北京现货S1核酸酶优惠价

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百奥莱博专业生产销*(代"售")北京现货S1核酸酶优惠价，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京现货S1核酸酶优惠价
编号：BTN120407
规格：20000U
产地：国产|进口
英文名：S1 Nuclease
品牌：百奥莱博
本产品从Aspergillus oryzae中纯化得到，是单链特异性的核酸内切酶，能将DNA或RNA降解成为酸可溶性5´-P核苷酸，也可以降解双链核酸中的单链部分。本产品可以除去DNA-DNA和DNA-RNA杂交体中的单链部分、可以将双链DNA末端平滑化和进行S1 mapping。本产品在0.4M NaCl，0.6% SDS和0.8M尿素中活性稳定，当反应液中含有40~50%甲醛时需将酶量增加10倍。本产品对热极其稳定，在底物存在下65～70℃仍能表现活性。

产品用途：
1．分子量为32000，且依赖Zn2+的糖蛋白质。
2．最适合的pH为4.5(CH3COONa缓冲液)。
3．必要的辅因子为Zn2+。
4．抑制剂为EDTA溶液(1～20mM)和磷酸盐。抑制剂磷酸盐分别是磷酸(2mM抑制活性50%)、焦磷酸盐(20μM抑制活性50%)、dAMP(85μM抑制活性50%)和dATP(1μM抑制活性50%)。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：(DNA单链部分的特异性分解)
1．将底物DNA与S1核酸酶以及S1核酸酶缓冲液混合，反应体系如下：

 

DNA	1μg
10×S1核酸酶缓冲液	2μl
S1核酸酶(5U/μL)	2μl
超纯水	up to 20μL

2．将反应混合液置于23℃反应15分钟。
3．向反应液中加入2uL自备的0.5 M EDTA溶液，终止反应。
4．用自备的Klenow Fragment或T4 DNA Polymerase把反应液中的DNA片段修复成平滑末端。

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·植物RNA柱式提取试剂盒
编号：BTN71203
英文名称：Plant RNA Column extraction kit
规格：50次
本试剂盒是植物RNA提取试剂盒(BTN3080)的柱式升级产品，它结合了BTN3080高效性(其效果在近五十多种各类植物中得到验证，植物名单见BTN3080产品介绍的附录)和百奥莱博柱式纯化系列产品的快捷性。

试剂盒特点：
1. 操作更加简单快速，处理一个样品只需要约十分钟，比植物RNA提取试剂盒快一倍。
2. RNA纯度更高，平均 OD260/280一般都在2.0左右，能够有效去除大多数植物中的多糖污染。
3.小RNA回收效率更高。
4.适用于所有用植物RNA提取试剂盒能提出RNA的植物(注:对有些植物可能需要在溶液A中额外添加RVC)。
5. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA合成等实验。
6. 性价比高于进口的柱式植物RNA提取产品。
7.一站式，提供RNase-free的样品收集管。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	15ml
溶液C	50ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
RNA洗脱液	10ml
说明书	1份

