- ￥1000
- 盖宁生物
- 上海
- GN1573
- 2026年03月20日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
常温
- 保质期：
三年
- 英文名：
pGluc-Basic
- 库存：
现货
- 供应商：
上海盖宁生物
| 质粒类型: | 启动子增强子报告载体 |
|---|---|
| 启动子: | 无 |
| 克隆方法: | 多克隆位点，限制性内切酶 |
| 载体大小: | 4920 bp |
| 5' 测序引物及序列: | 5′ d(GGGGTTCCGCGCACATTTCCCCG) 3′ |
| 载体抗性: | Ampicillin (氨苄青霉素) |
订购信息
| 产品编号 | 产品名称 | 规格 | 价格 |
|---|---|---|---|
| 1573 | pGluc-Basic | 5ug质粒 |
¥1000.00 |
质粒图谱
载体描述
pGLuc-Basic is a plasmid cloning vector capable both of replication in E. coli and stable transfection of mammalian cells. It is designed for the cloning of promoter sequences and measurement of their transcription activity using the Gaussia Luciferase Assay Kit (NEB #E3300).
In E. coli, it replicates using the pMB1 origin of replication from pBR322 (although the rop gene is missing) and carries the bla (ApR) marker for selection with ampicillin. It also carries the nptII (NmR) marker under control of an SV40 promoter; thus, following transfection into mammalian cells, it can be used to form stable cell lines by selection with geneticin (G418).
The multiple cloning site (MCS) is positioned immediately upstream of a promoterless reporter gene, GLuc (the humanized coding sequence for the secreted Gaussia princeps luciferase) (1), which is followed by a synthetic polyadenylation (polyA) sequence (not shown). Thus, in mammalian cells the transcriptional activity of promoter sequences cloned into the MCS can be assessed by measuring GLuc activity in the culture medium.
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文献和实验【求助】启动子片断插入到了pgl3basic载体中，为什么没有检测到荧光？参与者：smile1688我把一个基因的启动子片断插入到了pgl3basic载体中，但是却没有测到荧光。阳性对照，即Pgl3 control检测到荧光。推测：1、启动子片断错误。1000bp，已测序验证，在ATG前40bp，推测离转录起始位点还有200bp以上。2、细胞的转录效率太低。但是Pgl3 control和TK值都在10万以上。3、细胞内的因子没有启动启动子活性。启动子和转染的细胞不是同一个物种，但是大家好
40增强子 pGL3-enhancer 有SV40增强子 研究启动子的调控， 需要做启动子删除分析吧。 xiongran 启动子区域一般包含在转录起始位点上游2kb，下游200bp的区间中，把这段序列拿到后再做一下转录因子结合位点分析。一般问题不大，做启动子删除分析工作量似乎太大！ zhao22840718 可以用pGL3-basic 最近promega出的pGl4载体，去除了pGL3骨架上很多转录
平板上长出3个克隆，没有酶切过的载体则是一片一片的克隆，说明两个酶均有活性。） 4、与双酶切过的PGL3-basic进行连接。16°过夜。因为ligase在温度高时容易失活，操作在冰上进行。然后放入PCR仪中，16°过夜。 5、转化 6、铺LB（AMP+）平板，只长出一个克隆。质粒提取后鉴定 结果仍为没有酶切成功的PGL3-BASIC. 请问成功构建质粒的朋友们，我的问题出在哪里？ 1、是不是质粒和vector
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