI-MseI)等基因结构和功能产品请联系我司咨询订购。

名称：AFLP试剂盒(EcoRI-MseI)优惠促销
编号：BTN100903
产地：国产|进口
规格：1600次
英文名：AFLP Kit(EcoRI-MseI)
本产品在传统AFLP-PCR的基础上经过精心优化而开发。AFLP(amplified fragment length polymorphism)原理是一种结合RFLP和PCR技术特点的、迄今为止最有效分子标记分型技术，其原理如下：


产品特点：
1．一站式，足够50次酶切-连接反应、50次预扩反应和1600次AFLP PCR(PCR按30μL体系计算)，但不包括DNA 纯化和带型分析试剂(如PAGE电泳试剂和银染试剂)。
2．本系列产品提供EcoRI-MseI 组合，适用于GC含量在50%以上的基因组。对GC含量在50%以下的基因组，需从本公司采购AFLP(EcoRI-TaqI)组合。
3．各种参数都经过优化，一次PCR所得AFLP片段数一般在10-100之间，可重复性好，误差小于0.6%。
4．本产品适用于基因组在500 Mb-6000Mb的材料(如动物和植物)，对于基因组在50-500Mb的材料(如细菌和真菌)或50Mb以下的材料(如质粒，cosmid，BAC，YAC和PAC等)，需要分别另购专门的+1型预扩引物混合液和+3型EcoRI引物(8 种)AFLP引物对。

试剂盒组成：

 

成分	规格
酶切-连接Buffer，10×	100μl
EcoRI-MseI酶混合液	100μl
EcoRI-MseI 接头混合物	1ml
T4 DNA连接酶(1U/μL)	50μl
+0型预扩引物混合液	750μl
PCR Mix 3.0	9ml×3
对照DNA(50ng/μL)	20μl
+2型EcoRI引物(8条)	1ml每种
+3型MseI引物(8条)	1ml每种
TE溶液，pH8.0	10ml
超纯水	10ml
说明书	1份

+2型EcoRI引物和+3型MseI引物最后碱基的序列

引物名称	8条引物3´最后碱基
+2型EcoRI引物	-AA,-AT,-AG,-AC,-TA,-TT,-TG,-TC
+3型MseI引物	-CAA,-CAC,-CAG,-CAT,-CTA,-CTC,-CTG,-CTT

储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期一年。

自备试剂：Southern级DNA纯化试剂，尿素-PAGE电泳套装，银染试剂盒。

使用方法：

一、DNA提取(本试剂盒不提供相关试剂)
用户需要自备50-500ng Southern级别的基因组DNA，用前最好预实验以确保DNA能够被EcoRI和MseI内切酶彻底切开。

二、限制性酶切和接头连接反应(本试剂盒足够50次本反应)
1．在0.2mL离心管中加入设置20μL的限制性内切酶酶切体系：

成分	用量
酶切-连接Buffer，10×	2μl
样品DNA	50ng(对小基因组材料) 500ng(对大基因组材料) 如果用对照，则用5μL
EcoR I-Mse I酶混合液	2μl
超纯水	加水到20μl

2．轻柔混匀并短暂离心后，37℃保温2小时酶切(若PCR 仪器不带热盖，则必须加50μL自备石蜡油，否则水分会蒸发影响反应。下同)，70℃保温15分钟灭活内切酶。
3．在上述酶反应体系中加入20μl EcoRI-MseI 接头混合物和1μl T4 DNA连接酶，轻柔混匀并短暂离心后，20℃保温2小时让接头跟DNA片段相连。
4．在一个离心管中加入10μl上步得到的连接反应液和90μL TE缓冲液，pH8，充分混匀，得到酶切-连接反应10倍稀释液，未用完的酶切-连接反应原液(30μL)可放-20℃保存。

三、预扩增(本试剂盒足够50次本反应)
5．在0.2mL离心管中设置30μl的PCR 体系：

成分	体积
酶切-连接反应液10倍稀释液	5μl
+0型预扩引物混合液	10μl
PCR Mix 3.0	15μl

6．离心数秒，按下列参数进行PCR预扩增：

	温度	时间
PCR(20次)	94℃	30s
	56℃	60s
	72℃	60s

7．可以取10μl PCR产物在1.5%琼脂糖胶上电泳检测，产物为100-1500bp 模糊条带。
8．将剩下的预扩反应液用TE 稀释50倍，直接用于下步反应或放-20℃保存待用。

四、选择性PCR扩增(本试剂盒足够至少1600次本反应)
9．在0.2mL PCR 管中，加入下列成分(如果用户已经知道哪个一种或几种引物组合适合自己的材料，则直接使用；如果不知道，则需要预先测试所有64 种组合，设置64个PCR反应)，下面只是一种组合：

成分	体积
预扩反应液50倍稀释液	5μl
+2型EcoR I引物之一(八种之一)	5μl
+3型Mse I引物之一(八种之一)	5μl
PCR Mix 3.0	15μl

10．轻柔混匀后离心数秒，按下列参数进行PCR：

	温度	时间
PCR(13次)	94℃	30s
	65℃	30s(每次循环递减0.7℃)
	72℃	60s
PCR(13次)	94℃	30s
	55℃	30s
	72℃	60s
延伸	72℃	5min

五、尿素-PAGE电泳和银染(需另购试剂并按相关说明书进行)

