- ¥800 - 1200
- Ybscience
- 中国/美国
- YB-0034
- 2025年07月13日
14 年金牌会员
企业认证
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
6个月
- 英文名：
pET-30b(+)
- 库存：
大量
- 供应商：
钰博生物
- 规格：
1ug/5ug
pET-30b(+)
pET30b载体基本信息
| 出品公司: | Ybscience |
|---|---|
| 别名: | pET30b, pet 30b |
| 质粒类型: | 大肠杆菌蛋白表达 |
| 表达水平: | 高 |
| 克隆方法: | 多克隆位点，限制性内切酶 |
| 载体大小: | 5421 bp |
| 5' 测序引物: | T7 |
| 5' 测序引物序列: | 5'-TAATACGACTCACTATAGGG-3' |
| 载体标签: | N-His, N-S, N-Thrombin, N-EK, C-His |
| 载体抗性: | Kanamycin |
| 表达宿主菌: | BL21(DE3) 、BLR(DE3)、BL21(DE3)pLysS |
| 备注: | N term thrombin cleavage site; N term enterokinase cleavage site; a,b,c vary by MCS |
| 稳定性: | 瞬时表达 Transient |
| 组成型: | 组成型 Constitutive |
| 病毒/非病毒: | 非病毒 |
pET30b载体质粒图谱和多克隆位点信息
pET30b载体简介
The pET-30a-c(+) vectors carry an N-terminal His• Tag®/ thrombin/ S• Tag™/ enterokinase configuration plus an optional C-terminal His• Tag sequence. Unique sites are shown on the circle map. Note that the sequence is numbered by the pBR322 convention, so the T7 expression region is reversed on the circular map. The cloning/expression region of the coding strand transcribed by T7 RNA polymerase is shown below. The f1 origin is oriented so that infection with helper phage will produce virions containing single-stranded DNA that corresponds to the coding strand. Therefore, single-stranded sequencing should be performed using the T7 terminator primer (Cat. No. 69337-3).
pET30b载体序列
LOCUS pET-30 b (+) 5421 bp DNA circular SYN
DEFINITION pET-30 b (+)
ACCESSION
KEYWORDS
SOURCE
ORGANISM other sequences; artificial sequences; vectors.
COMMENT This file is created by Vector NTI
http://www.biofeng.com/
COMMENT ORIGDB|GenBank
COMMENT VNTAUTHORNAME|biofeng.com|
COMMENT VNTOAUTHORAD1|Novagen Inc.|
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5421
/organism="pET-30 b (+)"
/mol_type="other DNA"
terminator complement(1..129)
/label="T7_terminator"
misc_feature 69..87
/label="T7_Terminal_primer"
misc_feature complement(218..229)
/label="EK"
misc_feature 301..1907
/label="lacI"
CDS 326..1075
/label="ORF frame 2"
misc_feature complement(355..371)
/label="T7_transl_en_RBS"
misc_feature complement(389..416)
/label="lacO"
promoter complement(416..434)
/label="T7_promoter"
gene 470..733
/label="tet (300 - 563)"
/gene="tet (300 - 563)"
misc_feature complement(522..541)
/label="pBRrevBam_primer"
CDS 948..1907
/label="ORF frame 3"
gene 1966..2241
/label="tet (576 - 851)"
/gene="tet (576 - 851)"
misc_feature 2716..2907
/label="ROP"
misc_feature complement(2901..2923)
