细胞凋亡形态学检测试剂盒厂家

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北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括细胞凋亡形态学检测试剂盒厂家在内的一系列细胞生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：细胞凋亡形态学检测试剂盒厂家
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
编号：KFS285
规格：100T
形态学检测是研究细胞凋亡的最基本方法。细胞凋亡的形态学变化是多阶段的，起初，细胞间连接和微绒毛消失，细胞体积缩小，胞浆凝缩，内质网变疏松并与胞膜融合，形成一个个空泡，核糖体与线粒体等细胞器聚集，结构尚无明显改变，细胞核内的染色质逐渐凝聚成新月状附在核膜周边，细胞核固缩呈均一的致密物，进而断裂成碎块，此时细胞膜仍保持完整：然后，胞膜及核膜不断出芽、脱落，一个细胞变成数个大小不等的有膜包裹的凋亡小体：最后凋亡小体被周围具有吞噬能力的细胞吞噬、消化。上述这些形态学的变化，可以通过本试剂盒中的染色及光学显微镜观察。

试剂盒组分：
Dye Reagent 1×10mL
Dye Reagent 2×1mL
Buffer A×10mL

注意事项：利用血球计数板进行该项操作时，不要用血计板配套的质地较硬的盖玻片，而用普通的盖玻片反而更利于结果的观察。

操作方法
1. 用适当的方法诱导细胞凋亡，消化收集细胞；
2. 用PBS 洗涤细胞二次，并调成浓度为1×106cells/ml 细胞悬液；
3. 吸取50~100μL 的细胞悬液均匀涂布于载玻片（A 片）上或用离心涂片机制片，室温晾干，甲醇固定5min；
4. 在A 片上滴加数滴100μL 的Dyes Reagent 1 室温染色1 min，用水轻轻洗去染液；
5. 在含体积分数为1%盐*(代"酸")的80%乙醇中分化10 s，流水冲洗1 min，晾干，显微镜下观察细胞的形态。
6. 在另一张涂有细胞并已于无水乙醇固定2min 的载玻片（B 片）上滴加100μL 染色液2（Dyes Reagent2 ：Buffer A=1:9 的混合液），室温染色5～20min，用水轻轻洗去染液，室温晾干；
7. 二甲*浸泡3 min，以去除杂质，使载玻片透明，最后树脂封片，显微镜下观察细胞形态；
8. 观察200-500 个细胞，计数凋亡细胞所占的比例。

结果分析A 片：凋亡细胞皱缩，胞膜完整。染色质凝聚，嗜碱性增强，染成深蓝色，呈环状或新月状附在核膜周围，或细胞核固缩碎裂成数个圆形颗粒，核膜消失。而坏死细胞体积增大，染色质变稀疏成网状，嗜碱性减低，染成淡蓝色，胞核破碎，细胞膜不完整。

B 片：凋亡细胞皱缩，胞膜完整。胞浆稀少或缺乏，染成淡红色，染色质凝聚，染成深紫色，细胞核固缩碎裂成数个圆形颗粒。

计算细胞凋亡率和死亡率：
细胞凋亡率=凋亡细胞/细胞总数×100%
细胞死亡率=坏死细胞/细胞总数×100%

储存：RT,避光，有效期12个月。

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细胞凋亡形态学检测试剂盒厂家关键词：Apoptotic/Necrotic Cell Detection Kit,细胞凋亡形态学检测试剂盒,KFS285


·细胞膜绿色荧光探针(DiO)
编号：KFS153
英文名称：DiO
规格：10mg
长链二烷基羰花青化合物，特别是Dil，广泛应用于固定和非固定的组织与细胞中，进行顺行或逆行的神经示踪分析。Dil 不会影响细胞的活力、生长以及基本生理特性。Dil 标记运动神经元，可在培养基条件下持续跟踪长达四周，在体内长达一年。染料通过在质膜中的缓慢横向扩散均匀标记神经元，0.2~0.6mm/每天/固定标本，在活体组织里，可以达到6mm/每天。经过醛固定的组织，Dil 的扩增可以持续长达1~2 年。一般情况下未标记的染料不会向非标记的细胞转移，除非质膜被破坏，比如切片部位。

储存：-20℃，避光，有效期12个月。

·2×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液
编号：KFS083
英文名称：2×SDS-PAGE loading buffer
规格：5ml
本产品作为蛋白质电泳Loading Buffer，适用于变性聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳时的蛋白样品制备和上样。蛋白上样缓冲液是一种以*酚蓝为染料， 2×SDS-PAGE 凝胶电泳上样缓冲液，用于常规的SDS-PAGE 蛋白电泳样品上样。

操作步骤
1. 按每1 微升蛋白样品加入1 微升2×SDS-PAGE 蛋白上样缓冲液的比例，混合蛋白样品和蛋白上样缓冲液(2X)。
2. 100℃或沸水浴加热5 分钟，以充分变性蛋白。
3. 置冰上5 分钟，10000rpm 离心1 分钟，取上清直接上样到SDS-PAGE 胶加样孔内即可。

·WB抗体清除液(酸性)
编号：KFS062
英文名称：2×SDS-PAGE loading buffer
规格：500ml
Western Blot 抗体清除缓冲液(Stripping buffer)，用于Western Blot 中转移了蛋白的膜的重复利用。在Western 中完成了一抗二抗结合和后续的化学发光检测后，有时还需要检测其它蛋白，通过使用抗体清除液，充分去除结合的一抗二抗，可以非常方便地重新利用使用过的膜检测其它蛋白。和重新跑一个SDS-PAGE 胶相比，不仅省时省力，而且可以消除重新上样而带来的误差，使可比性更强。

Western Blot 抗体清除缓冲液，经过多个抗体的检测试验，通常可以重复利用膜3-5 次。酸性抗体清除液适用于NC 膜和PVDF 膜上的抗体清除。

使用说明：
1. 在完成Western 化学发光检测后，蒸馏水中漂洗5 分钟。
2. 弃蒸馏水，加入适量的Western 一抗二抗去除液(酸性)，至少需把膜完全覆盖。在摇床上漂洗30-60 分钟。
3. 弃Western 抗体清除液,并吸尽残余液体。加入TBS、TBST 或PBS 漂洗3-4 次，每次在摇床上漂洗3-5 分钟。
4. 进行封闭(blocking)等Western 的后续操作。

注意事项：
1. 如多次重复使用同一张膜5 次以上，有可能会导致蛋白信号的减弱，建议膜重复使用不超过5 次。
2. 使用ECL 等类似的化学发光试剂进行的Western Blot 检测适用本试剂。使用非化学发光试剂进行的Western Blot检测，例如DAB，NBT/BCIP 等，不适用于本试剂。
3. Western Blot 抗体清除缓冲液有轻微腐蚀性，使用时请注意防护。


细胞凋亡形态学检测试剂盒厂家关键词：Apoptotic/Necrotic Cell Detection Kit,细胞凋亡形态学检测试剂盒,KFS285

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