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低温运输
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长期
- 英文名:
DNA Gyrase(E.coli)
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636
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北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产供应DNA促旋酶哪里买,我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂,价格优惠,欢迎广大科研工作者垂询订购。
名称:DNA促旋酶哪里买
产地:国产|进口
编号:BTN130651
品牌:百奥莱博
英文名:DNA Gyrase(E.coli)
规格:100U
DNA促旋酶(E.coli)是一种II型拓扑异构酶,在ATP存在下向DNA中引入负超螺旋。促旋酶全酶是由两个gyrA亚基(97 kDa)和两个gyrB(90kDa)亚基组成的异源四聚体。本产品主要用于向DNA引入负超螺旋。其反应原理图如下:

储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
活性定义:1单位是指在30μl反应体系中,37℃条件下,30分钟内催化超过95%的0.5μg底物转变为超螺旋质粒所需的酶量。DNA超螺旋化通过不含*化乙啶的琼脂糖凝胶电泳来检测。
热灭火:65℃加热20分钟。
DNA促旋酶哪里买极具性价比,此外,我公司正火爆促销以下产品:
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DNA促旋酶哪里买关键词:DNA Gyrase(E.coli),BTN130651,DNA促旋酶
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DNA促旋酶哪里买关键词:DNA Gyrase(E.coli),BTN130651,DNA促旋酶
·TB培养基
编号:BTN100824
英文名称:Terrific Broth Medium,Powder
规格:250g
TB培养基是由美国科学家Tartof和Hobbs在1987年开发,它不比LB培养基多20%的peptone和380%的yeast extract。含磷酸缓冲液,0.4%glycerol。同样培养条件下能得到更多菌体,常用于质粒制备和蛋白质表达。本产品加水灭菌后即得液体培养基,即可使用。配制一升液体培养基需要25g本产品。
储存条件:常温运输及保存,有效期两年。
·无缝克隆试剂盒
编号:BTN160680
英文名称:Seamless Cloning and Assembly Kit
规格:25次
无缝克隆是一种简单、快速、高效的DNA 定向克隆技术,该技术突破传统,不依赖内切酶和连接酶,不受限制性内切酶酶切位点的限制,利用同源重组的原理,可将任何DNA片段克隆至任何载体的任何位点。反应及转化时间短,阳性率达95%以上。
产品特点:
1. 简单、高效地定向克隆DNA片段。
2.可同时定向克隆两个或多个DNA片段。
3. 不依赖内切酶和连接酶,不受限制性内切酶酶切位点的限制。
4. 省时,反应时间加转化时间短至20分钟。
5. PCR产物(仅有目的条带、无非特异条带和引物二聚体)可直接进行重组反应,无需纯化。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 2×Seamless Mix | 125μl |
| 阳性对照DNA片段I | 10μl |
| 阳性对照DNA片段II | 10μl |
| 阳性对照线性化载体 | 10μl |
| 超纯水 | 1ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
使用方法:
1. 线性化载体的制备:
可通过单酶切、双酶切或PCR扩增的方法来制备。(如果线性化不彻底,将会导致阴性克隆的产生,推荐使用双酶切或PCR扩增的方法。)
2. DNA片段的制备:
1)DNA片段可通过PCR扩增或酶切的方法制备,PCR扩增片段无需纯化即可用于重组反应。
2)PCR扩增法引物设计原则:
A.引物的3´端必须包含18-50个能与模板DNA 结合的碱基序列,以便PCR扩增出目的DNA片段。
B.引物的5´端必须包含15-80个与线性化载体末端同源的碱基序列,以便PCR扩增片段能与线性化载体进行重组反应。
3. 重组反应:
1)按照如下体系操作:
2)50℃反应15分钟,然后将离心管放置于冰上。如当天不进行转化实验,请将连接产物放-20℃保存。
注:线性化载体建议使用20-60 ng,DNA片段按照与线性化载体摩尔比3:1使用。
4.转化:
1)取5μl连接液至50-100μl 刚刚融化的感受态细胞中,轻轻混匀,冰浴2-30分钟。
2)42℃水浴热激30秒。
3)立即放置于冰上静置2分钟。
4)加入300-500μl 无菌SOC或LB培养基(不含抗生素),37℃,200-250rpm 振荡培养60分钟。
5)吸取 200μl菌液涂板,为得到更多克隆,可先3000 g离心2分钟,弃掉部分上清,用移液器轻吹菌体,至充分悬浮,取全部菌液涂板,然后37℃培养过夜(12-16小时)。
5. 用菌落PCR、直接测序或其他方法鉴定重组子。
6. 阳性对照反应(可选)
将本试剂盒提供的阳性对照DNA片段和线性化载体按如下体系操作:
阳性对照DNA片段I(600bp,20 ng/μL)
或阳性对照DNA片段I(900bp,30ng/μL)
| 1μl | |
| 阳性对照线性化载体(2.8kb,30ng/μL) | 1μl |
| 2×Seamless Mix | 5μl |
| 超纯水 | 3μl |
50℃反应15分钟,然后按照步骤4转化涂板后用菌落PCR、直接测序或其他方法鉴定阳性重组子。
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文献和实验为存在于细菌中 2型拓扑异构酶的一种。可将双螺旋 DNA的股解开导入负的超螺旋(使 W数变负)的独特的酶。大肠杆菌的促旋酶为由 2种多肽链各二分子所形成的四聚体,其中的二种肽链则分别由基因 Gyr A和 Gyr B所产生,分子量各为 11.5万和 9.5万,拓扑学异构化是通过双链的暂时切断而进行,作为其中间产物,在四核苷酸对分离的地方形成裂缝,酶分子与 3′ -OH游离端和 5′ -磷酸末端形成共价键的形式。此酶的催化作用有是:在 ATP的存在下,使弛缓型的闭环状 DNA
的单个多肽链所成)及各种真核细胞中存在的切断 -结合酶( nicking-closing enzyme,分子量约 6万 5千— 7万的及分子量约 10万的)。Ⅱ型拓扑异构酶,有存在于细菌中的 DNA促旋酶、噬菌体 T4 的拓扑异构酶Ⅱ以及真核细胞中依赖 ATP的拓扑异构酶Ⅱ等。另外,噬菌体λ的 irt基因产物和噬菌体φ X174的基因 A的产物等也具有切断—结合酶的活性,可认为是拓扑异构酶之一种。Ⅰ型拓扑异构酶不需要 ATP的能量而催化异构体化,作为反应的中间产物,在原核生物来说是游离型的 5′
position:48 min 功能:gyrA基因表达DNA促旋酶A亚基。DNA促旋酶在DNA复制时具有使DNA解旋和回旋的作用。萘啶酮酸(Nalidixic acid)、4-喹啉(4-Quinoline)等抗生素抑制DNA促旋酶的活性是通过与促旋酶复合体 (A2B2)中的A亚基的结合实现的。gyrA基因的变异使DNA促旋酶A亚基不能正常表达,萘啶酮酸和荧光喹啉等失去结合目标,从而使该基因型的菌株具有了对萘啶酮酸(Nalr) 和荧光喹啉的抗性。 rpsL(Ribosomal protein small
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