/label="pGEX_3_primer"
rep_origin complement(3322..3941)
/label="pBR322_origin"
gene 4047..4862
/label="KanR2"
/gene="KanR2"
CDS 4047..4862
/label="ORF frame 3"
ORIGIN
1 atccggatat agttcctcct ttcagcaaaa aacccctcaa gacccgttta gaggccccaa
61 ggggttatgc tagttattgc tcagcggtgg cagcagccaa ctcagcttcc tttcgggctt
121 tgttagcagc cggatctcag tggtggtggt ggtggtgctc gagtgcggcc gcaagcttgt
181 cgacggagct cgaattcgga tccgatatcg ccatggcctt gtcgtcgtcg tcggtaccca
241 gatctgggct gtccatgtgc tggcgttcga atttagcagc agcggtttct ttcataccag
301 aaccgcgtgg caccagacca gaagaatgat gatgatgatg gtgcatatgt atatctcctt
361 cttaaagtta aacaaaatta tttctagagg ggaattgtta tccgctcaca attcccctat
421 agtgagtcgt attaatttcg cgggatcgag atcgatctcg atcctctacg ccggacgcat
481 cgtggccggc atcaccggcg ccacaggtgc ggttgctggc gcctatatcg ccgacatcac
541 cgatggggaa gatcgggctc gccacttcgg gctcatgagc gcttgtttcg gcgtgggtat
601 ggtggcaggc cccgtggccg ggggactgtt gggcgccatc tccttgcatg caccattcct
661 tgcggcggcg gtgctcaacg gcctcaacct actactgggc tgcttcctaa tgcaggagtc
721 gcataaggga gagcgtcgag atcccggaca ccatcgaatg gcgcaaaacc tttcgcggta
781 tggcatgata gcgcccggaa gagagtcaat tcagggtggt gaatgtgaaa ccagtaacgt
841 tatacgatgt cgcagagtat gccggtgtct cttatcagac cgtttcccgc gtggtgaacc
901 aggccagcca cgtttctgcg aaaacgcggg aaaaagtgga agcggcgatg gcggagctga
961 attacattcc caaccgcgtg gcacaacaac tggcgggcaa acagtcgttg ctgattggcg
1021 ttgccacctc cagtctggcc ctgcacgcgc cgtcgcaaat tgtcgcggcg attaaatctc
1081 gcgccgatca actgggtgcc agcgtggtgg tgtcgatggt agaacgaagc ggcgtcgaag
1141 cctgtaaagc ggcggtgcac aatcttctcg cgcaacgcgt cagtgggctg atcattaact
1201 atccgctgga tgaccaggat gccattgctg tggaagctgc ctgcactaat gttccggcgt
1261 tatttcttga tgtctctgac cagacaccca tcaacagtat tattttctcc catgaagacg
1321 gtacgcgact gggcgtggag catctggtcg cattgggtca ccagcaaatc gcgctgttag
1381 cgggcccatt aagttctgtc tcggcgcgtc tgcgtctggc tggctggcat aaatatctca
1441 ctcgcaatca aattcagccg atagcggaac gggaaggcga ctggagtgcc atgtccggtt
1501 ttcaacaaac catgcaaatg ctgaatgagg gcatcgttcc cactgcgatg ctggttgcca
1561 acgatcagat ggcgctgggc gcaatgcgcg ccattaccga gtccgggctg cgcgttggtg
1621 cggacatctc ggtagtggga tacgacgata ccgaagacag ctcatgttat atcccgccgt
1681 taaccaccat caaacaggat tttcgcctgc tggggcaaac cagcgtggac cgcttgctgc
1741 aactctctca gggccaggcg gtgaagggca atcagctgtt gcccgtctca ctggtgaaaa
1801 gaaaaaccac cctggcgccc aatacgcaaa ccgcctctcc ccgcgcgttg gccgattcat
1861 taatgcagct ggcacgacag gtttcccgac tggaaagcgg gcagtgagcg caacgcaatt
1921 aatgtaagtt agctcactca ttaggcaccg ggatctcgac cgatgccctt gagagccttc
