超快核酸电泳液(干粉) 核酸电泳和回收

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产供应超快核酸电泳液(干粉) 核酸电泳和回收，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：超快核酸电泳液(干粉) 核酸电泳和回收
品牌：百奥莱博
规格：50L
编号：BTN51210
英文名：SuperBuffer-2 Powder
产地：国产|进口
SuperBuffer-2是我司在SuperBuffer基础上开发的DNA/RNA 两用快速电泳液。它跟SuperBuffer一样，能以高达30 V/cm的电压电泳，达到快速电泳的目的。跟SuperBuffer 不同的是，本产品对盐离子浓度敏感度低，同时还能用于RNA电泳。

产品特点：
1.快速，电泳时间短，对分辨率要求不高的电泳(如PCR和酶切检测等)甚至可以在5-10分钟内完成。
2. 不影响后续的Southern杂交，DNA胶回收和DNA连接等反应。
3. 价格与TBE(干粉)相当甚至更便宜。
4. DNA胶回收率高于使用TAE和TBE电泳的胶回收。

储存条件：常温保存和运输，有效期两年。

使用方法：

一：溶液的配制
将本产品全部加到一个干净的容量适当的容器中，按下表的用量加入蒸馏水并在室温下用磁力搅拌器搅拌，直到干粉完全溶解(一般需要30分钟左右)。
配法一(配制20X浓缩液)：加2.5升得到20×工作液
配法二(直接配制工作液)：加水50升得到50×工作液
注：其他浓度的浓缩液配制可以按比例计算，但浓缩液浓度不能超过20×，否则干粉不能全部溶解。由于干粉含多种未彻底混合均匀的成份，所以必须一次性全部用于溶液的配制。如果缓冲液(浓缩液或工作液)长时间不用，最好灭菌后放4℃长期保存。

二：DNA电泳
将SuperBuffer-2浓缩液用蒸馏水稀释到1×，除了需要使用较高电压才能得到快速的电泳结果外，操作跟使用TAE和TBE基本一样。需注意的地方是：
1.电压：在SuperBuffer-2溶液中既可以使用常规电压，也可以使用较高电压，只是使用常规电压时，其快速的优越性就体现不出来。使用较高电压时，由于各电泳槽结构不同，最佳电压需要稍做摸索。第一次最好将工作电压调到最高电压的80%左右，即平均25 V/cm(电极距离)。对一般minigel，一般可以用250-350V 跑5-10分钟；对大的电泳槽，可用400-450V 跑5-10分钟。每次根据电泳结果和缓冲液温度决定各电泳槽的最佳工作电压和时间。一般电压越高，电泳时间越短。若在电泳时发生电流或电压逐渐下降的现象，请检查电泳仪是否设置了电流上限或功率上限。缓冲液电泳次数超过3次或缓冲液中有细菌/真菌生长也会出现此现象，需要更换新的缓冲液。
2.胶浓度：建议将琼脂糖凝胶的浓度控制在0.8%左右，对于长度在100bp以下的DNA片段，可以将琼脂糖凝胶的浓度提高到1.2%左右。由于每次溶胶过程中会丢失水份，所以最好在溶胶后适当补充水份(可以前后称重)，否则胶浓度会逐渐增加，DNA的移动速度会减低、产热会增加。使用0.8%左右的琼脂糖凝胶的好处是一方面可以节约胶的用量，另一方面可以使DNA的泳动速度更快，同时还能够提高DNA的回收率。
3.染色：如果使用EB，最好把染料加入到融化后的凝胶中(只是EB的终浓度最好为0.4 -0.5μg/mL，比使用TAE和TBE时稍高)，但也可以加入到电泳缓冲液中或/和电泳上样液中。如果使用百奥莱博低毒染料绿如蓝，最好将染料加入到融化后的凝胶中。如果只有胶中有染料，则长时间电泳后(超过20分钟)，大部分染料在高压下会与DNA 分离，DNA 条带可能会看不见或看起来很淡，此时应该再染色一次。在染色液中加入一定的量的NaCl(终浓度≥0.05 mol/L)能提高染色效果。SuperBuffer-2与SYBR Green I 也有良好的兼容性，可以结合使用。
4. DNA 条带扭曲：DNA样品中所含SDS 量过高时(SDS 主要来于上样液)，DNA条带将出现扭曲，影响实验效果。建议使用不含SDS的上样液。
5. 反复使用：1×SuperBuffer-2电泳液至少可以重复使用2-3次，如果使用大电泳槽，可以重复使用的次数会更多。
6. TAE和TBE胶：已经用TAE和TBE电泳液配置好的琼脂糖凝胶可以直接放入1× SuperBuffer-2电泳液中按上述电泳条件电泳，但有时候会有扭曲现象。

