- ￥680 - 2280
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- ATCC/国内细胞库
- LM-1091
- 2025年11月21日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
10的6次方个
- 细胞类型：
详见说明书
- 品系：
具体详细询问公司细胞培养专家
- 相关疾病：
具体详细询问公司细胞培养专家
- 物种来源：
人、大鼠、小鼠等其它动物
- 免疫类型：
详见说明书
- 器官来源：
人、大鼠、小鼠等其它动物
- 运输方式：
常温运输/干冰运输
- 年限：
代数：3-4代
- 规格：
5×10⁵cells/T25培养瓶
请仔细阅读本操作说明及相应的细胞说明书。
- 收货
- T25是用T25细胞培养瓶直接发货的形式。收到细胞后，拆开包装T25瓶的自封袋，不拆封口膜，表面喷75%酒精消毒后显微镜观察细胞状态（有条件可以拍下此时细胞照片）。将细胞放入37度培养箱平衡两小时以上，再处理细胞。首先将T25中培养基取出装好备用，如细胞密度高于80%，可以直接消化传代，相反则加入5-6mL培养基放回培养箱继续培养即可。
- 离心管是用15mL离心管发货的方式，只用于悬浮细胞发货。收到细胞后消毒处理及平衡参考上述T25瓶。平衡完成后，离心（1000rpm，3min）收集细胞，弃上清，用新的培养基重悬细胞并接种至培养瓶或皿中，放回培养箱继续培养。
- 血清是用牛血清直接发货的形式，是细胞冻存管加入含有细胞的牛血清的形式。收到细胞后，拆开自封袋，冻存管表面喷75%酒精消毒后，在超净台中打开冻存管，将细胞用1mL枪头轻轻几次以将细胞吹匀，接种至含有预热的培养基的培养瓶或皿中，显微镜下观察细胞是否吹匀，如果没有吹匀，继续吹匀至3-5个细胞一团，放回培养箱继续培养。
- 干冰是用本公司冻存液冻存细胞后，直接用干冰将冻存的细胞冷冻发货的形式。收到细胞后按照细胞复苏的步骤操作即可。
- 如不能在收到细胞后及时操作细胞，T25及离心管发货的细胞可以消毒后在37度过夜，血清发货的细胞可以在室温下静置1-2天（注意不要放冰箱），干冰发货的可以在确认干冰未完全升华时将细胞直接放回液氮或者-80度冰箱，若干冰完全升华，请即刻复苏细胞。
- T25瓶及离心管在培养箱平衡是为了让细胞尽快适应培养箱环境，同时使部分因运输导致脱落的细胞贴壁，此步骤非常必要。T25瓶如果在显微镜下可以看到部分不贴壁的细胞，可以收集上清后离心（1200rpm，5min）后，将沉淀用新的培养基重悬后接种至新的培养瓶或皿中。
- 部分细胞在运输过程中，由于不断震荡及环境不适，可能导致细胞破碎死亡，从而使培养基中漂浮很多细胞碎片及颗粒状物质。这种情况下，平衡后，贴壁细胞用PBS洗两遍在加新的培养基培养或者传代至新瓶中培养即可；悬浮细胞可以离心（1000rpm，3min）收集细胞，并用PBS重悬后再离心一次，再用新的培养基重悬并接种细胞。
- 细胞培养及传代
- 细胞请于细胞培养箱中培养，大部分细胞是37℃，5% CO2，湿度100%环境下培养的。有极少部分细胞培养条件不一致，请仔细阅读相应的细胞说明书，使用正确的培养基及培养条件；
- 细胞于培养瓶或皿中培养，加入适量说明书上标注的细胞相应完全培养基（一般液面高度2-3mm即可）。
- 细胞培养至密度达80%以上时即可传代，先将细胞培养基取出3mL用15mL离心管装好，其他培养基全部吸干舍弃；
- 培养皿加入2-3mL无菌PBS，轻轻晃动皿，使PBS浸洗到皿底所有部位，PBS吸干舍弃；
- 加入1mL胰酶，轻轻晃动皿，使胰酶浸没到皿底所有部位，将皿盖好放入培养箱中消化；
- 若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至不贴壁为止；
- 将细胞悬液均匀分成几份，分别加入不同培养皿中，补加新培养基后放回培养箱培养。
- 部分细胞在传代后时，会有以下现象：细胞内会有黑色小点、细胞间隙有些颗粒物、培养基漂浮一些死细胞或者细胞长的极慢。出现以上现象时，可以咨询本公司技术人员此现象是否正常及相关处理方式，不要频繁换液，大多数细胞1周换液2-3次即可。
