- ￥1980 - 4280
- LMAI Bio
- 美国/中国
- LM003Mu01
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
避免反复冻融。2-8°C不超过一个月，-80°C不超过12个月
- 保质期：
1年
- 英文名：
Recombinant Apolipoprotein B (APOB)
- 库存：
30
- 供应商：
联迈生物
- 规格：
10µg/50µg/200µg/1mg/1g
| 来源 | 原核表达 |
| 宿主 | E.coli |
| 内毒素水平 | <1.0EU/µg(LAL法测定) |
| 亚细胞定位 | n/a |
| 片段与标签 | N-terminal His Tag |
| 缓冲液成份 | 磷酸盐缓冲液（pH7.4，含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.） |
| 性状 | 冻干粉 |
原理：
蛋白质的翻译效率很大程度上跟翻译起始效率有关，因此mRNA的5'端必须得很好翻译，最好不要有复杂的二级结构；通过PCR的方法在基因的5‘端引入简并序列，构建克隆，挑选多个克隆，诱导表达之，SDS-PAGE电泳检测表达量的高低，挑选高表达克隆进行测序。
实验步骤：
1.设计目的重组蛋白质的N端10-15个氨基酸的简并序列。
2.引物合成上述简并序列，同时设计合成目的基因反向引物。
3.PCR扩展目的基因，这样在目的基因的5‘端就引入了兼并序列，同时不改变氨基酸序列。
4.双酶切，插入到目标载体。
5.转化。
6.挑选多个克隆（比如100-200个）到1.5ml EP管，直接诱导表达（记得带上为改造克隆菌株的对照）。
7.SDS-PAGE检测。
8.挑选高表达的多个克隆，测序。
重组蛋白的特性
Immune tech的重组蛋白分为冻干粉和溶液态两种保存形式，原核细胞表达的重组蛋白为冻干粉状态，真核细胞表达的重组蛋白为溶液态保存，这样使得重组蛋白非常稳定，在-80℃条件下可保存数年。冻干粉在使用前需进行溶解，其中溶解的方法非常关键，因为溶解不好会降低蛋白的效用。溶液态保存的重组蛋白在冻融稀释使用过程中也需要仔细注意，这些都是用户在实际应用中经常遇到的问题。
（1）原核细胞表达的重组蛋白。Immune tech大肠杆菌表达的冻干重组蛋白，已经从包涵体中提纯，添加了蛋白保护剂，使用过滤后的无菌水作为复溶剂即可，复溶冻干蛋白100 μg，用86 μl的超纯水，轻轻摇晃使蛋白溶解，再用移液枪的枪头轻吹几下即可完全溶解，一定不能使用涡旋仪进行快速振荡或剧烈摇晃。
（2）真核细胞表达的重组蛋白。有活性的蛋白质不仅要转录和翻译，还要进行翻译后的加工，使得蛋白质的空间折叠方式维持正常，所以重组蛋白必须在真核细胞中进行，如哺乳动物细胞能够识别和去除基因中的内含子，对翻译后的蛋白质进行加工，这样表达的蛋白质具有生物活性。我们用溶液态来保存，保持了其良好的活性和稳定性。
（3）重组蛋白的保护剂。在冻干和储存过程中常用的保护剂或稳定剂有糖类，多元醇，聚合物，表面活性剂，某些蛋白和氨基酸等。我们通常加8%（质量比体积）的海藻糖和甘露醇作为冻干保护剂。海藻糖可明显阻止蛋白质二级结构改变以及冻干过程中蛋白质的伸展和聚集，甘露醇也是一种普遍应用的冻干保护剂和填充剂。
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文献和实验作者：北京协和医院检验科 程歆琦 张时民 载脂蛋白是脂蛋白中的蛋白部分，在脂蛋白代谢中具有重要的生理功能。载脂蛋白B(ApoB)是低密度脂蛋白(LDL)的主要载脂蛋白。ApoB能够稳定LDL的结构，并识别LDL受体，参与转运内源性甘油三酯和胆固醇。 测定方法 免疫比浊法是目前最常用的方法，分为免疫透射比浊法和免疫散射比浊法。ApoB特异性抗体与血清中的ApoB结合形成抗原
载脂蛋白E 【参考范围】免疫透射比浊法：20～60mg/L. 【影响因素】1.样品采集及分离注意事项同TCH测定。 2.总胆红素＞68.4μmol/L时，对结果有影响。 3.Hb浓度＞20g/L时，对测定结果有影响。 4.高脂血清对检测结果也会有影响。 【临床意义】1.载脂蛋白E是一种富含精氨酸的碱性蛋白，存在于血浆CM、VLDL 及其残粒中，β-VLDL中含ApoE的量高于VLDL，一部分ApoE在血液中可与ApoAⅡ形成复合体。ApoE可在多种组织中合成，主要
作者：李琳，杨镍，何广源，全红兵 ［摘 要］ 目的：对中生北控生物科技股份有限公司生产的载脂蛋白AI、B液体双试剂的性能进行评价。方法：采用中生载脂蛋白AI、B液体双试剂，用免疫透射比浊法测定质控血清和住院病人血清载脂蛋白AI（ApoAI）及载脂蛋白B(ApoB)，分析中生载脂蛋白AI、B液体双试剂的精密度与稳定性、准确度、性线，并与英国Randox试剂作对照。结果：中生的载脂蛋白AI、B液体试剂测定均值偏差小于2％；对高、低
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