北京现货核酸内切酶V厂家

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京现货核酸内切酶V厂家是高品质的工具酶产品，由北京百奥莱博供应，用于生化研究，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多核酸内切酶V等工具酶产品请联系我司咨询订购。

名称：北京现货核酸内切酶V厂家
编号：BTN130640
品牌：百奥莱博
英文名：Endonuclease V
规格：250U
核酸内切酶V是在E.coli中发现的一种DNA修复酶。它识别DNA中的脱氧次黄嘌呤核苷，即脱氧腺苷的去*基产物。核酸内切酶V，也称为脱氧次黄嘌呤核苷3´内切酶，识别含脱氧次黄嘌呤核苷(无论配对与否)的双链或单链DNA 。也可识别含脱碱基(AP)位点或尿素、碱基错配、插入/缺失错配、发夹结构、未配对loop环、折叠flaps和类 -Y型结构的DNA，但是识别后者的能力不如前者。普遍认为核酸内切酶V发挥DNA修复功能时，还需另外一种蛋白的存在，因为它不能切除 DNA上的脱氧次黄苷或受损碱基。核酸内切酶V对错配脱氧次黄嘌呤核苷3´端第二个或第三个磷酸二酯键进行切割，切割第二个磷酸二酯键的效率是95%，第三个磷酸二酯键的效率是5%，产生一个3´羟基、5´磷酸的切刻。

产品特点：
➤ 切割错配；
➤ 切割含脱氧次黄嘌呤核苷的寡核苷酸，对含错配碱基的寡核苷酸亲和力较弱。

产品组成：

 

成分	规格
核酸内切酶V(10000 U/mL)	25μL
10×Buffer	1ml
使用手册	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

热失活：65℃，20分钟。

活性定义：1单位指在10μl反应体系中，37℃条件下1小时内，能够切割1pmol含单脱氧次黄嘌呤核苷位点的34bp寡核苷酸双链所需要的酶量。

脱氧次黄嘌呤核苷位点的制备：合成34bp寡核苷酸双链时，在其一条链的中间掺入脱氧次黄嘌呤核苷(dI)碱基。

北京现货核酸内切酶V厂家极具性价比，此外，我公司正火爆促销以下产品：

·YPG液体培养基
编号：BTN130896
英文名称：YPG Liquid Medium
规格：250mL
YPG(YEPG；YEP-甘油)培养基是一种混合培养基，包含有不支持阴性菌落或pet变异的不发酵碳碳源-甘油，其他成分和YPD培养基相同。

储存条件：常温运输及保存，有效期两年。

·单细胞RNA扩增试剂盒
编号：BTN130551
英文名称：Single Cell RNA Amplification Kit
规格：80次
一个哺乳动物单细胞一般只有约10pg的总RNA，其中的mRNA 只有1-5%(约10E5-10E6个分子),因此直接用单细胞进行mRNA扩增具有极大的技术难度。本公司进过精心研究，整合最新技术，开发出了可以直接用单个细胞进行mRNA扩增的试剂盒，其原理如下(仅以扩增mRNA 链为例)：


产品特点：
1. 双向，既可用于制备正义的mRNA，也可用于制备反义的aRNA(antisense RNA)或cRNA(complimenary RNA)。
2. 直接用单细胞裂解液进行反应，免RNA提取，整个过程只需要半天。
3.适用于多种单细胞，包括卵细胞、干细胞、FACS分离细胞等单细胞，还可用于培养细胞和胚胎等实体租组织(需要单细胞化)，也可以使用10pg-10ng 纯化的总RNA作为模板。
4. 假阴性和假阳性率均小于6%，RNA扩增成功率为90%。
5. 所得mRNA或aRNA(cRNA)可以直接用于后续的RT-PCR、芯片杂交、表达谱分析等实验。
6. 本试剂盒足够对80个单细胞进行单细胞RNA扩增。
 

成分	规格
P1(cDNA一链合成引物)	360μl
P2(cDNA 二链合成引物)	360μl
P3(T7-cDNA 二链合成引物)	100μl
溶液A(4×细胞裂解液)	100μl
溶液B(RI)	10μl
溶液C(逆转录酶)	40μl
溶液D	10μl
溶液E	10μl
溶液F	150μl
溶液G(TdT)	60μl
超纯水	10μl
PCR 3.0	9ml
转录预配液，2×	500μl
T7 RNA聚合酶	50μl
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
强烈建议首次使用本产品前，先预实验，用纯化好的任何总RNA 10倍系列稀释，直到浓度为25pg/μL，然后用0.4μL(即10pg RNA，相当于单个细胞的总RNA量)按本操作说明书进行扩增，一次需平行做4-10个重复。
下列步骤仅用于制备mRNA，如果需要制备aRNA(cRNA)，则需要把P1和P2引物对换，其他成分不需要做任何改动。