- 细胞碎片较多、背景较脏时，贴壁细胞用PBS漂洗两次、悬浮细胞打散后低速离心（900rpm，3min）能有效改善。
- 传代比例建议1:2-1:3，长得比较快的细胞可以1：3，比较慢的按1:2传代。传代后，建议不要使用传代前培养所使用的培养基，会有大量细胞碎片甚至导致细胞死亡的风险。
- 细胞状态不好或者生长极慢的时候，可以通过增加血清浓度调整细胞状态及生长速度。
- 请不要随意更换培养基，因实验需要，可以逐步驯化。
- 细胞冻存
- 冻存液配方：建议使用92%FBS+8%DMSO，客户自身实验室所使用的冻存液也可以适用，血清浓度不低于30%，DMSO含量不高于12%即可。
- 收集细胞按照以上细胞传代步骤操作至第④步后，将细胞悬液收集入15mL离心管，离心（1200rpm，3min）；
- 弃上清，加入配制好的冻存液，重悬细胞，悬液加入无菌冻存管中；
- 将冻存管在4℃静置10min，后将之正置于室温下的厚壁有盖泡沫盒中，盖紧盒盖，放入-80℃冰箱过夜，第二天放入液氮即可长期保存。
- 10cm皿的细胞长满一般可以冻存2-3管，部分细胞长的比较慢，冻存的细胞密度要稍微大点，以防止复苏后生长困难。
- 冻存液中含的DMSO请使用细胞级DMSO，同时浓度不要太高。部分细胞在10%DMSO条件下冻存会死亡，所以DMSO浓度5%-8%是比较推荐的浓度。
- 细胞冻存及复苏遵循慢冻快融的原则，即冻存时温度不能急剧下降，应控制温度缓慢下降。复苏时应快速融化，融化后尽快加入培养基中。
- 冻存时建议设置冻存检测，即取0.2-0.3mL的冻存液重悬的细胞于一个冻存管中，与正常体积冻存的细胞共同冻存，至液氮后复苏检查冻存结果。冻检合格前，留一部分细胞继续培养，以防万一。
- 细胞复苏
- 将冻存细胞从液氮中取出后迅速放入37℃温水中摇晃融化，时间1min左右；
- 于1000rpm离心1min，弃冻存液，加入1mL新的完全培养基重悬细胞；
- 接种至新培养瓶或皿中，补加足量完全培养基，放入培养箱中培养。
- 复苏过程应迅速操作，时间不能太长。
- 复苏过程中注意污染，小心操作。
细胞培养需要耐心与细心，希望您能获得一个满意结果！
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文献和实验Neurite Degeneration in Human Neuronal SH-SY5Y Cells as an Indicator of Axonopathy
alternatives to the animal models for extrapolation of toxicity on humans. The characteristics, culture conditions and usefulness of the human neuroblastoma cell line SH-SY5Y as a model for axonopathy are presented in this chapter
导致无法捕获时间序列的变化，导致重要发现被忽略。 由于这些局限性，我们认为，直接和时间评估细胞增殖/细胞毒性的方法的发展对于使用培养细胞的研究领域是重要的。 试验大纲 为了验证 Evident Provi CM20 培养监测系统的细胞增殖/毒性评估能力，我们进行了以下两项检测，以将 CM20 系统与传统检测 (WST-8) 进行比较： 抗癌药物 (5-FU) 对人肺腺癌 A549 细胞的细胞死亡检测 神经毒素 (6-OHDA) 对人神经母细胞瘤 SH-SY5Y 细胞的细胞死亡检测
和靶蛋白 Y 来自细胞裂解液，那么裂解液配方建议选择非变性裂解液，NaCl 浓度＜150 nM，SDS 浓度＜0.2% 洗涤液---去除非特异结合蛋白，顾及互作蛋白间的结合强度优化配方 如果互作蛋白作用较弱，建议选择 PBS 或者 TBS 进行洗涤 通常会加入去垢剂降低背景，比如 0.5-1% NP-40/TritonX-100/CHAPS 如果效果还不佳，还可增加盐离子浓度，比如＜250 nM NaCl，以及加入1-2 nM DTT/β-ME 还可增加洗涤次数，比如 3-5 次 洗脱液---
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