三：RNA电泳
跟DNA电泳一样，必须在使用前用水将SuperBuffer-2溶液稀释到1×，其使用方法跟DNA电泳的主要区别是：
1.电压：RNA电泳时，最高使用电压大约只有DNA 最高使用电压的一半左右，所以一般minigel可以使用150 V左右的电压。由于各实验室电泳槽规格各异，第一次电泳时，最好将工作电压调到跟MOPS电泳一样的电压，每次再逐渐往上调电压和时间，根据电泳结果和测定缓冲液的温度决定今后的工作电压。
2. RNA上样液：RNA必须与含变性剂的RNA上样液混合，并在80℃保温10分钟后冰浴2-5分钟再上样。不能直接将RNA样品上样或使用DNA上样液，否则电泳不但很难得到清晰的条带，并且在加样孔中还会有看似DNA污染的条带出现。推荐使用百奥莱博生产的RNA变性/上样/染色三合一即用型溶液RNAload。
3.胶浓度：RNA电泳最好使用1%-1.5%的琼脂糖凝胶，用1X SuperBuffer-2配制。
4.染色：同DNA电泳。

除超快核酸电泳液(干粉) 核酸电泳和回收外，我公司正在打折促销以下产品：

·柱式细菌RNA提取试剂盒
编号：BTN80103
英文名称：Bacterial RNA Column extraction kit
规格：50次
本试剂盒是细菌RNA提取试剂盒(BTN51102)的柱式升级产品，用于快速从各种常见的革氏阴性细菌中提取总RNA。如需提取革氏阳性细菌的RNA，可以选择柱式真菌RNA提取试剂盒。跟细菌RNA提取试剂盒相比 它具有下列特点:
1. 操作更加简单快速，省去了最费时的离心步骤。
2. 所得 RNA 纯度更高，OD260/OD280一般在 2.0左右.
3.一般不含基因 DNA污染。
4.适用于各种革氏阴性细菌。
5. 性价比高于进口同类产品。

试剂盒组成：

 

成分	规格
溶液A	30ml
溶液B	20ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
RNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
下面的操作步骤是针对在 1.5mL塑料离心管中进行的微量提取的。

1. 新鲜配制裂解液。将溶液A和溶液B 按 1:1的比例混合。注意：溶液A和溶液B 混合后必须立即使用，不要放置，否则会产生沉淀。一次处理1.5mL左右的细菌需要0.6mL新鲜配制的裂解液(即0.3mL溶液A和0.3mL溶液B的混合液)。
2.在 1.5mL塑料离心管中离心收集0.2-1.5mL 新鲜细菌。注意:由于细菌RNA 半衰期十分短，所以，必须使用最新鲜的、处于对数生长期的细菌。
3. 吸尽液体培养基，加入0.6mL 新配制的裂解液，用枪充分吹打细菌沉淀，确保细菌全部裂解，没有块状物。
4. 将裂解物转移至一个干净的1.5mL塑料离心管中，然后加入0.2倍体积的自备*仿(1mL 裂解物需 0.2mL *仿)，振荡器上充分振荡混均 30秒。
5. 12000～15000g室温离心 3～5分钟。
6. 将上清液(约0.6-0.8mL)转移到离心吸附柱中。注意：离心后下层有 机相和中间层含有 DNA和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和DNA污染。为保险起见，可以留下 100μL上清液不取。同时吸取上清时最好缓慢进行，否则容易吸出交界面的不可见的丝状 DNA。
7. 12000～15000g室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
8. 加 0.7mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。一次洗涤一般足够去除杂质。但如果样品 OD260/280 比值不高，可以再用0.3mL通用洗柱液重复此步一次。
9.室温 12000～15000g离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响 RNA的使用。
10. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 收集管中，加入50-100μL RNA 洗脱液。
11.室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
12. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做 Northern杂交，强烈建议用户使 用甲醛变性胶进行 RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。
13. RNA产量产率测定：将5-10μl RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2 之 间)检测其在 OD260的光吸收。通过光吸收可以得出 RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出 RNA的产量(浓度 X 体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
14. RNA 纯度测定：无污染的总 RNA的OD260/OD280一般在 1.8-2.1 之 间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分 别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响 RT-PCR等反应。

疑难解答：
Q：上样孔里的红色荧光物一定是DNA污染吗？
A：不是。用 TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳 RNA时容易产生此现象，百奥莱博初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA 通过碱基 互补或通过硼*(代"酸")络合(如果使用 TBE作电泳液的话)形成的复合物，加 RNase处理后，这些红色荧光物(RNA)一般会消失。为避免此现象，建议 最好使用甲醛变性胶电泳和RNA 专用上样液(如我们的RNAload)。
Q：如何确认和去处除污染的基因组 DNA？
A：如果怀疑有 DNA污染，可以用 RNase处理 RNA样品，然后再电泳。如 果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组 DNA污染。进一步确认可以使用 PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用百奥莱博的非酶的DNA 去除剂 DNA Scavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一 般都有残留 RNase污染，所以必须严格按照厂家提供的使用手册进行操作。