1981 aacccagtca gctccttccg gtgggcgcgg ggcatgacta tcgtcgccgc acttatgact
2041 gtcttcttta tcatgcaact cgtaggacag gtgccggcag cgctctgggt cattttcggc
2101 gaggaccgct ttcgctggag cgcgacgatg atcggcctgt cgcttgcggt attcggaatc
2161 ttgcacgccc tcgctcaagc cttcgtcact ggtcccgcca ccaaacgttt cggcgagaag
2221 caggccatta tcgccggcat ggcggcccca cgggtgcgca tgatcgtgct cctgtcgttg
2281 aggacccggc taggctggcg gggttgcctt actggttagc agaatgaatc accgatacgc
2341 gagcgaacgt gaagcgactg ctgctgcaaa acgtctgcga cctgagcaac aacatgaatg
2401 gtcttcggtt tccgtgtttc gtaaagtctg gaaacgcgga agtcagcgcc ctgcaccatt
2461 atgttccgga tctgcatcgc aggatgctgc tggctaccct gtggaacacc tacatctgta
2521 ttaacgaagc gctggcattg accctgagtg atttttctct ggtcccgccg catccatacc
2581 gccagttgtt taccctcaca acgttccagt aaccgggcat gttcatcatc agtaacccgt
2641 atcgtgagca tcctctctcg tttcatcggt atcattaccc ccatgaacag aaatccccct
2701 tacacggagg catcagtgac caaacaggaa aaaaccgccc ttaacatggc ccgctttatc
2761 agaagccaga cattaacgct tctggagaaa ctcaacgagc tggacgcgga tgaacaggca
2821 gacatctgtg aatcgcttca cgaccacgct gatgagcttt accgcagctg cctcgcgcgt
2881 ttcggtgatg acggtgaaaa cctctgacac atgcagctcc cggagacggt cacagcttgt
2941 ctgtaagcgg atgccgggag cagacaagcc cgtcagggcg cgtcagcggg tgttggcggg
3001 tgtcggggcg cagccatgac ccagtcacgt agcgatagcg gagtgtatac tggcttaact
3061 atgcggcatc agagcagatt gtactgagag tgcaccatat atgcggtgtg aaataccgca
3121 cagatgcgta aggagaaaat accgcatcag gcgctcttcc gcttcctcgc tcactgactc
3181 gctgcgctcg gtcgttcggc tgcggcgagc ggtatcagct cactcaaagg cggtaatacg
3241 gttatccaca gaatcagggg ataacgcagg aaagaacatg tgagcaaaag gccagcaaaa
3301 ggccaggaac cgtaaaaagg ccgcgttgct ggcgtttttc cataggctcc gcccccctga
3361 cgagcatcac aaaaatcgac gctcaagtca gaggtggcga aacccgacag gactataaag
3421 ataccaggcg tttccccctg gaagctccct cgtgcgctct cctgttccga ccctgccgct
3481 taccggatac ctgtccgcct ttctcccttc gggaagcgtg gcgctttctc atagctcacg
3541 ctgtaggtat ctcagttcgg tgtaggtcgt tcgctccaag ctgggctgtg tgcacgaacc
3601 ccccgttcag cccgaccgct gcgccttatc cggtaactat cgtcttgagt ccaacccggt
3661 aagacacgac ttatcgccac tggcagcagc cactggtaac aggattagca gagcgaggta
3721 tgtaggcggt gctacagagt tcttgaagtg gtggcctaac tacggctaca ctagaaggac
3781 agtatttggt atctgcgctc tgctgaagcc agttaccttc ggaaaaagag ttggtagctc
3841 ttgatccggc aaacaaacca ccgctggtag cggtggtttt tttgtttgca agcagcagat
3901 tacgcgcaga aaaaaaggat ctcaagaaga tcctttgatc ttttctacgg ggtctgacgc
3961 tcagtggaac gaaaactcac gttaagggat tttggtcatg aacaataaaa ctgtctgctt
4021 acataaacag taatacaagg ggtgttatga gccatattca acgggaaacg tcttgctcta