更多有关AFLP试剂盒(EcoRI-MseI)优惠促销的价格及使用说明等，请联系我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销*(代"售")以下产品：
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BL0482 NP-40 LYSIS BUFFER 裂解液
4-**甲*(代"酸") Penicillin G Na salt 74-11-3
PY02-271  麦芽糖发酵管培养基  250克  
BL1337 dNTPs Mix(25mM each)
2′-脱氧尿苷-5′-三磷酸三*盐 2iP Riboside 102814-08-4
对*二甲*(代"酸")单甲酯 Calcium alpha-ketovaline 1679-64-7
F040313 猴IgG抗原 Monkey IgG
1064-48-8 NAPHTHOL BLUE BLACK ELECTROPHORESIS  *基黑10B
BTN131201 Protein A+G琼脂糖 Protein A+G Agarose
ARB11214 人细胞纤维连接蛋白(cFn)elisa检测 Human cellular fibronectin,cfn ELISA KIT
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BL0815 HRP标记羊抗猪IgG抗体
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BL1155 质粒大量提取试剂盒
002009 草酸*抗凝马血 100ml|500ml
TF0101 GenFectinTM基因转染试剂
ZCQX02 兔全血 500ml
F030623 FITC标记兔抗猴IgG抗体 Rabbit Anti-monkey IgG*FITC
13718-26-8 偏钒酸*
BL1329 通用引物 Random
ARB12578 大鼠高密度脂蛋白(HDL)尿液中含量检测 Rat high density lipoprotein,hdl ELISA KIT
PY01-166  *甲*(代"酚")紫  ind  10克  
2,4-二硝基*(代"*")甲*(代"酸") L-Lysine 610-30-0
001000 胎牛血清
C1101 大牛血清(无菌过滤) 100ml/200ml/500ml/500ml*20瓶
ARB10543 人半乳糖凝集素3(GAlectIn-3)含量测试 Human galectin 3 (Galectin-3) ELISA KIT
2,6-二叔丁基对甲*(代"酚") Aldolase from rabbit muscle 128-37-0
ARB13586 兔子血小板衍生生长因子(PDGF)ELISA代测服务 Rabbit platelet-derived growth factor,pdgf ELISA KIT
ARB10371 人去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)Elisa定量检测 Human asialoglyco protein receptor,asgpr ELISA KIT
ARB13758 鸭γ干扰素(IFN-γ)尿液中含量检测 Duck interferon γ ,ifn-γ ELISA KIT
ARB13074 小鼠肿瘤标志物(CA724)elisa测定使用说明书 Mouse ca724 ELISA KIT
CYB163053 羊抗牛IgG-FITC
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·葡萄球菌RNA提取试剂盒
编号：BTN130842
英文名称：Staphylococcus RNA extraction kit
规格：50次

·柱式Oligo回收试剂盒
编号：BTN80401
英文名称：Oligo column recovery kit
规格：50次

·即用型BSA蛋白标准品系列
编号：BTN131072
英文名称：Instant BSA Standard
规格：7×1mL
本产品为预稀释型BSA蛋白标准品。性质稳定，过滤除菌，是配合BCA试剂和Bradford试剂测定蛋白浓度时的理想选择。

产品特点：
1．七个数据点，浓度范围为125-2000微克/毫升。
2．本产品可用于快速制备标准曲线或者微孔板曲线。
3．使用方便，无需自己准备梯度稀释液。
4．产品稳定，消除时间差异和操作差异。

产品组成：

成分	规格
BSA溶液，125μg/mL	1ml
BSA溶液，250μg/mL	1ml
BSA溶液，500μg/mL	1ml
BSA溶液，750μg/mL	1ml
BSA溶液，1000μg/mL	1ml
BSA溶液，1500μg/mL	1ml
BSA溶液，2000μg/mL	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期两年。

使用举例：BCA法微孔板测定蛋白质浓度
1．取各个稀释浓度的BSA蛋白标准品和待测蛋白质样品各25μL，加入到微孔板中。
 注：如果样品有限，则可取标准品和待测未知样品10μL。
2．在每一个孔中加入200μL BCA测定工作液(本试剂盒不提供)，并在震荡器上震荡30秒，使其充分混合。
3．将微孔板密封，在37℃孵育30分钟。
4．将微孔板冷却到室温。使用微孔板读数仪，测量样品在562nm或该波长附近的吸光值。
5．将各个标准品和待测蛋白质样品在562nm处的吸光值减去空白标准品在 562nm处的平均吸光值。
6．将BSA标准品在562nm处经过空白校正的平均吸光值对其浓度(μg/mL)作图，绘制标准曲线。
 注：如果使用与微孔板读数仪相关联的曲线拟合算法，四参数(二次方程)或最佳曲线拟合将会比简单的线性拟合提供更加准确的结果。如果手工对这些结果作图，对于标准曲线上的各个点，采取点对点描画曲线的方法，比直接进行线性拟合的结果更好。

注意：若采用Bradford法、BCA试管法等其他方法测定蛋白浓度，实验步骤略有差异，详细操作方法请参考蛋白质浓度测定实验工具书。

我公司生产供应销*(代"售")的基因结构和功能产品正全系列现货促销，满分期待您的垂询选购AFLP试剂盒(EcoRI-MseI)优惠促销。