- ￥1980 - 4280
- LMAI Bio
- 美国/中国
- LM415Mu01
- 2025年07月17日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
避免反复冻融。2-8°C不超过一个月，-80°C不超过12个月
- 保质期：
1年
- 英文名：
Recombinant Elastin Microfibril Interface Located Protein 1 (EMILIN1)
- 库存：
30
- 供应商：
联迈生物
- 规格：
10µg/50µg/200µg/1mg/1g
| 来源 | 原核表达 |
| 宿主 | E.coli |
| 内毒素水平 | <1.0EU/µg(LAL法测定) |
| 亚细胞定位 | n/a |
| 片段与标签 | N-terminal His Tag |
| 缓冲液成份 | 磷酸盐缓冲液（pH7.4，含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.） |
| 性状 | 冻干粉 |
原理：
蛋白质的翻译效率很大程度上跟翻译起始效率有关，因此mRNA的5'端必须得很好翻译，最好不要有复杂的二级结构；通过PCR的方法在基因的5‘端引入简并序列，构建克隆，挑选多个克隆，诱导表达之，SDS-PAGE电泳检测表达量的高低，挑选高表达克隆进行测序。
实验步骤：
1.设计目的重组蛋白质的N端10-15个氨基酸的简并序列。
2.引物合成上述简并序列，同时设计合成目的基因反向引物。
3.PCR扩展目的基因，这样在目的基因的5‘端就引入了兼并序列，同时不改变氨基酸序列。
4.双酶切，插入到目标载体。
5.转化。
6.挑选多个克隆（比如100-200个）到1.5ml EP管，直接诱导表达（记得带上为改造克隆菌株的对照）。
7.SDS-PAGE检测。
8.挑选高表达的多个克隆，测序。
重组蛋白的特性
Immune tech的重组蛋白分为冻干粉和溶液态两种保存形式，原核细胞表达的重组蛋白为冻干粉状态，真核细胞表达的重组蛋白为溶液态保存，这样使得重组蛋白非常稳定，在-80℃条件下可保存数年。冻干粉在使用前需进行溶解，其中溶解的方法非常关键，因为溶解不好会降低蛋白的效用。溶液态保存的重组蛋白在冻融稀释使用过程中也需要仔细注意，这些都是用户在实际应用中经常遇到的问题。
（1）原核细胞表达的重组蛋白。Immune tech大肠杆菌表达的冻干重组蛋白，已经从包涵体中提纯，添加了蛋白保护剂，使用过滤后的无菌水作为复溶剂即可，复溶冻干蛋白100 μg，用86 μl的超纯水，轻轻摇晃使蛋白溶解，再用移液枪的枪头轻吹几下即可完全溶解，一定不能使用涡旋仪进行快速振荡或剧烈摇晃。
（2）真核细胞表达的重组蛋白。有活性的蛋白质不仅要转录和翻译，还要进行翻译后的加工，使得蛋白质的空间折叠方式维持正常，所以重组蛋白必须在真核细胞中进行，如哺乳动物细胞能够识别和去除基因中的内含子，对翻译后的蛋白质进行加工，这样表达的蛋白质具有生物活性。我们用溶液态来保存，保持了其良好的活性和稳定性。
（3）重组蛋白的保护剂。在冻干和储存过程中常用的保护剂或稳定剂有糖类，多元醇，聚合物，表面活性剂，某些蛋白和氨基酸等。我们通常加8%（质量比体积）的海藻糖和甘露醇作为冻干保护剂。海藻糖可明显阻止蛋白质二级结构改变以及冻干过程中蛋白质的伸展和聚集，甘露醇也是一种普遍应用的冻干保护剂和填充剂。
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文献和实验中科院高福院士课题组 2020 年发表了哪些重要的研究成果？
生长。相反，PD-1 或 PD-L1 的过表达抑制肿瘤细胞增殖和集落形成。此外，靶向 PD-1 或 PD-L1 的封闭抗体会促进细胞培养和异种移植物中肿瘤的生长。从机制上讲，PD-1 和 PD-L1 的协调激活了其主要的下游信号传导途径，包括 AKT 和 ERK1 / 2 途径，从而增强了肿瘤细胞的生长。这项研究表明，PD-1 / PD-L1 是潜在的肿瘤抑制因子，并且潜在地调节了对抗 PD-1 / PD-L1 治疗的反应，因此代表了最佳癌症免疫治疗方法的潜在生物标志物。 图源：PNAS 4、揭示沙粒
不只是 PD-1：CD96 正成为免疫治疗的下一个“必争之地”
[5]。这些结果提示，CD96 在肿瘤中的 NK 细胞调控中可能发挥关键作用。 2.3 CD96 在不同生理和病理环境中的表达差异 CD96 的表达不仅存在于肿瘤相关免疫细胞中，在特殊生理环境中也具有明显特征。例如，在早期妊娠母胎界面，CD96 高表达于蜕膜自然杀伤细胞，而 TIGIT 主要表达于 T 细胞，CD155 和 CD112 主要分布于间期基质细胞和滋养层细胞 [6]。CD96+ dNK 细胞通常表现为低细胞毒性、高黏附性表型，并参与母胎界面的免疫抑制效应 [6]。这说明，CD96 的表达特征与其功能
和细胞谱系转变，但肿瘤分泌产物的自分泌/旁分泌耐药机制尚不明确。该研究通过蛋白质组学筛查证实，耐药细胞分泌的神经生长因子（NGF）是介导耐药的关键因子，上游SRPK1激酶调控剪接因子SRSF1核积累，促进NGF前体mRNA选择性剪接产生翻译效率更高的proNGF-B亚型，导致NGF蛋白大量产生。分泌的NGF通过受体TrkA激活非经典MEK5-ERK5通路，使肿瘤细胞生存信号从被抑制的经典ERK1/2通路切换至ERK5通路，维持细胞增殖活性。临床研究显示复发肿瘤NGF水平显著高于原发灶，高表达与患者
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