骨髓间充质干细胞培养、脂肪干细胞培养、心肌成纤维细胞培养、软

骨髓间充质干细胞的原代培养方法

实验大纲 骨髓间充质干细胞是多能干细胞。因此，作为再生医学的细胞来源，它是活性研究和临床应用的目标。当骨髓液或骨髓细胞接种在培养皿上时，间充质干细胞会作为粘附细胞增殖。因此，间充质干细胞可以从漂浮的血细胞中分离出来。在此，我们报告了使用 Evident Prov CM20 培养监测系统对间充质干细胞原代培养的远程监测结果。   试验程序 使用补充了 10% 胎牛血清（FBS）和 1% 青霉素链霉素的 Iscove 改良 Dulbecco 培养基（IMDM），将市售人骨髓细胞以 950,000

心肌成纤维细胞的培养

的判断），离心取沉淀重悬于含20％BSA的DMEM（有条件可以用Cascade的培养液）。60－90min后更换培养液（差速贴壁，成纤维细胞比心肌细胞贴壁快）。 1、胰酶的作用比较强烈，联合使用胶原酶将胶原纤维充分消化后利于离心时细胞沉淀，提高细胞存活率。另外，消化时间不宜太长，主要凭观察和经验来判断。离心采用1000rpm 5min。 2、酶的配置可以用d-Hank's液或生理盐水都行。血清的作用主要是终止消化，用一般加了血清的DMEM就行，我们这里是20％胎牛血清。 3、贴壁

软骨细胞培养

软骨细胞的原代培养龄新西兰乳兔(雌雄不限，共18只，分6次处理),溺死，置于75％酒精溶液中10分钟，拿入超净工作台，自眼外眦至耳屏前剪开皮肤暴露皮下组织，再次严格消毒，自外眦外将颧弓由根部剪断，暴露髁状突，去净髁状突表面软组织及软骨膜，以眼科剪剪取髁状突表面的透明软骨，以磷酸缓冲液（PBS含青霉素、链霉素各100U/L）冲洗2遍，将软骨剪切成1－3mm3 左右碎块，0.25%胰蛋白酶先消化30-35分钟，PBS浸洗2遍；后置于50ml玻璃培养瓶，加0.1％Ⅱ型胶原酶(DMEM配制)，37消化