细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-Alexa Fluo

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北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-Alexa Fluor 488/PI)优惠在内的一系列细胞生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-Alexa Fluor 488/PI)优惠
编号：SY0474
英文名：Annexin V-Alexa Fluor 488/PI Apoptosis Detection Kit
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
规格：20 rxn
Annexin V-Alexa Fluor488/PI细胞凋亡检测试剂盒（Annexin V-Alexa Fluor488/PI Apoptosis Detection Kit）是用Alexa Fluor488标记了的Annexin V作为探针，来检测细胞早期凋亡的发生，可用流式细胞仪或其他荧光检测设备进行检测。

其检测原理为：在正常的活细胞中，磷脂酰丝氨酸（phosphotidylserine，PS）位于细胞膜的内侧，但在早期凋亡的细胞中，PS 从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。Annexin-Ⅴ（膜联蛋白-V）是一种分子量为35-36KD的Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力结合。可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。

另外，本试剂盒中还提供了碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）用来区分存活的早期细胞和坏死或晚期凋亡细胞。PI是一种核酸染料，它不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜，但可以透过凋亡晚期和坏死细胞的细胞膜而使细胞核染红。因此，将Annexin V与PI联合使用时，PI 则被排除在活细胞（Annexin V-/PI-）和早期凋亡细胞（Annexin V+/PI-）之外，而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被Alexa Fluor488 和PI 结合染色呈现双阳性（Annexin V+/PI+）。

试剂盒组份：
Annexin V-Alexa Fluor488————————100 μl
PI Staining Solution (20 μg/ml)————200 μl
4×Binding Buffer————————————4 ml

注意事项
1) 由于细胞凋亡是一个快速的过程，建议样品在染色后1小时之内进行分析。
2) 对于贴壁细胞，消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞，需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作，尽量避免人为的损伤细胞。胰酶消化时间过短，细胞需要用力吹打才能脱落，容易造成细胞膜的损伤，PI摄入过多；消化时间过长，细胞膜同样易造成损伤，甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与Annexin V-Alexa Fluor488的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后，轻摇时胰酶与细胞充分接触，然后倒掉大部分胰酶，利用剩余的少量胰酶再消化一段时间，待细胞间空隙增大，瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTA，EDTA会影响Annexin V与PS的结合。
3) 如果样品来源于血液，请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS，能与Annexin V结合，从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并在200 g离心洗去血小板。
4) 试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
5) Annexin V-Alexa Fluor488和PI是光敏物质，在操作时请注意避光。

