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- LMAI Bio
- 上海
- LM120506-200
- 2025年07月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
低温运输，-20℃保存
- 保质期：
一年
- 英文名：
T4 Polynucleotide Kinase
- 库存：
大量
- 供应商：
联迈生物
- 规格：
200U
T4聚核苷酸激酶产品及特点：
该酶能够催化磷酸在ATP的γ-位和寡核苷酸链（双链或单链DNA或RNA）的5-羟基末端以及3-单磷酸核苷间进行转移和交换。该酶还具有3磷酸酶活性，将3-磷酸基团从寡核苷酸的3磷酸末端、脱氧3-单磷酸核苷和脱氧3-二磷酸核苷上水解掉。其反应示意图如下：
该酶主要用途是：
1. DNA或RNA的末端标记，用作寡核苷酸探针和进行DNA测序。
2. 寡核苷酸5末端的磷酸化，以便进行连接反应。
3. 除去3磷酸基团。
T4聚核苷酸激酶活性单位定义
以Micrococcal Nuclease处理的小牛胸腺DNA为底物，在37℃，pH7.6的条件
下，30分钟内使1 nmol的[γ-32P]ATP掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个
活性单位（U）。
纯度
1. 10 U的本酶和1 μg的λDNA-Hind III片段在37℃下反应16小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
2. 5 U的本酶和1 μg的16S，23S rRNA在37℃下反应16小时，RNA的电泳谱带不发生变化。
T4聚核苷酸激酶反应条件
反应Buffer，10×：Tris-HCl（pH8.0） 500 mM，MgCl2 100 mM，DTT50 mM。* Buffer在溶解时，如果出现少量沉淀属正常现象保温后使用不影响反应性能。
Buffer成分
Tris-HCl（pH7.5） 50 mM，KCl 50 mM，DTT 1 mM，ATP 0.1 μM，Glycerol 50 %。
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文献和实验用 T4 标记的 5’ 末端 1． 无菌的 1.5ml 为了离心管置冰浴上顺序混合下列组分： 50 pmol 合成的寡核苷酸 2.5 μ l 10 ×反应缓冲液 10 μ l γ -[32 P]ATP （ 33pmol ） 1.5 μ l T4 多核苷酸激酶（ 15U ） 灭菌双蒸水加至 25 μ l 2． 37 ℃温育 30min 。 3． 当反应物正温育时，以 2000 × g 离心 2min 制备
。在这些情况下，仅有约10％的放射性标记物被转移，但实际上每个寡核苷酸分子都被标记。 2） 在反应混合液中加入8单位（约1 μl）T4噬菌体多核苷酸激酶。 充分混匀，于37 ℃温育45分钟。人该反应液中另取0.5 μl 加至另一装有10 10mmol/LTris.Cl(pH8.0)的反应管中，搁置一旁留备步骤3）使用。于68 ℃将其余的反应液加热10分钟，以灭活T4噬菌体多核苷酸激酶。 3） 按下列方法（Stawinski等，1977;Narang等，1980
我做NF-kB的EMSA实验方法和结果，条带不好，请大家指点！
。 （7）吸取上清，为核蛋白提取物。 （8）马上进行EMSA实验。 探针制备： 用γ-32P-ATP及T4多核苷酸激酶对合成的转录因子结合和突变型寡核苷酸的两条互补链分别进行末端标记。20 µl反应总体积中，加寡核苷酸10 pmol，10×T4多聚核苷酸激酶缓冲液2µl，γ-32P-ATP 3 pmol，T4多核苷酸激酶10 u，37 ℃反应45 min，再置于68 ℃ 10 min灭活。在离心管中加入退火反应液60 µl，互补配对的两条链的标记产物各20 µl，于95 ℃变性5min，缓慢降温
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