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- 2025年10月23日
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室温保存
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2年
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大量
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上海联迈生物工程有限公司
碱性重氮反应法特殊细胞染色试剂盒实验步骤
1. 石蜡切片置于67℃烘箱中，烘片2小时，脱蜡至水，用pH7.4的PBS冲洗三次，每次3分钟（3×3’）。
2. 取一定量pH=6.0柠檬酸盐缓冲液，加入微波盒中，微波加热至沸腾，将脱蜡水化后的组织切片置于耐高温塑料切片架上，放入已沸腾的缓冲液中，中档微波处理10分钟，取出微波盒流水自然泠却，从缓冲液中取出玻片，先用蒸馏水冲洗两次，之后用PBS冲洗2×3’。（注：不是所有的抗体都需要微波修复的，视具体情况而定）
3. 每张切片加1滴3%H2O2，室温下孵育10分钟，以阻断内源性过氧化物酶的活性。PBS冲洗3×3’。
4. 除去PBS液，每张切片加1滴相应的第一抗体（相应稀释倍数），室温下孵育2小时。
5. PBS冲洗3×5’。除去PBS液，每张切片加1滴聚合物增强剂，室温下孵育20分钟。PBS冲洗3×3’。
6. 除去PBS液，每张切片加1滴酶标抗鼠/兔聚合物，室温下孵育30分钟。PBS冲洗3×5’。
7. 除去PBS液，每张切片加1滴新鲜配制的DAB液（二氨基联苯胺），显微镜下观察5分钟。
8. 苏木素复染，0.1%HCl分化，自来水冲洗，蓝化，切片经梯度酒精脱水干燥，二甲苯透明，中性树胶封固，晾干后观察。
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其他
一、碱性重氮反应法特殊细胞染色试剂盒特点
1. 在切片加上一抗后，第二抗体标记多聚螯合物酶（HRP）的复合物与一抗结合，在多聚螯合物上有大量的HRP分子，使抗原信号有显著的放大，其敏感性较SABC、SP法高。
2. 由于多聚物在体内不存在，又不使用生物素，从而避免了由于生物素引起的非特异性背景染色，背景比SABC、SP法清晰。
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文献和实验的种类使用。根据重氮盐抑制作用的有无和强弱，可将偶氮色素法分为两种： (1)同时偶联法：是在底物混合液中，通过酶分解作用所得到的沉着物立即与重氮盐偶联形成偶氮色素。 (2)后偶联法：为防止重氮盐对酶的抑制作用，先使酶与底物发生作用，使分解产物沉着，然后再浸渍于重氮盐液中，使其形成偶氮色素。 偶联偶氮色素法具有作用时间较短、不容易发生酶丢失、正常组织细胞中无内源性底物和最终反应产物不易褪色等优点。但该法所用底物的分解产物有不同程度扩散，故定位欠准确，且人工合成底物价格较贵
直接滴加于玻片上，室温下作用45min。 （4）流水冲洗，晾干。 （5）甘油明胶封固。 【结果】成骨细胞胞质中可见红色ALP阳性颗粒。 3 碱性磷酸酶染色试剂盒法： 【作用原理】 细胞内碱性磷酸酶在Ph9.4-9.6条件下水解磷酸萘酚AS-MX产生萘酚，后者被重氮盐捕获，生成不溶性有色沉淀。 【作用液配制】 取2号储备液10ml，加3号液200ul，再加4号粉剂10mg，振摇速溶，立即过滤到细胞爬片上。 【步骤】 （1）细胞爬片滴加
1. 实验原理 在PH9.2-9.8的缓冲溶液中，细胞中的碱性磷酸酶能将底物磷酸苯酚钠水解，生成 α-苯酚和磷酸钠，再以稳定的重氮盐与酚偶联成不溶性有色偶氮染料沉淀于胞浆中。 2. 标本采集 2.1 病人准备：了解病人是否对局麻药有过敏史，凝血因子严重缺陷引起的出血 性疾病，穿刺部位有炎症或有畸形，晚期妊娠的妇女作骨穿时要慎重。 2.2 标本种类： 新鲜
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