储存条件：4℃，有效期一年。

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87-79-6 L-山梨糖 L-Sorbose
F030416 胶体金标记兔抗人IgM抗体 Rabbit Anti-Human IgM*GOLD
F040108 鸡卵清蛋白偶联莱克多巴胺 OVA-RAC
ARB10858 人抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体(MCV)ELISA检测服务 Human anti-mutated citrullinated vimentin antibody,mcv ELISA KIT
F030626 FITC标记兔抗大鼠IgG抗体 Rabbit Anti-Rat IgG*FITC
525-79-1 Kinetin 激动素
ARB12471 大鼠胆囊收缩素/肠促胰酶肽(CCK)elisa测定使用说明书 Rat cholecystokinin,cck ELISA KIT
N,N′-羰基二咪唑 GSSG 530-62-1
5-溴-3-吲哚基-β-D-吡喃半乳糖苷 Trans-Zeatin 97753-82-7
HC0123 PVDF膜(0.2um)
9032-75-1 PectolyaseY-23 果胶酶Y-23
ARB11265 人骨成型蛋白受体Ⅱ(BMPR-Ⅱ)elisa检测说明书 Human bone morphogenetic protein receptor Ⅱ,bmpr-Ⅱ ELISA KIT
PY02-247 SIM动力培养基 250克
亮氨酸脱氢酶 TBAI 9082-71-7
F030108 HRP标记兔抗人血清白蛋白抗体 Rabbit Anti-HSA *HRP
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2-萘酚 Amylose from potato 135-19-3
BTN130989 白细胞裂解液 White Cell Lysis Solution
谷草转氨酶 Semicarbazide 9000-97-9
BL1324 dCTP(100mM)
D-纤维二糖 Gold(III) chloride 528-50-7
聚乙烯醇 Sodium 1-decanesulfonate 9002-89-5
RN1501 RNAfixer 无液氮RNA样品储存液
F010115 小鼠抗黄曲霉毒素B1抗体 Monoclonal Mouse Anti-Aflatoxin
十七酸 Fmoc-Trp-OH 506-12-7
BTN80910 X-Gal溶液 X -Gal Solution
B0501 马血清(辐照灭菌)
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F030501 FITC标记小鼠抗乙肝核心抗原抗体 Monoclonal Mouse Anti-HBcAg*FITC
四正丁基碘化铵 D-LDH 311-28-4
对甲苯磺酸吡啶盐 Crystal violet 24057-28-1
BTN30 常用PCR引物 Common PCR Primer
F030310 胶体金标记羊抗乙肝表面抗原抗体 Polyclonal Goat Anti-HBsAg*GOLD
黄芩苷 Clostripain from Clostridium histolyticum 21967-41-9
J0314 山羊抗人IgM(H+L)抗血清 1ml/10ml
D-阿拉伯糖 2-Naphthyl phosphate sodium salt 10323-20-3或28697-53-2
9050-68-4 Sephadex G-10 medium(葡聚糖凝胶G-10)
2,3-二羟基苯甲酸 Direct Black 38 303-38-8
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·细胞膜红色荧光探针
编号：SY0494
英文名称：DiI
规格：10mg
DiI是一种亲脂性的荧光染料，可以用来染细胞膜和其它脂溶性生物结构，进入细胞膜后，DiI在整个细胞膜上扩散，最佳浓度时可以使整个细胞膜染色。DiI在进入细胞膜之前荧光非常弱，当与细胞膜结合后其荧光强度大大增强，DiI被激发后可以发出橙红色的荧光，具有很高的淬灭常数，中等强度的光量子和很短的激发态寿命。可以用标准的TRITC滤光片检测。

DiI通常不会明显影响细胞的生存力，因此被广泛用于正向或逆向的，活的或固定的神经等细胞或组织的示踪剂或长期示踪剂（long-term tracer）。除了最简单的细胞膜荧光标记外，还可以用于检测细胞的融合和粘附，检测发育或移植过程中细胞迁移，通过FRAP（Fluorescence Recovery After Photobleaching）检测脂在细胞膜上的扩散，检测细胞毒性和标记脂蛋白等。

CAS：41085-99-8
分子式：C59H97ClN2O4
分子量：933.87
外观：红色至暗红色，紫色至深紫色粉末
Ex/Em：550/567 nm
推荐滤光器：XF32-Omega, 31002-Chroma
纯度：≥98%（TLC）
溶解性：溶于DMF，DMSO，甲醇
储存条件：4℃避光,有效期一年
结构式：


使用方法

1. 染色液制备
（1）配置DMSO或EtOH 储存液：储存液用 DMSO或EtOH配置浓度1～5 mM。
【注】未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融。
（2）工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或PBS）稀释储存液，配制浓度为1～5 μM的工作液。
【注】工作液最终浓度建议根据不同细胞系和实验体系来优化。

2. 悬浮细胞染色
（1）加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为1×106/mL。
（2）37 ℃孵育细胞 2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
（3）孵育结束，按1000～1500 rpm离心5min。
（4）倾倒上清液，再次缓慢加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。
（5）重复（3），（4）步骤两次以上。

3. 贴壁细胞的染色
（1）将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。
（2）从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，将盖玻片放在潮湿的环境中。
（3）在盖玻片的一角加入100μL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
（4）37 ℃孵育细胞 2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
（5）吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育5～10min，然后吸干培养基。

4. 显微镜检测
（1）DiD，DiO，DiI，DiR和DiS滤光器的选择参见表1。
（2）多色染料的同时检测，滤光器按照以下设定：
a) DiI和DiO＝Omega XF52，Chroma 51004；
b) DiI和DiD＝Omega XF92，Chroma 51007；
c) DiI，DiO和DiD＝Omega XF93，Chroma 61005

5. 流式细胞仪检测
经DiO，DiI，DiD和DiR染色的细胞可分别用流式细胞仪的FL1，FL2，FL3或FL4通道检测。

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