pZERO＋目的基因

【交流】载体构建时酶切位点选择及引物设计的相关问题

我想把目的基因连接到载体上，有几个问题想请教斑竹和各位战友：1、限制性内切酶的选择：我查看论坛说选择酶切位点需要考虑酶切位点在载体上的距离、酶切温度与连接效率、价格、使用频率等等。最后我综合价格、温度、Buffer选定XbaI和EcoRI，打算购买宝生的酶，相应的Buffer用附带的10×M Buffer。不知道我选择的酶切位点合适不合适呢？2、引物设计：引物结构为：保护碱基＋酶切位点＋目的基因末端上游引物5’－CCG TCTAGA ATGGCTTCGTACCCCTGC-3'下游引物5’－

多聚酶链式反应即PCR（polymerase chain reaction）技术

多聚酶链式反应即PCR（polymerase chain reaction）技术，应用这一技术可以将微量目的基因（DNA片段）扩增一百万倍以上。PCR反应理论的提出和技术的完善对于分子生物学的发展具有特殊的意义，它以敏感度高、特异性强、产率高、重复性好以及快速简便等优点迅速成为分子生物学研究中应用最为广泛的方法之一，并使得很多以往无法解决的分子生物学研究难题得以解决。发明这一技术的K. Mullis因此贡献而获得了1993年度诺贝尔化学奖。

引物（primers)设计知识介绍

）=n OD×33/（A×312＋C×288＋G×328＋T×303-61）/VH2O VH2O （单位：L） 退火温度 最适退火温度（Ta Opt ） = 0.3 ×（Tm of primer） 0.7 × （Tm of product）– 25 一般采用较引物Tm值低5℃作为PCR退火温度。 引物设计软件 Primer Premier 5.0 生物软件网下载 安装后，用文本编辑器打开WIN.INI，将vspace=DU改为vspace=PU便可以使用全部功能