- ￥1980 - 4280
- LMAI Bio
- 美国/中国
- LM288Mu01
- 2026年01月19日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
避免反复冻融。2-8°C不超过一个月，-80°C不超过12个月
- 保质期：
1年
- 英文名：
Recombinant Allograft Inflammatory Factor 1 (AIF1)
- 库存：
30
- 供应商：
联迈生物
- 规格：
10µg/50µg/200µg/1mg/1g
| 来源 | 原核表达 |
| 宿主 | E.coli |
| 内毒素水平 | <1.0EU/µg(LAL法测定) |
| 亚细胞定位 | n/a |
| 片段与标签 | N-terminal His Tag |
| 缓冲液成份 | 磷酸盐缓冲液（pH7.4，含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.） |
| 性状 | 冻干粉 |
原理：
蛋白质的翻译效率很大程度上跟翻译起始效率有关，因此mRNA的5'端必须得很好翻译，最好不要有复杂的二级结构；通过PCR的方法在基因的5‘端引入简并序列，构建克隆，挑选多个克隆，诱导表达之，SDS-PAGE电泳检测表达量的高低，挑选高表达克隆进行测序。
实验步骤：
1.设计目的重组蛋白质的N端10-15个氨基酸的简并序列。
2.引物合成上述简并序列，同时设计合成目的基因反向引物。
3.PCR扩展目的基因，这样在目的基因的5‘端就引入了兼并序列，同时不改变氨基酸序列。
4.双酶切，插入到目标载体。
5.转化。
6.挑选多个克隆（比如100-200个）到1.5ml EP管，直接诱导表达（记得带上为改造克隆菌株的对照）。
7.SDS-PAGE检测。
8.挑选高表达的多个克隆，测序。
重组蛋白的特性
Immune tech的重组蛋白分为冻干粉和溶液态两种保存形式，原核细胞表达的重组蛋白为冻干粉状态，真核细胞表达的重组蛋白为溶液态保存，这样使得重组蛋白非常稳定，在-80℃条件下可保存数年。冻干粉在使用前需进行溶解，其中溶解的方法非常关键，因为溶解不好会降低蛋白的效用。溶液态保存的重组蛋白在冻融稀释使用过程中也需要仔细注意，这些都是用户在实际应用中经常遇到的问题。
（1）原核细胞表达的重组蛋白。Immune tech大肠杆菌表达的冻干重组蛋白，已经从包涵体中提纯，添加了蛋白保护剂，使用过滤后的无菌水作为复溶剂即可，复溶冻干蛋白100 μg，用86 μl的超纯水，轻轻摇晃使蛋白溶解，再用移液枪的枪头轻吹几下即可完全溶解，一定不能使用涡旋仪进行快速振荡或剧烈摇晃。
（2）真核细胞表达的重组蛋白。有活性的蛋白质不仅要转录和翻译，还要进行翻译后的加工，使得蛋白质的空间折叠方式维持正常，所以重组蛋白必须在真核细胞中进行，如哺乳动物细胞能够识别和去除基因中的内含子，对翻译后的蛋白质进行加工，这样表达的蛋白质具有生物活性。我们用溶液态来保存，保持了其良好的活性和稳定性。
（3）重组蛋白的保护剂。在冻干和储存过程中常用的保护剂或稳定剂有糖类，多元醇，聚合物，表面活性剂，某些蛋白和氨基酸等。我们通常加8%（质量比体积）的海藻糖和甘露醇作为冻干保护剂。海藻糖可明显阻止蛋白质二级结构改变以及冻干过程中蛋白质的伸展和聚集，甘露醇也是一种普遍应用的冻干保护剂和填充剂。
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文献和实验错综复杂，参与了机体许多病理生理反应过程。内毒素可以诱发机体炎症因子的过度释放，导致系统性炎症反应综合症、多器官衰竭，死亡率很高，占死因的50－70%。战友sunfeisunfei曾经试过从大肠杆菌中提取粗制内毒素，用的方法是反复加热、冻存法，但是效果不是理想。具体方法是将大肠杆菌在2个大气压下（因具体条件限制，我只是在1.2个气压左右），蒸汽灭菌30min，后－20度冻存24小时，反复3次，即可。战友ljksbs介绍，目前，市面上有卖从转染后的质粒DNA溶液中提取内毒素的试剂盒（因为，转染后质粒DNA溶液
失败[20,45]。 癌症疫苗设计的额外部分是在这篇评论之外的，那就是抗原的呈递模式。这些因素包括分子限定和细胞基础佐剂，炎症因子，调整APC的药物和通过TNF感受体家族表面蛋白的T细胞感应，DNA的选择和病毒基础疫苗带有者（在别处曾有广泛的评论）[4]。 疫苗导致T细胞免疫的正确评价 迄今为止，病人出现疫苗引起的应答和临床应答相联合的还是缺乏的。在这些研究里对接种实验的免疫评价方法有了清楚的规划。在当前的文献和我们自己实验里有效数据的基础上，我们提出疫苗引起抗肿瘤免疫的测试
了免疫监视学说。免疫监视学说的中心思想是：免疫系统具有一个十分完备的监视功能，能精确地分辨\"自己\"和\"非己\"的成分；它不仅能清除外界侵入的各种微生物，排斥同种异体移植物，而且还能消灭机体内突变的细胞，防止肿瘤的生长，保护机体的健康。每当免疫监视功能由于这种或那种原因被削弱时，便为肿瘤的发生提供了有利条件；如果机体不具备免疫监视功能，人类的肿瘤发病率会大大提高。 临床也得到了一些支持的证据。原发和继发的免疫缺陷病人（如：艾滋病病人、为了防止移植排斥反应而应用免疫抑制剂的肾移植病人等）肿瘤
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