一：新鲜准备工作液
见手册左侧各表，据此配制的的各工作液足够扩增10个单细胞用。如果一次实验没有10个细胞，工作液的量仍需按10个细胞的用量新鲜配制，冰上放置时间不能超过1小时。

二：准备单细胞悬液
如何制备单个细胞取决于实验样品和所能使用的仪器设备，此处所列步骤仅供分离单个培养细胞的参考，本试剂盒不提供相关试剂。对其他材料(如干细胞克隆、2-8细胞胚胎、胚囊、胚胎组织等)用户需自行选用合适的制备单细胞的方法。对已经处于单细胞悬浮状态的细胞(如FACS分离细胞、卵细胞等)，则可以跳过此步直接进入下步操作)：
1. 按常规胰酶方法处理培养细胞或组织，将细胞重悬于培养基中并计数。
2.转移100-4000个细胞到离心管中，400g离心4分钟，弃上清。
3. 将细胞沉淀重悬于50μL自备PBS中，使其终浓度为2-80个细胞/μL，所得细胞悬液可直接用于下面的反应。本方法一个管中可以处理1-40个细胞，但这些细胞必须是先分离成独立细胞的，不能是未分离的细胞团。

三：cDNA 合成和PCR扩增
4. 标记10个0.5mL PCR管(10 号设为阴性对照)，按下表加入各成分：

成分	1-10 号样品管
RT工作液(按下表1 配)	每管加4.0μL，共10管
细胞样品(来于第3 步)或10pg-10ng/μL纯化的RNA	1-19号加0.5μL样品(1-40个细胞)，10号用0.5μL水代替
·70℃水浴90秒，转冰上放置1分，短暂离心
溶液C(试剂盒提供)	每管加0.5μL，共10管
·总反应体系为5μL，37℃水浴90m，70℃水浴10m，冰上放置1分钟，短暂离心
Tailing预处理液(按下表2 配)	每管加1μL，共10管
·短暂离心后PCR 仪上37℃ 30m，再80℃ 25m，离心后放冰上1m
Tailing工作液(按下表3配)	每管加6μL，共10管
·短暂离心后37℃15分钟，70℃10分钟，放冰上1分钟
·上步反应管中每个取3μL分别加入2个新PCR管做模板，共分得20个PCR管。每个反应管中剩约6μL，作未PCR对照放-20℃待用。
引物+水混合液(按下表4 配)	每个PCR管加12μL，共20管
PCR Mix 3.0	每管加15μL，共20管
·按(95℃3分，50℃2分，72℃3分)参数循环1次，冰上放1分
P2	每管加1.5μL，共20管
自备PCR级石蜡油	若PCR 仪无热盖，则每管加50μL
·(95℃30秒，67℃1分，72℃3分，每次循环后在72℃的时间增加6秒)循环20次，4℃放置

5. 将模板来于一个样的2 管PCR产物汇集，20 管汇集后将得10 管(对应于10个样)，每管30μL。只有循环数在24次以上时电泳才能检测到PCR产物，故此步不需要电泳检测。
6. 用自备的PCR产物纯化回收试剂盒回收PCR产物，去除残留的引物，50μl 洗脱DNA，产物放-80C 长期保存。
7. 10个样和其对应的未PCR 对照(共20个样)各取0.5μL 为模板进行PCR或定量PCR分析，判断靶基因在哪个样品中得到了扩增和扩增效率如何。没有靶基因的可以选择看家基因。客户需自备相关引物和试剂。

