北京现货Benzonase核酸酶库存

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百奥莱博专业生产销*(代"售")北京现货Benzonase核酸酶库存，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京现货Benzonase核酸酶库存
规格：500U
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
Benzonase是由粘质沙雷氏菌分泌的、由两个大小为26 kD的亚基组成的一种广谱核酸酶，由Benzon公司最先商品化，故名Benzonase。其活力比DNase I 强34倍，能以相同的效率酶切单联和双链DNA和RNA，将其消化成3-5 碱基长度(杂交限度以下)的5´-单磷酸寡核苷酸。其活性需要Mg2+，最佳pH在6-10 之间，最适温度在35-44℃。本产品是在野生型的Benzonase的基础上经过基因工程改进而得。

产品特点：
1．微量本产品就能高效降解所有形式(包括单链，双链，线性和环状)的DNA和RNA，尤其适合从细胞裂解物中去除核酸，降低样品粘度而不影响蛋白电泳图谱。
2．在有变性剂存在的条件下(如4M 尿素)还有活性，可以直接加入很多蛋白裂解液中。
3．降解核酸完全，符合FDA 关于核酸污染的处理规程，可以用于工业生产。
4．可以用于蛋白提取、2D凝胶电泳、Western Blot、免疫沉淀等实验。

储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期两年。

活性定义：在标准反应体系内30分钟内使OD260改变1.0的酶量，相当于彻底降解37μg DNA的酶量。

使用方法：

一、酶的稀释
本产品浓度为1U/μL，如果需要稀释Benzonase，需要自备酶稀释液，稀释液的配方是：50mM Tris-HCl pH8.0，20mM NaCl，2mM MgCl2。
在稀释液中的Benzonase 只能在4℃放置数天。

二、用于去除核酸的标准试验(用户可以以此为参考设计自己的实验)将500ng鲑鱼精DNA 溶解在50mM Tris-HCl pH8.0，1mM MgCl2，0.1mg/mL BSA中，然后加入90U的Benzonase，37℃保温4小时，只剩下0.2ng可以杂交检测的DNA，如果23℃保温4小时，只剩下0.5 ng可以杂交检测的DNA。如果0℃保温4小时，只剩下1ng可以杂交检测的DNA。

三、用于降低E.coli 裂解液的粘度的标准试验(用户可以以此为参考设计自己的实验)
将7.5 g E.coli 悬浮于15mL悬浮液(10mM Tris-HCl pH9.0，1mMEDTA，6mM MgCl2)中，加入适量的本产品，然后将悬浮液经过弗氏压碎器破碎后迅速置于0℃冰上。

客户可以根据下表自行选择加入本产品的量

 

本产品在裂解液中的浓度	得到不粘稠裂解液所需孵育时间 (不粘稠是以得到可滴落的E.coli裂解液为标准)
0.24U/mL	＞60min
2.4U/mL	15min
8U/mL	5min
24.0U/mL	1.25min

答客问：
Q：什么情况下应该使用Benzonase核酸酶？
A：Benzonase核酸酶的应用领域包括：降低样品粘度以利操作(例如重组蛋白纯化，哺乳动物细胞裂解特下游要求粘度较低等情况)：减少存放的外周血单核细胞(PBMC)的结块现象，蛋白复性前高质量包涵体的制备，去除带负电荷的核酸对双向SDS-PAGE蛋白样品的影响。
Q：怎样灭活Benzonase核酸酶？如何去除？
A：采用EDTA螯合金属离子会可逆地抑制Benzonase活性，极端条件会造成不可逆失活，例如100mM NaOH，70℃处理30分钟等，Benzonase可以用色谱法从目的产物中分离出去，由于这种核酸内切酶极其稳定，建议在终产物中要求不含有核酸酶的应用中不要使用Benzonase。
Q：我的Benzonase核酸酶遗忘在桌上了，还能用吗？
A：根据破坏性稳定性测试，Benzonase 核酸酶非常稳定，即使在37℃下孵育数月仍能保持>90%的活性。
Q：我需要使用别的缓冲液，哪些条件是Benzonase 核酸酶必需的？哪些条件会降低它的活性？
A：Benzonase核酸酶的活性需要1-2mM Mg2+，而在单价阳离子浓度>50%，磷酸浓度>20mM，硫*(代"酸")铵浓度>25mM等情况下，Benzonase的活性会降低50%
Q：Benzonase核酸酶与蛋白酶抑制剂混合物兼容吗？
A：可以兼容，但是对于含有EDTA 配方的蛋白酶抑制剂混合物要特别小心，EDTA浓度大于1mM时会抑制Benzonase的活性。
Q：我的目的蛋白不溶，需要进行变性条件纯化，Benzonase 核酸酶能在尿素环境消化核酸吗？
A：实际上Benzonase核酸酶在有尿素(浓度可达6M)的情况下会增加活性，在尿素浓度为6M时活性先增加，随着时间处长活性又有降低。
尿素7M时，Benzonase核酸酶15分钟后出现变性并失活。但是在酶失活前多数核酸已经降解了。如果Benzonase 核酸酶的原浓度较高时会部分补偿7M 尿素的影响。

