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- 2025年10月21日
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室温保存
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2年
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大量
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上海联迈生物工程有限公司
横纹肌的组织块染色方法肌肉组织染色试剂盒实验步骤
1. 石蜡切片置于67℃烘箱中，烘片2小时，脱蜡至水，用pH7.4的PBS冲洗三次，每次3分钟（3×3’）。
2. 取一定量pH=6.0柠檬酸盐缓冲液，加入微波盒中，微波加热至沸腾，将脱蜡水化后的组织切片置于耐高温塑料切片架上，放入已沸腾的缓冲液中，中档微波处理10分钟，取出微波盒流水自然泠却，从缓冲液中取出玻片，先用蒸馏水冲洗两次，之后用PBS冲洗2×3’。（注：不是所有的抗体都需要微波修复的，视具体情况而定）
3. 每张切片加1滴3%H2O2，室温下孵育10分钟，以阻断内源性过氧化物酶的活性。PBS冲洗3×3’。
4. 除去PBS液，每张切片加1滴相应的第一抗体（相应稀释倍数），室温下孵育2小时。
5. PBS冲洗3×5’。除去PBS液，每张切片加1滴聚合物增强剂，室温下孵育20分钟。PBS冲洗3×3’。
6. 除去PBS液，每张切片加1滴酶标抗鼠/兔聚合物，室温下孵育30分钟。PBS冲洗3×5’。
7. 除去PBS液，每张切片加1滴新鲜配制的DAB液（二氨基联苯胺），显微镜下观察5分钟。
8. 苏木素复染，0.1%HCl分化，自来水冲洗，蓝化，切片经梯度酒精脱水干燥，二甲苯透明，中性树胶封固，晾干后观察。
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一、横纹肌的组织块染色方法肌肉组织染色试剂盒特点
1. 在切片加上一抗后，第二抗体标记多聚螯合物酶（HRP）的复合物与一抗结合，在多聚螯合物上有大量的HRP分子，使抗原信号有显著的放大，其敏感性较SABC、SP法高。
2. 由于多聚物在体内不存在，又不使用生物素，从而避免了由于生物素引起的非特异性背景染色，背景比SABC、SP法清晰。
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文献和实验1 、肌细胞分离液 配方一 马克凯郎（ Maccallum ）液 取 1 份浓硝酸、 2 份甘油、 3 份水，混合后就得到马克凯郎液。 把新鲜的肌肉组织小块（横纹肌、心肌和平滑肌）投入这种溶液里浸渍，分离时间需 1 ～ 3 日。这种溶液尤其适于分离横纹肌核心肌细胞。 配方二 氢氧化钾溶液 取 35 克氢氧化钾，放在 100 毫升蒸馏水中，加热，使它完全溶解后，在室温下冷却。
（二）分离液 1、肌细胞分离液 配方一 马克凯郎（Maccallum）液 取1份浓硝酸、2份甘油、3份水，混合后就得到马克凯郎液。 把新鲜的肌肉组织小块（横纹肌、心肌和平滑肌）投入这种溶液里浸渍，分离时间需1～3日。这种溶液尤其适于分离横纹肌核心肌细胞。
Rosa26-EYFP（CD4/EYFP）小鼠脾细胞中观察到，未经处理的活细胞EYFP荧光信号最强；然而，使用FoxP3染色试剂盒（含Fix/Perm和Perm两步法）后，EYFP荧光几乎完全消失。值得注意的是，若在标准染色流程前先用2%多聚甲醛（PFA）进行预固定，则EYFP信号可有效保留。 这一现象表明，荧光丢失并非源于荧光蛋白的化学降解，而是由于Fix/Perm缓冲液固定能力不足，导致可溶性胞质EYFP在后续破膜和洗涤步骤中被被动洗脱出细胞。 怎样解决
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