pPICZ＋目的基因

【交流】载体构建时酶切位点选择及引物设计的相关问题

我想把目的基因连接到载体上，有几个问题想请教斑竹和各位战友：1、限制性内切酶的选择：我查看论坛说选择酶切位点需要考虑酶切位点在载体上的距离、酶切温度与连接效率、价格、使用频率等等。最后我综合价格、温度、Buffer选定XbaI和EcoRI，打算购买宝生的酶，相应的Buffer用附带的10×M Buffer。不知道我选择的酶切位点合适不合适呢？2、引物设计：引物结构为：保护碱基＋酶切位点＋目的基因末端上游引物5’－CCG TCTAGA ATGGCTTCGTACCCCTGC-3'下游引物5’－

【资源】载体交换，欢迎站友交换

在目的基因起始密码子ATG前加上这一个序列 pVL1393， 昆虫表达载体 pIEX/Bac-1 昆虫表达载体 pTET on pTeT off pTER-tight pBAD HisA amp pBAD myc HisA amp pACYC184 amp pBluescript II SK (+) amp pIRESneo3 pPICZ α B pVL1393， pIEX/Bac-1 pcmv-myc P2

Pichia酵母表达直接PCR鉴定重组子的方法

30s 延伸 72℃ 30s 结束延伸 72℃ 10min 1 保存 4℃ 1 如果筛选的是Mut+，将会出现两条带，一个是目的基因，另一个是2.2kb的AOX1基因，空质粒会出现以下条带（pPICZαA 588 bp)，将两者的大小加在一起来解释出现的实验结果。 我的结果是空载体的有大约580多的条带，但重组子的PCR只有将近1000bp的条带（我的目的基因是400bp），没有2.2kb的条带。