北京现货Benzonase核酸酶库存正在火爆热销，除此之外，为您推荐下别热销产品：

·糖原溶液(10mg/mL)(分子生物学级)
编号：BTN131190
英文名称：Glycogen Solution
规格：1mL
本产品为分子生物学级糖原溶液，浓度为10mg/mL，不含DNase，RNase。可直接用作沉淀DNA或RNA的辅助沉淀剂使用。

储存条件：室温运输，4℃保存，有效期一年。

·柱式葡萄球菌RNA提取试剂盒
编号：BTN130844
英文名称：Staphylococcus RNA Column extraction kit
规格：50次
本产品为分子生物学级糖原溶液，浓度为10mg/mL，不含DNase，RNase。可直接用作沉淀DNA或RNA的辅助沉淀剂使用。

储存条件：室温运输，4℃保存，有效期一年。

·牛小肠碱性磷酸酶(CIAP)
编号：BTN120404
英文名称：Alkaline Phosphatase,Calf Intestinal
规格：500U
牛小肠碱性磷酸酶与E.coli来源的碱性磷酸酶相同，催化所有磷酸单酯的水解，不能催化磷酸二酯以及磷酸三酯的水解，对ATP等的焦磷酸键水解速度较慢。由于CIAP处理后的DNA片段缺少连接酶所要求的5´磷酸末端，因此它们不能进行自连接。这个特性可以在克隆时降低载体DNA的背景。

产品用途：
1．去除载体DNA片段的5´-末端的磷酸基；
2．防止克隆载体的自连接；
3．蛋白质丝*酸、苏*酸和酪*酸的去磷酸化；
4．为5´末端标记准备模板。

产品组成：

成份	规格
CIAP(10～30U/μl)	500U
10×CIAP Buffer	0.5mL
使用手册	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：在37℃、pH9.8的条件下，1分钟内水解对硝基*(代"*")磷酸盐生成1μmol的对硝基*(代"*")酚所需要的酶量定义为1个活性单位。

纯度：
1．30 U的本酶和1μg的λDNA-Hind III片段在37℃下反应16小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
2．30 U的本酶和1μg的Closed circular(RFI)pBR322 DNA在37℃下反应1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
3．18 U的本酶和1μg的16S，23S rRNA在37℃下反应16小时，RNA的电泳谱带不发生变化。

使用举例：
1．在微量离心管中配制50μL反应体系：

成分	加入量
DNA Fragment in TE Buffer	1～20pmol
10×CIAP Buffer	5μl
CIAP(10～30units/μl)	1-2μl
补水到	50μl

2．37℃或50℃反应30分钟。或者先37℃反应15分钟，再50℃反应15分钟。注意：单链DNA和具有5´突出末端的DNA在较低温度下(如37℃)即可去磷酸化，而具有3´突出末端的DNA或平末端DNA需要较高温度(如50℃)才能去磷酸化。
3．*酚/*仿/异戊醇(25:24:1)抽提2次。注意：如果早在*酚抽提之前，用自备的蛋白酶K降解CIAP酶，则效果更好。具体做法是：加入EDTA和SDS使其终浓度为5mM EDTA和0.5% SDS，最后加入蛋白酶K溶液，使其终浓度为50μg/mL，然后56℃处理30分钟，再75℃孵育10分钟。然后用于*酚/*仿/异戊醇抽提。
4．*仿/异戊醇(24:1)抽提1次。
5．添加2.5μl的3M NaCl(终浓度150mM)。
6．添加125μl的(2.5倍量)冷乙醇，在-20℃下放置30～60分钟。
7．13000g离心20分钟后，小心去上清。
8．用1mL 75%乙醇洗涤一次。
9．干甩数秒，小心吸弃上清。
10．用20μl以下的TE Buffer溶解DNA沉淀待用或放-20℃长期放置。


