pET-28a(+)

pET-28a(+)

载体基本信息

出品公司:	Ybscience
别名:	pet28a, pet 28a, pET-28a(+)
质粒类型:	大肠杆菌蛋白表达
表达水平:	高
克隆方法:	多克隆位点，限制性内切酶
载体大小:	5369 bp
5' 测序引物及序列:	T7: 5'-TAATACGACTCACTATAGGG-3'
3' 测序引物序列:	T7t: 5'-GCTAGTTATTGCTCAGCGG-3'
载体标签:	N-His, N-Thrombin, N-T7, C-His
载体抗性:	卡那霉素
表达宿主菌:	BL21(DE3) 、BLR(DE3)、BL21(DE3)pLysS
备注:	N端含有Thrombin蛋白酶切位点; pET28a, b, c的差异仅仅存在于多克隆位点处。
稳定性:	瞬时表达 Transient
组成型:	组成型 Constitutive
病毒/非病毒:	非病毒

 

pET-28a(+)载体质粒图谱和多克隆位点信息

pET-28a(+)载体简介

 

pET-28a-c(+)载体带有一个N端的His/Thrombin/T7蛋白标签，同时含有一个可以选择的C端His标签。pET28a载体的单一的多克隆位点见上面的环状质粒图谱。注意：载体序列是以pBR322质粒的编码规矩进行编码的，所以T7蛋白表达区在质粒图谱上面是反向的。
T7 RNA聚合酶启动的克隆和表达区域在质粒图谱中也被标注了出来。质粒的F1复制子是被定向的，所以在T7噬菌体聚合酶的作用下，包含有蛋白编码序列的病毒粒子能够产生，并启动蛋白表达，同时蛋白表达将被T7终止子序列(Cat. No. 69337-3)的作用下终止蛋白翻译。

 

 

