- ￥1980 - 4280
- LMAI Bio
- 美国/中国
- LM085Mu02
- 2026年03月30日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
避免反复冻融。2-8°C不超过一个月，-80°C不超过12个月
- 保质期：
1年
- 英文名：
Recombinant STIP1 Homology And U-Box Containing Protein 1 (STUB1)
- 库存：
30
- 供应商：
联迈生物
- 规格：
10µg/50µg/200µg/1mg/1g
| 来源 | 原核表达 |
| 宿主 | E.coli |
| 内毒素水平 | <1.0EU/µg(LAL法测定) |
| 亚细胞定位 | n/a |
| 片段与标签 | N-terminal His Tag |
| 缓冲液成份 | 磷酸盐缓冲液（pH7.4，含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.） |
| 性状 | 冻干粉 |
原理：
蛋白质的翻译效率很大程度上跟翻译起始效率有关，因此mRNA的5'端必须得很好翻译，最好不要有复杂的二级结构；通过PCR的方法在基因的5‘端引入简并序列，构建克隆，挑选多个克隆，诱导表达之，SDS-PAGE电泳检测表达量的高低，挑选高表达克隆进行测序。
实验步骤：
1.设计目的重组蛋白质的N端10-15个氨基酸的简并序列。
2.引物合成上述简并序列，同时设计合成目的基因反向引物。
3.PCR扩展目的基因，这样在目的基因的5‘端就引入了兼并序列，同时不改变氨基酸序列。
4.双酶切，插入到目标载体。
5.转化。
6.挑选多个克隆（比如100-200个）到1.5ml EP管，直接诱导表达（记得带上为改造克隆菌株的对照）。
7.SDS-PAGE检测。
8.挑选高表达的多个克隆，测序。
重组蛋白的特性
Immune tech的重组蛋白分为冻干粉和溶液态两种保存形式，原核细胞表达的重组蛋白为冻干粉状态，真核细胞表达的重组蛋白为溶液态保存，这样使得重组蛋白非常稳定，在-80℃条件下可保存数年。冻干粉在使用前需进行溶解，其中溶解的方法非常关键，因为溶解不好会降低蛋白的效用。溶液态保存的重组蛋白在冻融稀释使用过程中也需要仔细注意，这些都是用户在实际应用中经常遇到的问题。
（1）原核细胞表达的重组蛋白。Immune tech大肠杆菌表达的冻干重组蛋白，已经从包涵体中提纯，添加了蛋白保护剂，使用过滤后的无菌水作为复溶剂即可，复溶冻干蛋白100 μg，用86 μl的超纯水，轻轻摇晃使蛋白溶解，再用移液枪的枪头轻吹几下即可完全溶解，一定不能使用涡旋仪进行快速振荡或剧烈摇晃。
（2）真核细胞表达的重组蛋白。有活性的蛋白质不仅要转录和翻译，还要进行翻译后的加工，使得蛋白质的空间折叠方式维持正常，所以重组蛋白必须在真核细胞中进行，如哺乳动物细胞能够识别和去除基因中的内含子，对翻译后的蛋白质进行加工，这样表达的蛋白质具有生物活性。我们用溶液态来保存，保持了其良好的活性和稳定性。
（3）重组蛋白的保护剂。在冻干和储存过程中常用的保护剂或稳定剂有糖类，多元醇，聚合物，表面活性剂，某些蛋白和氨基酸等。我们通常加8%（质量比体积）的海藻糖和甘露醇作为冻干保护剂。海藻糖可明显阻止蛋白质二级结构改变以及冻干过程中蛋白质的伸展和聚集，甘露醇也是一种普遍应用的冻干保护剂和填充剂。
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文献和实验用蛋白或多肽标签融合于重组蛋白中，进而方便重组蛋白的纯化和检验。小分子标签通常免疫原性较低，且不影响目标蛋白功能而得以保留。但是大分子标签如 GST 因其对目标蛋白的结构和生物活性有所影响，通常需要去除。 今天我们就来聊一聊柱上酶切那点事儿~ 什么是柱上酶切 柱上酶切纯化路线是指在吸附了标签蛋白的层析柱上添加蛋白酶进行在位去除标签，具有更加灵活、高效、快速的特点。 相比于常规的洗脱后的酶切纯化路线，柱上酶切不仅可以简化酶切后的再次上样操作，同时可以尽量避免操作过程中目标蛋白
的底物进行筛选。我们通过离体印迹磷酸化作用来确认可能的底物。总的来说，我们的方法能筛选植物蛋白激酶用于进一步的分析，随后的体内实验对评估它们的生理作用是必不可少的 [ 13，24，25 ]。2. 材料 2.1 非变性条件下重组激酶的纯化 ( 1 ) 培养细胞的培养基：含 100 μg/ml 氨苄青霉素，15 μg/ml 卡那霉素，2% 葡萄糖的 2YB 或 LB 培养基。 ( 2 ) 异丙基 β-D-硫代半乳糖苷（IPTG ) 。 ( 3 ) 非变性裂解液：300 mmol
导致结论偏差；必须深入至聚糖结构的单一位点及蛋白质背景分析。 物种差异与直系同源物的局限性 这是进行体内实验时最令人头疼的问题。CD33相关Siglecs属于免疫系统中演化速度极快的基因簇，这种快速演化往往源于宿主与病原体之间持续的选择压力，导致不同物种的Siglecs在基因序列和功能上产生了巨大的分歧 [16]。特别值得注意的是，人类在唾液酸生物学上存在特异性事件——丢失了唾液酸Neu5Gc，这直接重塑了人类Siglec的配体识别谱。这意味着小鼠模型中的Siglec-F或Siglec-E
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