- ￥1980 - 4280
- LMAI Bio
- 美国/中国
- LM266Mu02
- 2025年07月11日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
避免反复冻融。2-8°C不超过一个月，-80°C不超过12个月
- 保质期：
1年
- 英文名：
Recombinant Glucagon (GC)
- 库存：
30
- 供应商：
联迈生物
- 规格：
10µg/50µg/200µg/1mg/1g
| 来源 | 原核表达 |
| 宿主 | E.coli |
| 内毒素水平 | <1.0EU/µg(LAL法测定) |
| 亚细胞定位 | n/a |
| 片段与标签 | N-terminal His Tag |
| 缓冲液成份 | 磷酸盐缓冲液（pH7.4，含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.） |
| 性状 | 冻干粉 |
原理：
蛋白质的翻译效率很大程度上跟翻译起始效率有关，因此mRNA的5'端必须得很好翻译，最好不要有复杂的二级结构；通过PCR的方法在基因的5‘端引入简并序列，构建克隆，挑选多个克隆，诱导表达之，SDS-PAGE电泳检测表达量的高低，挑选高表达克隆进行测序。
实验步骤：
1.设计目的重组蛋白质的N端10-15个氨基酸的简并序列。
2.引物合成上述简并序列，同时设计合成目的基因反向引物。
3.PCR扩展目的基因，这样在目的基因的5‘端就引入了兼并序列，同时不改变氨基酸序列。
4.双酶切，插入到目标载体。
5.转化。
6.挑选多个克隆（比如100-200个）到1.5ml EP管，直接诱导表达（记得带上为改造克隆菌株的对照）。
7.SDS-PAGE检测。
8.挑选高表达的多个克隆，测序。
重组蛋白的特性
Immune tech的重组蛋白分为冻干粉和溶液态两种保存形式，原核细胞表达的重组蛋白为冻干粉状态，真核细胞表达的重组蛋白为溶液态保存，这样使得重组蛋白非常稳定，在-80℃条件下可保存数年。冻干粉在使用前需进行溶解，其中溶解的方法非常关键，因为溶解不好会降低蛋白的效用。溶液态保存的重组蛋白在冻融稀释使用过程中也需要仔细注意，这些都是用户在实际应用中经常遇到的问题。
（1）原核细胞表达的重组蛋白。Immune tech大肠杆菌表达的冻干重组蛋白，已经从包涵体中提纯，添加了蛋白保护剂，使用过滤后的无菌水作为复溶剂即可，复溶冻干蛋白100 μg，用86 μl的超纯水，轻轻摇晃使蛋白溶解，再用移液枪的枪头轻吹几下即可完全溶解，一定不能使用涡旋仪进行快速振荡或剧烈摇晃。
（2）真核细胞表达的重组蛋白。有活性的蛋白质不仅要转录和翻译，还要进行翻译后的加工，使得蛋白质的空间折叠方式维持正常，所以重组蛋白必须在真核细胞中进行，如哺乳动物细胞能够识别和去除基因中的内含子，对翻译后的蛋白质进行加工，这样表达的蛋白质具有生物活性。我们用溶液态来保存，保持了其良好的活性和稳定性。
（3）重组蛋白的保护剂。在冻干和储存过程中常用的保护剂或稳定剂有糖类，多元醇，聚合物，表面活性剂，某些蛋白和氨基酸等。我们通常加8%（质量比体积）的海藻糖和甘露醇作为冻干保护剂。海藻糖可明显阻止蛋白质二级结构改变以及冻干过程中蛋白质的伸展和聚集，甘露醇也是一种普遍应用的冻干保护剂和填充剂。
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文献和实验。因此，文库提供了关于特定细胞类型、器官或发育阶段的基因时空表达信息。cDNA 文库克隆可用于鉴定新型 RNA 转录物、测定基因序列和重组蛋白的表达。 构建 cDNA 文库的必要条件是 RNA 可适当代表其全长和/或相对丰度，因此，逆转录酶的选择非常重要。具有高持续合成能力的逆转录酶可以合成长 cDNA，并捕获低丰度 RNA。同样，在对具有高度二级结构的 RNA 进行逆转录时，建议使用热稳定性较强的逆转录酶。 cDNA 末端快速扩增（RACE） cDNA 末端快速扩增（RACE）是一种基于 PCR 的方法
QIAgene Expression Kit——再也不为重组蛋白的表达效率发愁 据Protein Database的最新数据表明，目前已知的人类蛋白有35,000种(包括splice variants)，大约33%的蛋白正处于研究中，但是只有8%的蛋白能够成功表达。统计数据同时显示，目前克隆，表达，纯化的成功率只维持在54%，74%，59%。所以说，在蛋白表达的漫漫征途中，拿不到想要的蛋白是一件非常普遍的事情。举一个例子来说对于目标蛋白不表达或表达量低这个常见问题，需要排除或检查的因素就太多
递质变化 激素和递质 分泌增多 分泌受抑制 儿茶酚胺（肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺） 促肾上腺皮质激素释放因子（CRF） 促肾上腺皮质激素（ACTH） 糖皮质激素（肾上腺） β－内啡肽、生长素、催乳素 胰高血糖素 抗利尿激素 肾素、血管紧张素、醛固酮 组织激素：前列腺素、血栓素、激肽 细胞因子：白细胞介素-1 胰岛素 一、交感神经-肾上腺髓质反应 应激时，血浆肾上腺素、去甲肾上腺素和多巴
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