4081 ggccgcgatt aaattccaac atggatgctg atttatatgg gtataaatgg gctcgcgata
4141 atgtcgggca atcaggtgcg acaatctatc gattgtatgg gaagcccgat gcgccagagt
4201 tgtttctgaa acatggcaaa ggtagcgttg ccaatgatgt tacagatgag atggtcagac
4261 taaactggct gacggaattt atgcctcttc cgaccatcaa gcattttatc cgtactcctg
4321 atgatgcatg gttactcacc actgcgatcc ccgggaaaac agcattccag gtattagaag
4381 aatatcctga ttcaggtgaa aatattgttg atgcgctggc agtgttcctg cgccggttgc
4441 attcgattcc tgtttgtaat tgtcctttta acagcgatcg cgtatttcgt ctcgctcagg
4501 cgcaatcacg aatgaataac ggtttggttg atgcgagtga ttttgatgac gagcgtaatg
4561 gctggcctgt tgaacaagtc tggaaagaaa tgcataaact tttgccattc tcaccggatt
4621 cagtcgtcac tcatggtgat ttctcacttg ataaccttat ttttgacgag gggaaattaa
4681 taggttgtat tgatgttgga cgagtcggaa tcgcagaccg ataccaggat cttgccatcc
4741 tatggaactg cctcggtgag ttttctcctt cattacagaa acggcttttt caaaaatatg
4801 gtattgataa tcctgatatg aataaattgc agtttcattt gatgctcgat gagtttttct
4861 aagaattaat tcatgagcgg atacatattt gaatgtattt agaaaaataa acaaataggg
4921 gttccgcgca catttccccg aaaagtgcca cctgaaattg taaacgttaa tattttgtta
4981 aaattcgcgt taaatttttg ttaaatcagc tcatttttta accaataggc cgaaatcggc
5041 aaaatccctt ataaatcaaa agaatagacc gagatagggt tgagtgttgt tccagtttgg
5101 aacaagagtc cactattaaa gaacgtggac tccaacgtca aagggcgaaa aaccgtctat
5161 cagggcgatg gcccactacg tgaaccatca ccctaatcaa gttttttggg gtcgaggtgc
5221 cgtaaagcac taaatcggaa ccctaaaggg agcccccgat ttagagcttg acggggaaag
5281 ccggcgaacg tggcgagaaa ggaagggaag aaagcgaaag gagcgggcgc tagggcgctg
5341 gcaagtgtag cggtcacgct gcgcgtaacc accacacccg ccgcgcttaa tgcgccgcta
5401 cagggcgcgt cccattcgcc a
//
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验相关实验
真DNA聚合酶可能会导致此问题。大肠杆菌 BL21（DE3）中的蛋白质表达重组pET-32α（+）载体可以表达所需的蛋白质，其在被异丙基β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导后与大肠杆菌 BL21（DE3）中的109aa Trx•Tag TM融合。首先，将含有100μg/ ml氨苄青霉素的10ml LB培养基与含有重组pET-32α（+）载体的新鲜细菌菌落一起接种37℃过夜; 然后，将500-μl过夜培养物加入到含有100-μg/ ml氨苄青霉素的30-ml新鲜LB培养基中，在37℃接种直至OD 600
了。这次用的是100 ug/ul的Amp浓度。转接的时候是1:500稀释。（我不知道1:100行不行，一朝被蛇咬，十年怕井绳啊。在OD600达到0.8的时候诱导。 转接的时候做对照：IPTG 0 h， 同时做诱导：2 h, 3 h 主要结果有三： A 有表达； B 阴性对照也有表达 ，所以这个结果不是很convincing； C 目的蛋白应该在30 kD，但分子量显示是36 kD左右（这个问题是个低级错误，接下来的帖子会指出 ）。 原因
是positive expression control。是pET15b携带b-galactosidase的一个构建。泳道1－8是全细胞蛋白电泳；泳道9－12是取沉淀电泳；13－16是上清电泳。结果：a. 有glucose的阴性对照无带（或非常浅）。b. 无glucose的阴性对照有带，但整体来说比诱导的弱。c. 诱导的有带。d. 蛋白大小还是不对（其实是对的，我冤枉它了，请看后面的帖子）。结论：培养基中确实很可能存在lactose。而且应该是造成阴性对照有表达的原因。 现在头疼的就是分子量的问题
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
pET-30b(+)
¥800 - 1200