北京现货Benzonase核酸酶库存关键词：Benzonase Nuclease,BTN101001,Benzonase核酸酶


·一管式点突变试剂盒
编号：BTN100212
英文名称：One-Tube Mutagenesis Kit
规格：10次
基因的定点突变是重要的分子生物学技术，广泛用于载体构建、基因改造、蛋白质功能研究等领域。但传统的方法需要使用单链DNA 模板，而得到单链DNA 模板又需要先将基因克隆到类似M13 这种载体中，操作过程冗长。为了克服这些缺点，本公司将突变位点设计到一对互补的引物中，用高保真扩增质粒模板，然后用Dpn I 去除原始的甲基化模板，新合成的DNA 通过互补形成带切口的双链质粒，直接用于转化感受态细菌。

产品特点：
1. 直接使用质粒DNA作为模板，免去了制备单链DNA的步骤。
2.基于高保真PCR，对模板DNA 序列没特殊要求，可以用于突变任何序列。同时对模板的需求量很少。
3.一管式，全部在一个优化的缓冲体系中完成，非常简单。
4. 使用Dpn I 去除未突变模板，突变效率高达90%。
5.可用于制备点突变，缺失突变和插入突变。
6. 本产品A型适用于8 kb以下，B型适用于8-15 kb。

试剂盒组成：

成分	10T(A型)	10T(B型)
高保真酶A型	10μl	无
高保真酶B型	无	10μl
5×高保真酶Buffer A型	100μl	无
5×高保真酶Buffer B型	无	100μl
dNTP(2.5mM each)	50μl	50μl
Dpn I酶	10μl	10μl
超纯水	1ml	1ml

储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一、引物设计及注意事项
用于特定基因突变的引物必须用户单独设计，请参考如下一些基本原则进行设计。
1. 共需设计两条完全互补的一对引物，它们覆盖要扩增的突变区位点，突变位点最好放在引物的中心。可以先集中设计一条，然后就可得互补的另一条引物。
2.引物的长度通常为25-45个碱基。引物中突变位点任何一侧都必需满足Tm大于45的条件，Tm 计算方式为Tm=4×(GC 碱基数)＋2×(AT 碱基数)。例如引物agtcaggccaattcgAAGcagtcgaattgccaag 就达到此标准，它的突变位点AAG 所放位置使左侧Tm＝46；右侧Tm＝48，均大于45。
3. 尽量把引物的GC含量控制在40％-60％，结尾的1-3个碱基最好是G或C。
4. 尽量使引物不要产生非常稳定的二级结构和引物二聚体。
5. 最好使用经过PAGE 纯化的引物或更高纯度的引物。

二、待突变模板质粒的选择
1. 必需使用从dam＋的大肠杆菌(这类菌中质粒可以被甲基化)中抽提得到的质粒用于基因定点突变，否则Dpn I 不能把没有酶切的质粒DNA 切除，产生大量的假阳性。常用的大部分大肠杆菌都是dam＋的，包括DH5α、JM109等。不能使用JM110和SCS110以及其它dcm-菌种。
2. 待突变质粒和目的基因的GC含量应该在40-55％，没有任何GC含量超过70%、长度在50bp以上的区域。如果质粒GC含量过高，请先把目的基因克隆到其它合适的载体上，再进行基因定点突变反应。如果目的基因GC含量过高，而突变位点不在高GC含量区域，可以先把该基因的不含高GC含量的一个区域克隆出来，进行定点突变，然后再把突变后的片断克隆回原基因中。如果突变位点在高GC 区，则可以使用高GC 专用PCR反应试剂。

三、基因定点突变反应
1.在一个塑料离心管中加入下列成分：

待突变模板质粒	0.1-0.5μg
5×高保真酶Buffer	10μl
引物一(10-20 uM)	1μl
引物二(10-20 uM)	1μl
dNTP Mix(2.5mM each)	4μl
补水到	49μl