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BOC-D-缬*酸 ConA 22838-58-0
ARB13527 兔C-反应蛋白(CRP)ELISA代测服务 Rabbit c-reactive protein,crp ELISA KIT
N-乙酰-DL-色*酸 RiboRuler Low range RNA Ladder 87-32-1
103476-89-7 Leupeptin 亮抑酶肽
PY01-127  明胶蛋白胨  250克  
SJ0847 豚鼠血清
BFD010 猪弓形体病毒抗体检测试剂盒
还原辅酶Ⅱ四*盐 Fast red B salt 1,5-Naphthalenedisulfonate 42934-87-2
16672-87-0 Ethephon 乙*(代"烯")利
硫*(代"酸")*基胍 Triphenylmethane 996-19-0
SJ0848 小鼠血清
ARB12472 大鼠胞浆型磷脂酶A2(cPLA2)尿液中含量检测 Rat cytosolic phospholipase a2,cpla2 ELISA KIT
ECL化学发光法检测试剂盒"
BTN130817 ROX参考染料,高浓度型 ROX Reference Dye
BL0052 脂质体2000 LIPOFECTAMINE2000
4-甲基伞花基磷酸* Coomassie brilliant blue G250 22919-26-2
9048-71-9 葡聚糖凝胶G-50 Sephadex G-50medium
PY02-230  O/F培养基(GLGB)  250克  
超快核酸电泳液(干粉) 核酸电泳和回收关键词：干粉,超快核酸电泳液(干粉),SuperBuffer-2 Powder,BTN51210


·Percoll
编号：BTN131134
规格：250mL
Percoll是一种常用的低粘度的密度梯度介质，由直径在15-30nm的硅胶颗粒组成，颗粒外包被了聚乙*(代"烯")吡*(代"咯")烷酮(PVP)，为化学惰性，不会影响细胞的活性。

产品特点：
1．Percoll渗透压很低(<20mosm/kg H2O)，粘度也很小，可形成高达1.3g／ml 密度。
2．采用预先形成的密度梯度时可在低离心力(200～1000g)于数分至数十分钟内达到满意的细胞分离结果。
3．离心后能形成1-1.3g/mL的密度梯度，可用于分离各种悬浮的细胞、线粒体、叶绿体和病毒(可小到70S)。
4．由于Percoll扩散常数低，所形成的梯度十分稳定。此外，Percoll不穿透生物膜，对细胞无毒害，因此广泛用于分离细胞、亚细胞成分、细菌及病毒，还可将受损细胞及其碎片与完好的活细胞分离。
5．Percoll溶液高压灭菌，必须进行不添加盐或蔗糖。盐的存在会引起percoll糊化，蔗糖的存在会引起焦糖化。

储存条件：常温运输和保存，有效期五年(未开封状态)。

使用方法：
1．不同浓度(密度)Percoll溶液的制备：先用9 份Percoll与1份 8.5％ NaCl或1.5MPBS混合达到生理性渗透压，然后用生理溶液(0.85％ NaCl或0.15M PBS)稀释到所需浓度。

Percoll浓度(％)	70	60	50	40	30	20
比重g/ml	1.090	1.077	1.067	1.056	1.043	1.031

2．不连续密度梯度Percoll层的制备：先将试管壁用牛血清湿润，除去多余血清，这种预处理可使逐层叠加的Percoll液平稳沿管壁流下，使形成满意的界面。在制备过程中一般用长针头注射器从高密度向低密度逐层放置，有时相邻两层Percoll 比重相差不大时，可将Percoll液放入注射器中，小针头斜面紧贴管壁，任其自然慢慢流下。
3．装样：样品体积和细胞浓度根据不同细胞而异，一般加样体积不宜过大，细胞浓度也不可过高，否则会影响细胞的分离和回收。
4．离心：一般采用离心力为400g，时间20～25min。由于多层Percoll 之间密度差别不大，因此离心机加速、降速时要慢，要平稳。
5．取样：当所要分离的细胞绝大部分在两层的界面时，可逐层去除Percoll液后收集界面部位的细胞;有时大部分细胞位于Percoll 层中,则需要逐层收集。收获含有Percoll液的细胞经2次洗涤后可供培养或检测用。

分离纯化细胞举例
1．富含NK活性大颗粒淋巴细胞(LGL)的纯化:按顺序由下向上逐层加50％、47.5％、45％、42.5％和40％五种不同密度的Percoll,如用10ml 试管(或塑料管)分离,每层Percoll约1.2～1.5ml，初步从外周血中分离的PBMC细胞1×10８悬于１ml培基中，按要求装样、离心和取样。一般富含NK 杀伤活性的LGL细胞位于42.5％与45％Percoll界面以及上下二层的Percoll液中。
2．纯化淋巴母细胞和除去死细胞：分别叠加50％和30％Percoll液。收取经PHA(或其它抗原、有丝分裂原)刺激PBMC,或含有较高比例异型的PBMC(如肾综合征出血热患者)，按要求装样、离心和取样。位于管底的淋巴细胞为小淋巴细胞；两层Percoll之间为淋巴母细胞，纯度和回收率在80％以上，位于30％Percoll表面是死细胞。收获淋巴母细胞可进行表型、结构以及功能的研究。

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