pET-28a(+)载体序列

LOCUS       pET-28a(+)    5369 bp     DNA  Circular    SYN
DEFINITION  pET-28a(+)
ACCESSION   
KEYWORDS    
SOURCE      
  ORGANISM  other sequences; artificial sequences; vectors.
COMMENT     This file is created by Vector NTI
            http://www.biofeng.com/
COMMENT     ORIGDB|GenBank
COMMENT     VNTAUTHORNAME|biofeng.com|
COMMENT     VNTOAUTHORAD1|Novagen Inc.|
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..5369
                     /organism="pET-28 a (+)"
                     /mol_type="other DNA"
     terminator      complement(1..129)
                     /label="T7_terminator"
     misc_feature    69..87
                     /label="T7_Terminal_primer"
     misc_feature    complement(207..239)
                     /label="T7_leader"
     misc_feature    complement(222..240)
                     /label="Xpress_fwd_primer"
     misc_feature    complement(307..323)
                     /label="T7_transl_en_RBS"
     misc_feature    complement(341..368)
                     /label="lacO"
     promoter        complement(368..386)
                     /label="T7_promoter"
     gene            418..681
                     /label="tet (300 - 563)"
                     /gene="tet (300 - 563)"
     misc_feature    complement(470..489)
                     /label="pBRrevBam_primer"
     CDS             523..1023
                     /label="ORF frame 1"
     misc_feature    764..1855
                     /label="lacI"
     CDS             896..1855
                     /label="ORF frame 2"
     gene            1914..2189
                     /label="tet (576 - 851)"
                     /gene="tet (576 - 851)"
     misc_feature    2664..2855
                     /label="ROP"
     misc_feature    complement(2849..2871)
                     /label="pGEX_3_primer"
     rep_origin      complement(3270..3889)
                     /label="pBR322_origin"
     gene            3995..4810
                     /label="KanR2"
                     /gene="KanR2"
     CDS             3995..4810
                     /label="ORF frame 2"
ORIGIN
    1 atccggatat agttcctcct ttcagcaaaa aacccctcaa gacccgttta gaggccccaa
   61 ggggttatgc tagttattgc tcagcggtgg cagcagccaa ctcagcttcc tttcgggctt
  121 tgttagcagc cggatctcag tggtggtggt ggtggtgctc gagtgcggcc gcaagcttgt
  181 cgacggagct cgaattcgga tccgcgaccc atttgctgtc caccagtcat gctagccata
  241 tggctgccgc gcggcaccag gccgctgctg tgatgatgat gatgatggct gctgcccatg
  301 gtatatctcc ttcttaaagt taaacaaaat tatttctaga ggggaattgt tatccgctca
  361 caattcccct atagtgagtc gtattaattt cgcgggatcg agatctcgat cctctacgcc
  421 ggacgcatcg tggccggcat caccggcgcc acaggtgcgg ttgctggcgc ctatatcgcc
  481 gacatcaccg atggggaaga tcgggctcgc cacttcgggc tcatgagcgc ttgtttcggc
  541 gtgggtatgg tggcaggccc cgtggccggg ggactgttgg gcgccatctc cttgcatgca
  601 ccattccttg cggcggcggt gctcaacggc ctcaacctac tactgggctg cttcctaatg
  661 caggagtcgc ataagggaga gcgtcgagat cccggacacc atcgaatggc gcaaaacctt
  721 tcgcggtatg gcatgatagc gcccggaaga gagtcaattc agggtggtga atgtgaaacc
  781 agtaacgtta tacgatgtcg cagagtatgc cggtgtctct tatcagaccg tttcccgcgt
  841 ggtgaaccag gccagccacg tttctgcgaa aacgcgggaa aaagtggaag cggcgatggc
  901 ggagctgaat tacattccca accgcgtggc acaacaactg gcgggcaaac agtcgttgct
  961 gattggcgtt gccacctcca gtctggccct gcacgcgccg tcgcaaattg tcgcggcgat
 1021 taaatctcgc gccgatcaac tgggtgccag cgtggtggtg tcgatggtag aacgaagcgg
 1081 cgtcgaagcc tgtaaagcgg cggtgcacaa tcttctcgcg caacgcgtca gtgggctgat
 1141 cattaactat ccgctggatg accaggatgc cattgctgtg gaagctgcct gcactaatgt
 1201 tccggcgtta tttcttgatg tctctgacca gacacccatc aacagtatta ttttctccca
 1261 tgaagacggt acgcgactgg gcgtggagca tctggtcgca ttgggtcacc agcaaatcgc
 1321 gctgttagcg ggcccattaa gttctgtctc ggcgcgtctg cgtctggctg gctggcataa
 1381 atatctcact cgcaatcaaa ttcagccgat agcggaacgg gaaggcgact ggagtgccat
 1441 gtccggtttt caacaaacca tgcaaatgct gaatgagggc atcgttccca ctgcgatgct
 1501 ggttgccaac gatcagatgg cgctgggcgc aatgcgcgcc attaccgagt ccgggctgcg
 1561 cgttggtgcg gatatctcgg tagtgggata cgacgatacc gaagacagct catgttatat
 1621 cccgccgtta accaccatca aacaggattt tcgcctgctg gggcaaacca gcgtggaccg
 1681 cttgctgcaa ctctctcagg gccaggcggt gaagggcaat cagctgttgc ccgtctcact
 1741 ggtgaaaaga aaaaccaccc tggcgcccaa tacgcaaacc gcctctcccc gcgcgttggc
 1801 cgattcatta atgcagctgg cacgacaggt ttcccgactg gaaagcgggc agtgagcgca