2. 加入1μl高保真DNA聚合酶，混匀，如果PCR仪没有热盖则需要加少量石蜡油。放入PCR仪器中按下面参数进行PCR：

步骤	温度	时间	循环数
变性	95℃	1min	1次
PCR	95℃	40s	18次
	60℃	1min
	68℃	1min/Kb
延伸	72℃	10min	1次
保存	4℃	长时间保持

四、Dpn I消化
PCR反应后，直接在PCR反应体系中加入1μL Dpn I内切酶(该酶在甘油保存液中会下沉到管底，故用前需要充分混匀)。DpnI可以酶切双链都被甲基化的模板质粒，也能降解一条链被甲基化的双链质粒。混匀后37℃孵育2小时后样品可以直接用于转化，或者-20℃保存备用。

五、转化、挑克隆鉴定：
每100 微升感受态细菌(转化效率必须在107/μg以上)中可以加入5-10微升经过Dpn I 消化后的突变产物，按照所使用的感受态细菌的操作方法进行操作。如果PCR 使用了石蜡油，在转化时千万别把它带入转化反应，否则会严重影响转化效率。
在涂板前通过离心浓缩的办法，把所有被转化后的细菌全部涂布到含有适当抗生素的平板上培养过夜。通常会得到50个以下的克隆，可按常规方法制备质粒并测序。

六、常见问题：
1.转化后没有克隆或克隆数极少：
(1)感受态细菌效率不够高，请检测一下感受态细胞的效率，确保转化效率在107/μg。
(2)把Dpn I 消化后的产物用常规的乙醇沉淀浓缩，这样就可以把所有的产物全部用于转化。
(3)优化基因定点突变中的PCR参数。可以把最初的95℃变性时间延长为2分钟，循环中95℃变性的时间延长至1分钟，把循环中的68℃的延伸时间改为1.5分钟/kb 至2分钟/kb，退火可以改为60-55℃或65-55℃等的touch down，退火时间也可以适当延长。
(4)引物设计有问题。通过突变反应中的PCR 没有很好地扩增出预期的突变质粒。
2.有克隆，但没有或很难检测到预期的突变克隆：
使用的待突变的模板质粒量过多，导致Dpn I 消化时不完全，可减少质粒用量。
3. 有突变克隆，但突变位点不是预期的位点：
(1)引物设计不佳，退火温度过低，导致引物退火到错误的地方。
(2)引物质量较差，没有经过PAGE 纯化。这样引物中通常会含有比设计的引物要短的特异性较差的引物，容易导致非预期的突变。


北京现货Benzonase核酸酶库存关键词：Benzonase Nuclease,BTN101001,Benzonase核酸酶

84366-81-4 核黄素腺嘌呤二核苷酸二* FAD
CYB166019-D 羊抗小鼠IgG-GOLD
BL1388 SABC兔IgG-AP kit
PY04-074  50%卵黄液  5ml/支×10支  每支添加于95ml甘露醇卵黄多粘菌素琼脂培养基(MYP)基础中，用于蜡样芽孢杆菌的固体平板计数
4-*-1-*酚 Lincomycin hydrochloride 604-44-4
76738-62-0 Paclobutrazol 多效唑
ARB12405 大鼠组织多肽抗原(TPA)酶联免疫定量检测 Rat tissue polyPeptide antigen,tpa ELISA KIT
ARB11195 人组织多肽抗原(TPA)酶免分析 Human tissue polyPeptide antigen,tpa ELISA KIT
ARB14226 禽流感H5亚型抗体(AIV-H5-Ab)定量分析 
F040311 小鼠IgM抗原 Mouse IgM
HC0339 雷勃大容量电动移液器
72-57-1 Trypan Blue  台盼蓝
辅羧酶 Boc-L-Glutamic acid 5-benzylester 154-87-0
N-乙酰-L-缬*酸 TOPS sodiu*(代"m") salt 96-81-1
HC0081 PCR管(鼓盖)
ARB10272 人干扰素调节因子(IRF)elisa检测 Human interferon regulatory factor,irf ELISA KIT
PY02-227  60g/L*化*蛋白胨肉汤  250克  
50-89-5 Thymidine  胸腺嘧啶核苷
BTN130519 巯基磁珠 Magnetic beads,Sulfydryl
吐温80 Sodium cromoglycate 9005-65-6
α-酮戊二酸 DMACA Reagent 328-50-7

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