四：制备含T7启动子的模板(下列操作只针对10个样品中的一个)
8. 选一个靶基因得到扩增的DNA样品(第6 步回收所得)，各取1μl 加到10个PCR 管中，各加29μl 新鲜配制的PCR Mix(按下表5 配)，混匀后按以下参数扩增1次(95℃ 5m30s，64℃ 1m，72℃ 5m18s)，再按以下参数扩增8次(95℃ 30秒，67℃ 1m，72℃ 5m18s，每次循环后将72℃延伸时间增加6秒)，PCR结束后在72℃保温10m。
9. 汇集10 管PCR反应液(共300μl)，用自备的PCR产物纯化回收试剂盒回收PCR产物，30μl 洗脱。
10. 将30μL洗脱DNA全部上样到琼脂糖胶上进行电泳(只要电泳10分钟即可，否则胶体积太大，回收效率低)，360nm紫外灯下切胶(250bp以上区域)，最后用30-50μL 洗脱。此步所得PCR片段无250bp以下的非特异扩增产物，可直接用于后续体外转录。

五：T7 体外转录：请按该试剂盒的使用说明书操作(本产品含体外转录试剂)。

表1:RT工作液

成分	用量
超纯水	30.8μl
溶液A	11μl
溶液B	1.1μl
P1稀	1.1μl
合计	44μl

注：P1 稀是将1μl P1加入到100μL超纯水新鲜配制后得到，需新鲜配制。用户可在此步加入自备的内参，但超纯水的用量要相应减少。如加入2μL内参，则少加2μL 水。

表2:Tailing预处理液

成分	用量
超纯水	8.8μl
溶液D	1.1μl
溶液E	1.1μl
合计	11μl

表3:Tailing工作液

成分	用量
超纯水	42.9μl
溶液F	16.5μl
溶液G	6.6μl
合计	66μl

表4:引物+水混合液

成分	用量
超纯水	231μl
P1	33μl
合计	254μl

表5:PCR Mix

成分	用量
超纯水	132μl
P1	11μl
P3	11μl
PCR 3	165μl
合计	319μl

北京现货核酸内切酶V厂家关键词：核酸内切酶V,Endonuclease V,BTN130640

BL1429 20×TBS
PY02-292  MUG营养琼脂(NA－MUG)  1000ml，用于生活饮用水及水源中的大肠埃希氏菌的测定(滤膜法)
N,N-二甲基甘*酸盐*(代"酸")盐 (R)-(?)-Leucinol 2491-06-7
BTN130301 DNA甲基化修饰试剂盒 Embedded Bisulfite Modification Kit
ARB12057 大鼠大内皮素(Big ET)ELISA检测服务 Rat big endothelin,big et ELISA KIT
L-组*酸盐*(代"酸")盐 Mouse percoll 645-35-2
*亚磺酸* Ribostamycin Sulfate salt 873-55-2
1-(2-吡*(代"啶")偶氮)-2-*酚 Pyronin Y 85-85-8
ARB14061 鲑鱼补体蛋白4(C4)elisa测定使用说明书 Fish c4 ELISA KIT
4-苄基*基-7-硝基*(代"*")并氧杂恶二唑 Carmine 18378-20-6
ARB12357 大鼠环磷酸鸟苷(cGMP)elisa检测操作说明书 Rat cyclic guanosine monophosphate,cgmp ELISA KIT
ARB12049 大鼠二*氧化酶(DAO)ELISA代测服务 Rat diamine oxidase,dao ELISA KIT
BL0625 *甲脒-琼脂糖凝胶6B Benzamidine Sepharose 6B
DN1101 细菌基因组DNA快速提取试剂盒
三十烷醇 L-Aspartic acid 593-50-0
北京现货核酸内切酶V厂家关键词：核酸内切酶V,Endonuclease V,BTN130640

DN1301 中量/大量细菌基因组DNA提取试剂盒
F030832 BIOTIN标记小鼠抗猪IgG抗体 Monoclonal Mouse Anti-Pig IgG*BIOTIN
L-赖*酸乙酯2盐*(代"酸")盐 Enteropeptidase 3844-53-9
ARB10609 人血红素氧合酶2(HO-2)Elisa定量检测 Human heme oxygenase 2,ho-2 ELISA KIT
FMOC-D-色*酸 Quercetin 86123-11-7
HC0141 螺旋口不锈钢酒精灯(防泄漏防爆)
SJ0672 吉姆萨染色液 
PY01-165  亚甲基蓝  ind  25克  
657-27-2 L-Lysine L-赖*酸盐*(代"酸")盐
DP433 血液总RNA提取试剂盒
维生素E油 2-Aminofluorene 10191-41-0
62758-13-8 刃天青 resazurin
L-丝*酸 Hypoxanthine 56-45-1
ARB13362 牛住肉孢子虫(SArcocystIs)酶标法分析 

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