注：溶液B为淡黄色液体，使用前请观察颜色是否正常。若溶液B有油粒状颗粒及分层，属正常现象，不影响使用。

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 估算组织细胞的用量。每次微量提取一般需要100-200mg植物叶片、或50-100mg植物种子、或200-500mg植物果实。
2. 先将新鲜植物组织剪切成小块(保存在RNAhold中的植物组织需用纸吸去RNAhold液体后再剪切成小块)，放入10-15mL塑料离心管中，加入1mL溶液A，然后用匀浆器匀浆5-20秒。匀浆时会产生泡沫，但不影响提取效果。也可以使用液氮砚磨法破碎植物组织，砚磨完后加入1mL溶液A。注意：溶解溶液A沉淀。溶液A在4℃放置后可能会产生沉淀，使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
3. 将匀浆物或砚磨物转移至干净的1.5mL塑料离心管中(可以不必转移非液体的细胞碎片)。有的植物组织(比如果实)含有大量水份，匀浆液会多于1mL，转移时也只取1mL。
4.在离心管中加入0.3mL的溶液B和0.2mL自备*仿，在振荡器上振荡30秒混匀，此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
5.室温12000～15000g离心3～5分钟，两相间将有约5-10毫米厚的细胞破碎物。
6. 将上清液(约0.6mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中，下层有机相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。最好留下100μL上清液不取。
7. 加入等体积的溶液C，充分颠倒混匀。如果有沉淀产生(对某些植物，属于正常现象)，千万不要去掉沉淀，一定要把所有的混合物上柱。
8. 将一半的溶液(如果有沉淀，则先混匀)转移到离心吸附柱中，13000-15000g室温离心半分钟，弃穿透液。
9. 将剩下的一半溶液(如果有沉淀，则先混匀)转移到同一离心吸附柱中，13000-15000g室温离心半分钟，弃穿透液。
10. 加0.7mL通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。再加0.3mL通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。一般样品如此洗涤两次即可，但如果在第7步加入溶液C后有沉淀产生，则需要洗三次，每次加入的通用洗涤液的量分别为0.4、0.3和0.3mL。
11.室温离心半分钟。此步十分重要，否则残留的乙醇会影响RNA的使用。
12. 将离心吸附柱转移到RNase-free收集管中，加入50-100μl RNA洗脱液，室温放置1-2分钟。
13. 13000-15000g室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
14. RNA完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。
15. RNA产量产率测定：将5-10μl RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度×体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
16. RNA纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。


北京现货S1核酸酶优惠价关键词：BTN120407,S1 Nuclease,S1核酸酶


·RNA溶解液
编号：BTN130505
英文名称：Buffer that dissolves RNA
规格：10mL

·5´末端同位素标记试剂盒
编号：BTN131036
英文名称：DNA 5´End-Labeling Kit
规格：20次
本产品为DNA 5´末端标记系统，利用T4 Polynucleotide Kinase(T4多聚核苷酸激酶)和［γ-32P］ATP 对粘性末端或平末端的DNA或RNA的5´末端进行高效标记反应。原理如下：


产品特点：
1. 使用本试剂盒之前，不需要对 5´末端的磷酸基团进行去磷酸化处理，因为使用的kinase 能使5´末端的磷酸与[γ-32P]ATP的γ-磷酸进行交换。
2. 合成的单链或双寡核苷酸的5´末端游离的OH基团都能通过Kinase反应被标记(或者只是简单的磷酸化)。
3. 提供的两种反应液使交换反应和磷酸化反应都能高效进行，均能得到大于106 cpm/pmol(5´-end)的比活性。

试剂盒组份：

成分	规格
T4 多聚核苷酸激酶(10U/μL)	20μl
5×交换反应缓冲液	100μl
10×磷酸缓冲液	50μl
Control DNA	20μl
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一、交换反应
1. 实验前需自备的试剂：7 M 醋酸铵、100%乙醇、70%乙醇等
2.在微量离心管中制备下列反应液：

成分	加入的体积
自备的5´磷酸化DNA片段	14μL(≤5 pmoles的5´末端)
5×交换反应缓冲液	5μL
[γ-32P]ATP	5μL
T4 多聚核苷酸激酶(10U/μL)	1μL
灭菌的超纯水	补足到25μL

注：5 pmoles的5´末端约等于0.17μg的长100bp的双链DNA。
3. 37℃反应30分钟。
4. 70℃加热5～10分钟使酶失活。
5. 加入10μl的7 M CH3COONH4(pH4.5)。如使用CH3COONa做乙醇沉淀时使其终浓度达300mM。
6. 加入87.5μl(2.5倍)的冷无水乙醇，-20℃放置30～60分钟。
7.离心回收沉淀，用 70%的冷乙醇清洗沉淀，真空干燥。
8. 用适当 Buffer 溶解沉淀。
注：通过第5～8 步操作几乎可以除去大部分未反应的[γ-32P] ATP，如要完全将其除去时，乙醇沉淀后用凝胶过滤等方法精制即可。如需用*酚抽提除去蛋白质时，请在第8 步之后进行。