 1861 acgcaattaa tgtaagttag ctcactcatt aggcaccggg atctcgaccg atgcccttga
 1921 gagccttcaa cccagtcagc tccttccggt gggcgcgggg catgactatc gtcgccgcac
 1981 ttatgactgt cttctttatc atgcaactcg taggacaggt gccggcagcg ctctgggtca
 2041 ttttcggcga ggaccgcttt cgctggagcg cgacgatgat cggcctgtcg cttgcggtat
 2101 tcggaatctt gcacgccctc gctcaagcct tcgtcactgg tcccgccacc aaacgtttcg
 2161 gcgagaagca ggccattatc gccggcatgg cggccccacg ggtgcgcatg atcgtgctcc
 2221 tgtcgttgag gacccggcta ggctggcggg gttgccttac tggttagcag aatgaatcac
 2281 cgatacgcga gcgaacgtga agcgactgct gctgcaaaac gtctgcgacc tgagcaacaa
 2341 catgaatggt cttcggtttc cgtgtttcgt aaagtctgga aacgcggaag tcagcgccct
 2401 gcaccattat gttccggatc tgcatcgcag gatgctgctg gctaccctgt ggaacaccta
 2461 catctgtatt aacgaagcgc tggcattgac cctgagtgat ttttctctgg tcccgccgca
 2521 tccataccgc cagttgttta ccctcacaac gttccagtaa ccgggcatgt tcatcatcag
 2581 taacccgtat cgtgagcatc ctctctcgtt tcatcggtat cattaccccc atgaacagaa
 2641 atccccctta cacggaggca tcagtgacca aacaggaaaa aaccgccctt aacatggccc
 2701 gctttatcag aagccagaca ttaacgcttc tggagaaact caacgagctg gacgcggatg
 2761 aacaggcaga catctgtgaa tcgcttcacg accacgctga tgagctttac cgcagctgcc
 2821 tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca
 2881 cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg
 2941 ttggcgggtg tcggggcgca gccatgaccc agtcacgtag cgatagcgga gtgtatactg
 3001 gcttaactat gcggcatcag agcagattgt actgagagtg caccatatat gcggtgtgaa
 3061 ataccgcaca gatgcgtaag gagaaaatac cgcatcaggc gctcttccgc ttcctcgctc
 3121 actgactcgc tgcgctcggt cgttcggctg cggcgagcgg tatcagctca ctcaaaggcg
 3181 gtaatacggt tatccacaga atcaggggat aacgcaggaa agaacatgtg agcaaaaggc
 3241 cagcaaaagg ccaggaaccg taaaaaggcc gcgttgctgg cgtttttcca taggctccgc
 3301 ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga ggtggcgaaa cccgacagga
 3361 ctataaagat accaggcgtt tccccctgga agctccctcg tgcgctctcc tgttccgacc
 3421 ctgccgctta ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg gaagcgtggc gctttctcat
 3481 agctcacgct gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc gctccaagct gggctgtgtg
 3541 cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg gtaactatcg tcttgagtcc
 3601 aacccggtaa gacacgactt atcgccactg gcagcagcca ctggtaacag gattagcaga
 3661 gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt ggcctaacta cggctacact
 3721 agaaggacag tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag ttaccttcgg aaaaagagtt
 3781 ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg gtggtttttt tgtttgcaag
 3841 cagcagatta cgcgcagaaa aaaaggatct caagaagatc ctttgatctt ttctacgggg
 3901 tctgacgctc agtggaacga aaactcacgt taagggattt tggtcatgaa caataaaact
 3961 gtctgcttac ataaacagta atacaagggg tgttatgagc catattcaac gggaaacgtc
 4021 ttgctctagg ccgcgattaa attccaacat ggatgctgat ttatatgggt ataaatgggc
 4081 tcgcgataat gtcgggcaat caggtgcgac aatctatcga ttgtatggga agcccgatgc
 4141 gccagagttg tttctgaaac atggcaaagg tagcgttgcc aatgatgtta cagatgagat
 4201 ggtcagacta aactggctga cggaatttat gcctcttccg accatcaagc attttatccg
 4261 tactcctgat gatgcatggt tactcaccac tgcgatcccc gggaaaacag cattccaggt
 4321 attagaagaa tatcctgatt caggtgaaaa tattgttgat gcgctggcag tgttcctgcg
 4381 ccggttgcat tcgattcctg tttgtaattg tccttttaac agcgatcgcg tatttcgtct
 4441 cgctcaggcg caatcacgaa tgaataacgg tttggttgat gcgagtgatt ttgatgacga
 4501 gcgtaatggc tggcctgttg aacaagtctg gaaagaaatg cataaacttt tgccattctc
 4561 accggattca gtcgtcactc atggtgattt ctcacttgat aaccttattt ttgacgaggg
 4621 gaaattaata ggttgtattg atgttggacg agtcggaatc gcagaccgat accaggatct
 4681 tgccatccta tggaactgcc tcggtgagtt ttctccttca ttacagaaac ggctttttca
 4741 aaaatatggt attgataatc ctgatatgaa taaattgcag tttcatttga tgctcgatga
 4801 gtttttctaa gaattaattc atgagcggat acatatttga atgtatttag aaaaataaac
 4861 aaataggggt tccgcgcaca tttccccgaa aagtgccacc tgaaattgta aacgttaata
 4921 ttttgttaaa attcgcgtta aatttttgtt aaatcagctc attttttaac caataggccg
 4981 aaatcggcaa aatcccttat aaatcaaaag aatagaccga gatagggttg agtgttgttc
 5041 cagtttggaa caagagtcca ctattaaaga acgtggactc caacgtcaaa gggcgaaaaa
 5101 ccgtctatca gggcgatggc ccactacgtg aaccatcacc ctaatcaagt tttttggggt
 5161 cgaggtgccg taaagcacta aatcggaacc ctaaagggag cccccgattt agagcttgac
 5221 ggggaaagcc ggcgaacgtg gcgagaaagg aagggaagaa agcgaaagga gcgggcgcta
 5281 gggcgctggc aagtgtagcg gtcacgctgc gcgtaaccac cacacccgcc gcgcttaatg
 5341 cgccgctaca gggcgcgtcc cattcgcca
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