纯化线粒体氧化应激活性氧（ROS）MitoSOX红色荧光测定

线粒体功能的9大核心检测指标解析!

3｜MitoTracker 标记下不同线粒体网络形态   四、线粒体ROS：看氧化应激有没有升高 线粒体超氧阴离子升高常与电子传递链异常同时出现。 MitoSOX Red是常用的活细胞线粒体超氧阴离子探针，可以通过荧光显微镜或流式细胞术检测。探针进入线粒体后被氧化，荧光信号增强。 注意要点：重点控制探针浓度、孵育时间、细胞密度和曝光条件。染色结束后尽快检测，也能减少探针自身氧化和光照带来的额外背景。   图4丨MitoSOX Red检测线粒体ROS水平   五、线粒体

ROS的检测方法

的论文[13]。（3） ； ；流式[7，12]：要检测细胞内的活性氧，看了国内外的文献，发现用流式是一个较经典的方法[7].流式检测细胞内的活性氧[12]（4） ； ；MCLA发光法：DCFH方法的确是测定总活性氧状况，如果要单独测定超氧阴离子，可以用MCLA发光法[14]（5） ； ；组织中：双氢罗丹明（DHR）（sigma，美国）可自由进出细胞膜，进入细胞后可被，-.氧化为可发出荧光的罗丹明-123，经过一定时间的积累，即可通过流式细胞仪检出相应的荧光[4]。血清中： ROS测定采用

氧化应激分子机制与相关信号通路：解码细胞 “氧化危机” 的底层逻辑

被打破，核心驱动物质为活性氧（ROS），包括超氧阴离子（O₂⁻・）、过氧化氢（H₂O₂）、羟基自由基（・OH）等，其生成与清除的动态平衡决定细胞氧化状态。 1. ROS 生成途径 1) 内源性：线粒体是主要来源，氧化磷酸化时电子传递链复合体 Ⅰ/Ⅲ 会发生电子泄漏，1%-2% 的电子与氧结合生成 O₂⁻・，后续可转化为 H₂O₂，在铁 / 铜等过渡金属参与下还能生成毒性极强的・OH；此外，内质网应激、NADPH 氧化酶异常激活、过氧化物酶体脂肪酸 β- 氧化也会产生 ROS。 2) 外源性：紫外