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- 百奥莱博
- 北京
- WE0116-JMW
- 2025年07月01日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃，避免反复冻融
- 保质期：
长期
- 英文名：
2×GC-rich PCR MasterMix
- 库存：
489
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售")，产品线涵盖北京现货2×富含GC PCR MasterMix优惠在内的分子生物学试剂产品，还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。
名称：2×富含GC PCR MasterMix
编号：WE0116
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
规格：1ml
本品是由Bes Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、Mg2+、dNTPs以及PCR稳定剂和增强剂组成的预混体系，浓度为2×。预配好的PCR混合液使操作更加简单快捷，可最大限度地减少人为误差和污染。经过优化的缓冲液配方使酶的作用发挥最大功效，实现对复杂模板的高保真、高效率扩增，独创的MasterMix配方使整个反应体系非常稳定，重复性好。本品不含染料，PCR程序结束后可根据需要加入适量上样缓冲液后进行电泳操作。扩增得到的PCR产物3"端附有一个“A”碱基，因此可直接用于T/A克隆。主要适用于对保真性要求较高的PCR反应和结构复杂的模板如GC含量高，有二级结构等的扩增，对简单模板有效扩增的片段可达20kb，对复杂模板可达10kb。
产品组成：
| 组份 | 1ml |
| 2×GC-Rich PCR MasterMix | 1ml |
| ddH2O | 1ml |
注意：2×GC-Rich PCR MasterMix含有Bes Taq DNA Polymerase,3 mM MgCl2 和400μM each dNTP。
质量控制：
1、经检验无外源核酸酶活性；
2、PCR方法检测无宿主残余DNA；
3、能有效地扩增多种基因组中的单拷贝基因。
使用方法：
以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
1、PCR反应体系
| 试剂 | 50μl反应体系 | 终浓度 |
| 2×GC-Rich PCR MasterMix | 25μl | 1× |
| Forward Primer，10μM | 2μl | 0.4μM |
| Reverse Primer，10μM | 2μl | 0.4μM |
| Template DNA | ＜0.5μg | ＜0.5μg/50μl |
| ddH2O | up to 50μl |
注意：引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
2、PCR反应条件
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 94℃ | 2 min | |
| 变性 | 94℃ | 30 s | 25-35 个循环 |
| 退火 | 55-65℃ | 30 s | |
| 延伸 | 72℃ | 30 s | |
| 终延伸 | 72℃ | 2 min |
注意：
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定，Bes Taq DNA Polymerase的扩增效率为2 kb/min。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
储存条件：-20℃，避免反复冻融。
关键词：2×GC-rich PCR MasterMix,2×富含GC PCR MasterMix,WE0116
更多有关北京现货2×富含GC PCR MasterMix优惠的价格及使用说明等，请联系我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销*(代"售")以下产品：
| 编号 | 名称 |
| WE0211 | 6×UltraStain上样缓冲液 |
| WE0148 | 一步法逆转录实时荧光定量PCR试剂盒 |
| WE0251 | TOP10感受态细胞 |
| WE0133 | cDNA第一链合成试剂盒(去除基因组DNA) |
| WE0390 | AP标记山羊抗小鼠IgG(H+L) |
| WE0157 | miRNA cDNA第一链合成试剂盒 |
| WE0186 | 鼠尾基因组DNA提取试剂盒 |
| WE0249 | TA快速连接试剂盒(pUC-T) |
| WE0318 | 柠檬酸缓冲液(IHC抗原修复液，100×) |
| WE0216 | 50×TAE |
| WE0199 | 细菌RNA提取试剂盒(含DNase I) |
| WE0323 | DAB显色试剂盒(WB IHC) |
| WE0137 | 一步法Real-Time RT-qPCR试剂盒 |
| WE0386 | HRP标记链霉亲和素 |
| WE0297 | 一步法快速WB试剂盒(鼠源一抗) |
| WE0346 | 抗GFP标签单克隆抗体 |
| WE0246 | 2kb DNA Marker |
| WE0280 | 蛋白分子量Marker |
| WE0381 | Cy3标记山羊抗兔IgG(H+L) |
| WE0393 | HRP标记山羊抗小鼠IgG(H+L) |
| WE0120 | 血液直接PCR扩增试剂盒 |
| WE0291 | 30%丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")酰胺溶液(29:1) |
| WE0272 | Ni琼脂糖凝胶 |
| WE0332 | 抗c-Myc标签单克隆抗体 |
| WE0387 | HRP标记兔抗山羊IgG(H+L) |
| WE0239 | T4 DNA连接酶 |
| WE0152 | 快速实时荧光定量PCR的预混体系(荧光探针)(低含量ROX校正染料) |
| WE0348 | 抗c-Myc标签多克隆抗体 |
| WE0146 | 实时荧光定量PCR的预混体系(探针法)(高含量ROX校正染料) |
| WE0358 | DyLight594标记山羊抗人IgG(H+L) |
| WE0352 | 抗GST标签单克隆抗体 |
| WE0290 | G250蛋白快速染色试剂 |
| WE0164 | 高纯质粒大提试剂盒 |
| WE0207 | 磁珠法唾液DNA提取试剂盒 |
| WE0110 | 2×Babuddy MasterMix(含染料) |
| WE0306 | Western Blot封闭液Ⅰ(BSA) |
| WE0289 | SDS-PAGE上样缓冲液(非还原，5×) |
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文献和实验5 min 结果：可见Bioteke 2×power Taq PCR MasterMix试剂对于原核或真核生物DNA均可高效。相较于同类的taq mix的扩增效率更高，且对于高GC含量也可得到很好的扩增。取扩增产物10 μL用1%琼脂糖凝胶电泳如图可见明亮条带。 三、 cDNA扩增 人类胎盘提取的总RNA反转录的cDNA扩增1.2 kbp片段 模板：人类胎盘提取的总RNA反转录的cDNA 200 ng/50 μL Primer： PrimerF
的稳定性。四、避免引物对3'末端存在互补序列，这会形成引物二聚体，抑制扩增。在用软件设计时大家常常会疑惑，究竟? G 不能低于多少?这里有个数据: ? G 为0~-2时，PCR 产率可达100%， ? G=-6 时，为40%。五、避免3'末端富含GC.设计引物时保证在最后5 个核苷中含有3 个A 或T。六、避免3'末端的错误配对。3'端核苷需要同模板退火以供聚合酶催化延伸。3’最好以G或C 结尾，防止AT 的松散结合引起错配。七、避免存在可能会产生内部二级结构如发夹结构的序列，这会破坏引物退火稳定
的引物，在引物设计上所要求的参数是不同的。引物设计的要求： ① Tm=55-65 ℃ ② GC=30-80% ③ PCR扩增产物长度：引物的产物大小不要太大，一般在80-300 bp之间都可。 ④ 引物的退火温度要高，一般要在 60 ℃以上。 要特别注意避免引物二聚体和非特异性扩增的存在。而且引物设计时应该考虑到引物要有不受基因组DNA污染影响的能力，即引物应该跨外显子，最好是引物能跨外显子
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