二、磷酸化反应标记

A. 去磷酸化反应
1. 实验前需自备的试剂：TE 饱和酚/*仿、3 M NaCl 、100%乙醇、70%乙醇、牛小肠碱性磷酸酶(CIAP)等
2.在微量离心管中制备下列反应液：

成分	加入的体积
自备的DNA片段	133μL(≤10μg)
1M Tris-HCl，pH8.0	15μL
牛小肠碱性磷酸酶(CIAP，10～20U/μL)	2μl
灭菌的超纯水	补足到150μL

3. 50℃反应30分钟。
4. 加入150μl的TE 饱和酚/*仿/异戊醇(25：24：1)，充分混匀。
5.离心，取上层(水层)移到另一个微量离心管中。
6. 重复操作 4～5。
7. 加入7.5μl的3 M NaCl(最终浓度150mM)。
8. 加入375μl(2.5倍量)的冷无水乙醇，-20℃放置30～60分钟。
9.离心回收沉淀，用 1mL 70%的冷乙醇清洗后，沉淀真空干燥。
10. 使用 20μl的TE Buffer 溶解沉淀。

B. 磷酸化反应(前反应)
1.在微量离心管中制备下列反应液：

成分	加入的体积
自备的DNA片段	20.5μL(≤5 pmoles的5´末端)
10×磷酸缓冲液	2.5μL
[γ-32P]ATP	1μL
T4 多聚核苷酸激酶(10U/μL)	1μL
灭菌的超纯水	补足到25μL

2. 37℃反应30分钟。
3.下面的操作与交换反应的第4-8 步操作相同。

三、合成DNA 寡核苷酸的标记
1.在微量离心管中制备下列反应液：

成分	加入的体积
Oligonucleotide DNA with free 5´-OH(5～10 pmoles)	≤3μL
10×磷酸缓冲液	2.5μL
[γ-32P]ATP	1μL
T4 多聚核苷酸激酶(10U/μL)	1μL
灭菌的超纯水	补足到25μL

2. 37℃反应30分钟。
3.下面的操作与交换反应的第4-8 步操作相同。

四、合成DNA 寡核苷酸的标记
当掺入水平很低的时候，需要使用本步骤，即通过体积排阻色谱或过滤试剂盒除去未反应的标记。Sephadex G-50 层析柱(需另购)对于去除未掺入的dNTPs效果很好，它还能大幅减少小于20个碱基的DNA 寡核苷酸和小于20bp的双链DNA的量。使用之前需要在70℃加热5～10分钟以使T4 多聚核苷酸激酶失活。Sephadex G-25 层析柱可以用来纯化长度不小于10个碱基的寡核苷酸。

注意事项：
1.缓冲液可在室温融解。融解后立即置于冰中，使用前充分混匀。
2. 5×交换反应缓冲液于-20℃冻结保存时会有白色浑浊出现，但不影响反应效果。
3.酶切得到的DNA片段需经乙醇沉淀等方法纯化。
4. 当用于交换反应的DNA在5 pmoles以上(约1,000bp以上)时，标记效率有时会低于106 cpm/pmol。
5. 如果交换反应所用 DNA低于500bp时，标记效率有时会有所降低。
6. 若不进行放射线标记，仅使用本试剂盒做5´末端磷酸化反应时，反应体系中的［γ-32P］ATP可用5μl的10mM ATP 代替。
7. 磷酸化反应时的［γ-32P］ATP可用［γ-35S］ATP 替代。

使用举例：
按照使用方法中交换反应和合成DNA 寡核苷酸的标记的实验操作，取λ-BstP I，λ-Hpa I，λ-EcoT22 I 各3 pmols，用［γ-32 P］ATP 通过正向磷酸化反应或交换反应标记。各DNA片段的放射自显影结果如下所示：



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丁香酸 GSH 530-57-4

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